减毒鼠伤寒沙门菌作基因递呈载体的体外试验

目的　体外情况下验证鼠伤寒沙门菌作为基因递呈载体 ,将基因转染入真核细胞的能力 .方法　构建增强绿色荧光蛋白 (EGFP)真核表达载体 pc DNA3.1(+) / EGFP,将重组 pc DNA3.1(+) / EGFP质粒和 pc DNA3.1(+)空载体用电穿孔法分别转入减毒鼠伤寒沙门菌 .分别用 2种重组细菌体外情况下感染小鼠腹腔灌洗巨噬细胞 ,培养 4 8h后 ,流式细胞仪检测两组小鼠巨噬细胞荧光强度 ,验证鼠伤寒沙门菌作为基因递呈载体的能力 .结果　成功构建了 pc DNA3.1(+) /EGFP重组鼠伤寒沙门菌 ;感染细胞培养 4 8h后 ,流式细胞仪检测表明 pc DNA3.1(+) / EGFP重组减毒鼠伤寒沙门菌感染的小鼠巨噬细胞荧光细胞百分比为 4 0 .6 % ,荧光强度为0 .92 7,均明显高于对照组 (分别为 3.8% ,0 .345 ,P<0 .0 1) .结论　减毒鼠伤寒沙门菌是一种有效的基因递呈工具 ,可将外源基因转入真核细胞并在其中表达 ,为进一步应用其研制口服 DNA疫苗奠定了基础 .     

KAll基因在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及其意义

目的研究转移抑制基因KAIl在肝硬化和肝细胞癌组织中的表达及该基因与肝细胞癌患者临床资料间的关系.方法采用Northern blot方法研究20例肝细胞癌组织、14例肝硬化组织和10例正常肝组织中KAll基因mRNA的表达水平,经mRNA的定量分析及统计处理判定KAIl基因与肝细胞癌患者临床特征的关系.结果肝硬化和肝细胞癌组织中KAll mRNA表达水平(0.113±0.110;0.139±0 078)显著低于正常肝组织中的表达(0.316±0.121),(P=0.0003;P=0.0000);肝硬化和肝细胞癌组织中KAll基因mRNA的表达无显著差异(p=0.4152);KAIlmRNA在不同分化程度的肝细胞癌组织中的表达无显著差异(P=0.8261),而Ⅲ期肝细胞癌组织中的KAll基因表达显著低于Ⅱ期的肝细胞癌组织(P=0.0221)结论转移抑制基因KAI1在肝硬化阶段亦有低表达;肝癌组织中KAI1基因的低表达与肝癌的转移有关.     

纳络酮对油酸型ARDS大鼠的治疗作用

将30只健康的Wistar大鼠随机分为对照组、油酸组、纳络酮组,由股静脉注入油酸0.1 ml/kg建立急性呼吸窘迫综合征(ARDS)模型,测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、内皮素-1(ET-1)和肺组织丙二醛(MDA),并计算左肺湿/干重比值,并行肺组织病理学观察.结果 显示,油酸组与对照组比较,左肺湿/干重比值、血清中TNF-α、IL-1β及血浆ET-1含量明显升高,肺组织中MDA含量明显升高,肺组织出现明显病理损害,纳络酮组动物肺损伤轻于油酸组.认为纳络酮可抑制TNF-α、IL-1β、ET-1、MDA升高,对实验性大鼠油酸ARDS有一定的治疗作用.     

