补肾单药和复方对急性电离辐射损伤后小鼠外周血作用的研究

目的 探究补肾单药（CP）和复方（KS）对急性电离辐射损伤后小鼠造血的调控作用。方法 9~10周龄C57BL/6小鼠分成空白对照组、照射组、照射+KS和照射+CP 4组,照射组、照射+KS和照射+CP三组进行5.5 Gy ¹³⁷Cs-γ射线单次全身照射,剂量率1 Gy/min。照射后,照射+KS组按1.5 g/kg体重灌服KS药液,照射+CP组按2.7 g/kg体重灌服CP药液,其余两对照组灌服等体积生理盐水。每月取血监测血常规。另取小鼠按同样方式分组,照射后连续给药一个月,检测间充质干细胞集落形成。结果 照射+KS组和照射+CP组在前两个月的白细胞和淋巴细胞高于照射组,集落数也多于照射组。结论 KS和CP可以促进电离辐射损伤后小鼠的造血恢复。     

经典Wnt/β-catenin信号通路在前列腺癌治疗中的新靶点

前列腺癌的发生与发展经历一系列复杂的过程,其特点是病程长且症状隐匿,发现后多处于晚期,一旦发展为雄激素非依赖性前列腺癌,往往给治疗带来难度。细胞内信号通路的异常是肿瘤发生发展的重要机制之一,其中经典Wnt信号通路在前列腺癌中具有重要作用。文章主要关注该信号通路中相关分子的新机制,以期能为抗肿瘤药物研发提供新的靶点。     

抗人纤维蛋白噬菌体单链抗体库的构建和鉴定

目的应用噬菌体展示技术构建抗人纤维蛋白单链抗体(scFv)文库,筛选高亲和力抗人纤维蛋白scFv并进行鉴定。方法利用人纤维蛋白免疫小鼠,分别扩增小鼠VH和VL基因,经重叠延伸聚合酶链反应(PCR)将VH和VL基因拼接成scFv基因,SfiⅠ/NotⅠ双酶切克隆入pCANTAB 5E噬菌粒载体,转化E.coli TG1构建成库,采用人纤维蛋白原对抗体库进行负筛选,人纤维蛋白进行正筛选,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测阳性克隆的抗原特异性并进行测序分析。结果构建了库容为8.7×106的抗人纤维蛋白scFv库,ELISA测定显示scFv具有较高的抗原特异性;抗人纤维蛋白scFv基因序列长732 bp,编码244个氨基酸,VH和VL基因均有明确的3个互补决定区和4个骨架区。结论成功构建了抗人纤维蛋白scFv文库,并筛选到高亲和力的抗人纤维蛋白scFv,为新型血栓显像剂的开发奠定了实验基础。     

不同剂量X射线对BALB/c小鼠放射性皮肤损伤程度比较

目的 对不同剂量X射线诱发BALB/c小鼠放射性皮肤损伤情况进行研究,为建立基础医学中动物急性放射性皮肤损伤模型提供实验依据。方法 采用剂量均一、安全性高的Rs2000系列生物学X射线辐照仪以40、50、60 Gy照射BALB/c小鼠下肢,对皮肤创面进行连续观察并对其评分,在辐照后32天取不同剂量组小鼠损伤皮肤作HE染色,比较损伤皮肤病理学变化。结果 BALB/c小鼠易感辐射,其皮肤损伤症状在照射后10天左右出现,50、60 Gy两组小鼠在32天后皮肤不再恶化,而低剂量组病程仍在发展。结论 BALB/c适合做放射损伤模型,且40 Gy更容易获得较佳的急性放射性皮肤损伤模型。     

人心肌肌钙蛋白Ⅰ胶体金免疫层析试纸条的研制

目的建立一种简便实用胶体金免疫层析检测方法．用于人心肌肌钙蛋白I（cTnI）的快速检测。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,以鼠源抗cTnI单克隆抗体进行胶体金标记,以兔源抗cTnI多克隆抗体固定于硝酸纤维素膜作为捕获抗体,采用免疫层析技术制备快速检测cThI胶体金免疫层析检测试纸条。并与国外生产的胶体金试剂盒作对比。结果该试纸条检测范围质量浓度为5ng／mL～1μg／mL;灵敏度质量浓度为5ng／mL：特异性：与肌红蛋白、肌酸磷酸激酶同工酶、cTnT、cTnC无交叉反应：与国外胶体金试纸条检测结果比较阳性符合率为96．4％,阴性符合率为100．0％。结论成功建立cTnI胶体金免疫层析检测方法,该方法灵敏度高,特异性强,检测速度快,适于急性心肌梗死的早期诊断及科研工作需要．     

