pEGFP-smac重组质粒的构建及在sw-480结肠癌细胞中的表达

目的构建一种含凋亡激活因子(second mitochondrial activator of caspase,SMAC)的重组质粒pEGFP-smac,观察其在结肠癌细胞中的表达,为探讨SMAC在结肠癌中抗凋亡作用的分子机制,为结肠癌的治疗提供理论依据。方法从sw-480结肠癌细胞中提取总RNA,以RT-PCR技术扩增SMAC全长基因后,与绿色荧光表达质粒pEGFP-N1构建pEGFP-smac重组质粒,转染sw-480细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光的表达,并对表达产物进行Western blot鉴定。结果 RT-PCR产物及含有重组质粒的菌落PCR产物经琼脂糖电泳,在预期位置(720 bp)处均有目的条带出现;重组质粒成功转染sw-480细胞,在荧光显微镜下强绿色荧光蛋白表达,Western blot鉴定结果显示pEGFP-smac上的SMAC基因在sw-480细胞中正确表达。结论成功构建pEGFP-smac重组质粒,可为进一步研究SMAC蛋白的功能提供重要的分子工具。     

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义

【摘要】 目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2） 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征,探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。 方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达;利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达;应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。 结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达;实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达,具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核;间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。 结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达,并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位,极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程,其作用机制值得进一步深入研究。     

氢气疗法通过抑制NF-κB通路促进巨噬细胞向M2亚型极化

目的 探讨氢气疗法减轻放射性肺损伤的作用及其具体作用机制。方法 将40只C57BL/6小鼠,随机分为正常对照组、模型组、氢气治疗一组和氢气治疗二组。构建放射性肺损伤小鼠模型。HE染色观察小鼠肺组织病理变化;免疫荧光染色技术分别检测M1、M2亚型巨噬细胞表面分子标志物的表达情况,观察巨噬细胞极化情况;免疫组织化学检测肺组织中细胞因子白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素10(IL-10)的表达变化;Western blot检测NF-κB p65和P-NF-κB p65的表达情况。结果 HE染色显示,与对照组相比,模型组肺组织肺泡间隔水肿增厚、血管扩张充血,炎细胞浸润,而氢气治疗组病变比模型组明显减轻,炎症反应减弱,且治疗二组较治疗一组明显。免疫组化结果显示,与对照组相比,模型组细胞因子IL-6和TNF-α表达明显升高,而治疗组较模型组表达明显降低,治疗组抗炎因子IL-10较模型组表达升高。且治疗二组比治疗一组明显。免疫荧光显示,与对照组相比,模型组M1亚型巨噬细胞表面分子标志物表达上调,治疗组表达明显下调,同时M2亚型巨噬细胞表面分子标志物表达上调,且治疗二组...     

女士谨防泳池隐形杀手

炎热的夏天,游泳是人们消夏解暑的首选,特别是对于白领女性,游泳不仅是一项运动,更是缓解压力的消遣方式.但是,游泳场所的卫生状况却常常被忽视,由于女性生理的特殊性,看似干净卫生的泳池,其实潜伏着威胁女性健康的隐形杀手,因此,在公共游泳池游泳时要特别注意卫生和健康保护.     

卫生监督体制及其经费来源探讨

<正> 近几年来,我国陆续颁布了一些卫生法规,但在执行过程中还存在着较多的问题,主要地没有一支综合专业执法队伍;重复进行卫生监督;不利监督队伍的建设的执法能力的提高。笔者针寻上述问题就卫生监督体制及其经费来源作以初步探讨。首先论述了卫生监督工作应体现国家监督、行政执法,卫生行政部门成立监督处(科),下设监督支队、大队、中队,负责卫生防疫工作中的所有执法监督工作。在这种监督体制下经费的来源关系重大,笔者认为:社会主义卫生防疫事业不应过多强调商品性,用有偿服务解决监督队伍经费不利执法监督任务的完成,同时也易使防疫部门同监督队伍之间     

香木煎剂外洗治疗扁平疣50例

<正> 治疗方法:香附、木贼、大青叶、板蓝根各30克,加水至500毫升,煎沸3—5分钟,先熏,待温后用力搽患处,每晚一次,每次20分钟,每剂可用三     

阴腹联合手术治疗子宫脱垂21例分析

目的探讨子宫脱垂手术治疗的方法,以减少术后复发率。方法1999年2月至2003年6月38例Ⅱ~Ⅳ度子宫脱垂患者随机分为2组:即观察组和对照组,对照组17例,行曼市手术或经阴子宫切术+阴道前后壁修补术;观察组21例,行经腹子宫悬吊术+阴道前后壁修补术。结果观察组与对照组术后2年疗效评价,差异有显著性意义(P<0.01)。结论观察组疗效优于对照组,阴腹联合手术方式值得推荐。     

近交系中国地鼠山医群体遗传结构的随机扩增多态分析

目的应用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对近交系中国地鼠山医群体的遗传结构进行多态分析。方法采用30条10bp引物对中国地鼠山医群体的A家系和E家系共24个个体进行RAPD扩增,分析家系的遗传纯度,探讨两个家系的亲缘关系。结果30条随机引物对供试的24个个体产生255条谱带。单个引物扩增的谱带数是2~17条,平均8条。所有样品的相似系数0.9431~0.9955之间变动,平均相似系数为0.9749。根据扩增出的RAPD图谱,运用SPSS软件包中的Wardmethod法进行聚类分析。结论供试中国地鼠A家系和E家系两个家系间存在一定程度的差异,中国地鼠A家系和E家系分别先聚为一类,中国地鼠群体间的分子聚类关系与各群体间的亲缘关系基本一致。     

剖宫产术后应用自控硬膜外镇痛对母乳喂养的影响

目的　探讨剖宫产术后应用自控硬膜外镇痛 (PCEA)对母乳喂养的影响 ,提高剖宫产术后母乳喂养率。方法　选择 2 6 0例剖宫产手术孕妇 ,在硬膜外麻醉下行剖宫产术 ,术毕随机分为两组 :镇痛组和对照组 ,镇痛组 130例采用镇痛泵经硬膜外腔匀速注入芬太尼及布比卡因等复合液 ,对照组 130例术后拔管 ,疼痛时肌注盐酸哌替啶。观察产妇情绪、泌乳始动时间、产后 2 4小时内血清泌乳素 (PRL)、泌乳量。结果　镇痛组泌乳始动时间明显早于对照组 (P<0 .0 1) ;镇痛组产妇情绪安定、PRL、泌乳量均分别明显高于对照组 (P <0 .0 1)。结论　剖宫产术后应用PCEA有利于提高和促进母乳喂养。     

氟致内质网应激性凋亡的研究进展

氟中毒会诱发细胞凋亡,引起骨相和非骨相组织损伤,从而影响人体健康,但其作用机制尚不明确。目前研究显示,内质网应激诱导的细胞凋亡可能与氟致机体各系统损伤有关。本文叙述了内质网应激的发生、未折叠蛋白反应的三条通路、内质网应激性凋亡在氟致机体损伤中的作用,得出内质网应激主要通过诱导细胞凋亡在氟致机体损伤中发挥作用的观点。