重组人Hexastatin融合蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达及其纯化

目的构建人Hexastatin蛋白原核表达载体,大量表达并纯化Hexastatin蛋白,为其在体内外的活性研究奠定基础。方法提取人食管癌EC9706细胞总RNA,通过RT-PCR方法扩增人Hexastatin基因,导入pMD18-T载体测序,然后克隆至pMAL-c4x表达载体,IPTG诱导表达,并利用Amylose亲和树脂纯化融合蛋白,产物进行Westernblot鉴定。结果经PCR扩增成功获得了687bp的人Hexastatin基因,测序正确。重组人Hexastatin基因在BL21菌体中获得高效可溶性表达,表达的可溶性蛋白占总蛋白量的24.8%,纯化后的MBP-Hexastatin融合蛋白纯度可达90%,Westernblot证实表达蛋白为目的蛋白。结论人Hexastatin基因克隆、表达及纯化的成功,为进一步在体内外研究其生物活性奠定基础,同时也为肿瘤的生物治疗提供了新的方法。     

17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯联合γ射线对黑色素瘤B16生长的抑制作用

目的 建立移植性黑色素瘤B16小鼠肿瘤动物模型,观察17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯抗肿瘤效应及其对免疫器官的影响,探讨合用137Csγ射线是否具有抑瘤增效的作用.方法 将80只IRM-2荷瘤小鼠用完全随机法分为对照组、照射组、17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯低、中、高(5、7.5、10 mg/kg)药物组及药物联合照射组,每组10只.药物组与药物联合照射组对应性腹腔注射相同剂量17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯,1次/d,连续7d.药物联合照射组和照射组于给药的第4天进行全身l Gy γ射线照射,1次/d,连续5 d.观察各组小鼠肿瘤抑制率及骨髓有核细胞数、胸腺与脾指数指标,比较各组间的差别.结果 17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯各剂量组瘤重明显小于对照组(t=4.58、9.07、6.67,P＜0.05),联合137Csγ射线后能提高抑瘤效果与对照组比较(t=8.09、10.35、6.71、P＜0.05),17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯各组骨髓有核细胞数、胸腺指数和脾指数均高于对照组,骨髓有核细胞数与对照组比较差异有统计学意义(t =2.638、3.803、2.841,P＜0.01),高剂量组的胸腺指数和脾指数与对照组比较差异有统计学意义(t =2.599、2.540,P＜0.01),结论 17aα-D-高炔雌二醇-3-乙酯抑制小鼠黑色素瘤B16的生长,对造血和免疫系统可能有保护或促进恢复的作用.     

人tumstatin 基因的克隆表达及其鉴定

 目的 重组表达人tumstatin，为人tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。方法 提取HEK293细胞总RNA，通过RT-PCR扩增人tumstatin基因，导入pMD19-T，测序，然后亚克隆至pET28a，IPTG诱导表达，产物进行SDS-PAGE分析和Westernblot鉴定。结果 提取的总RNA经电泳，有清晰的28S和18S两条带。RT-PCR扩增产物长度与理论值750bp相一致。测序证实tumstatin基因正确插入载体中。重组人tumstatin在大肠杆菌中高效表达，表达量约占菌体总蛋白量的30％。Westernblot证实所表达蛋白为目的蛋白。结论 重组人tumstatin蛋白在大肠杆菌中高效表达，为进一步的tumstatin的肿瘤受体显像奠定基础。     

核酸杂交的二次酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析

目的建立一种超灵敏的用于核酸杂交分析的方法。方法通过二次酶放大、PCR扩增、Tb螯合物和时间分辨测量技术,测定前列腺特异抗原（PSA）DNA。结果靶PSADNA测定的标准曲线线性范围大于两个数量级;灵敏度为10pmol/L（0.5fmol/孔）;当靶PSADNA为10、30和60pmol/L时,准确度和精密度分别为77%～95%和12.9%～15.3%。结论本法是一种超灵敏的、简捷和快速的全新分析方法,有很好的应用前景。