重症肌无力致病性自身抗体的人工构建

目的 构建一株具有致病性的人抗乙酰胆碱受体（AchR）自身抗体，用于诱导猴实验性自身免疫性重症肌无力（EAMG）模型。方法 将分离自重症肌无力（MG）患者胸腺的抗AchR抗体的抗原结合片段（Fab637）克隆至含有免疫球蛋白（IgG1）基因的载体pIgG1，构建能在哺乳类细胞表达完整IgG1类抗AchR抗体（IgG1-637）的重组表达载体（pIgG1-637），将pIgG1-637转染CHO-k1细胞系，筛选出稳定表达IgG1-637的细胞株扩大培养。将纯化的IgG1-637注射5只恒河猴，通过检查猴肌肉收缩强度和复合肌肉运动电位（CMAP），判定猴EAMG发病情况，从而鉴定IgG1-637的致病性。结果 20μmol／L MSX（L-methionine sulfoxmine）选择的CHO-k1细胞表达最高水平的抗体IgG1-637，表达产量为17．4μg/ml。3只猴（分别接受1．7、1．7和5．0mg／kg的注射剂量）在注射IgG1-637后1周内出现肌肉收缩无力临床症状，并表现出CMAP减弱现象。结论 由Fab637构建的完整的IgG1-637是一株致病性抗AchR抗体，可在猴诱导出EAMG。     

重症肌无力的特异性免疫治疗

重症肌无力(以下简称MG)是一种累及神经肌肉接头处，由抗体介导，补体参与的自身免疫性疾病。自1672年英国Willis医生描述了第一例MG之后，1960年英国Simpsom首先提出MG可能是自身免疫性疾病，1973年美国的Lindstrom最先用由电鳗电器官提取的乙酰胆碱受体(AchR)为免疫原，主动免疫家兔制成重症肌无力动物试验     

电鳐乙酰胆碱受体的分离和纯化

[目的 ]分离和纯化具有活性的电鳐乙酰胆碱受体 .[方法 ]将电鳐电器官肌肉制成匀浆 ,细胞经裂解制备电鳐乙酰胆碱受体粗提液 .经眼镜蛇毒素偶联的Sepharose 4B层析柱亲和吸附 ,得到纯化的电鳐乙酰胆碱受体 .应用酶联免疫吸附试验检查纯化的电鳐乙酰胆碱受体与抗乙酰胆碱受体抗体的结合活性 .[结果 ]分离和纯化的电鳐乙酰胆碱受体能与抗乙酰胆碱受体抗体结合 ,且结合活性高 .[结论 ]从电鳐电器官中分离和纯化的乙酰胆碱受体活性高、特异性强 ,可作为抗原在酶联免疫吸附试验中用于检查抗乙酰胆碱受体抗体 .     

抗乙酰胆碱受体单抗的特性和可变区序列分析

重症肌无力是由抗乙酰胆碱受体抗体介导的自身免疫病，我们测定了２株抗ＡＣｈＲ单抗的特性发现，这２株抗体识别ＡＣｈＲ上同一表位，可变区核苷酸序列分析表明，二者的Ｈ链同源性为９５．５％，是由同一小鼠Ｊ５５８族种系基因编码的。Ｌ链的同源性达９９％。这２株抗体未能诱导出健康大鼠的重症肌无力症状，可能是因其分子结构已知致病性抗ＡＣｈＲ相差甚远所致。     

姬松茸多糖对大鼠肝枯否细胞免疫活性的影响

目的观察姬松茸多糖对大鼠损伤肝枯否细胞的免疫活性的影响。方法将W istar系大鼠肝枯否细胞体外培养,并分为正常组、损伤组和实验组,除正常组以外均以四氯化碳损伤细胞,实验组再加姬松茸水提取物精制多糖。测定枯否细胞的花环形成和吞噬绵羊红细胞能力,计算花环形成率和吞噬率。结果姬松茸多糖可提高损伤肝枯否细胞的花环形成率和吞噬率。结论姬松茸多糖可提高枯否细胞的免疫活性。     

桦褐孔菌多糖对H_2O_2诱导气道平滑肌细胞凋亡的影响研究

目的 观察桦褐孔菌多糖(Polysaccharide from Inonotus obliquus,PIO)对H_2O_2诱导气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)凋亡的影响。方法 体外培养ASMCs细胞,MTT法检测PIO和H_2O_2对ASMCs细胞毒性作用,Hoechst33342染色观察PIO对H_2O_2诱导ASMCs凋亡的影响,流式细胞术检测细胞总活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,比色法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA),超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD),谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平和半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cysteinyl aspartate specific proteinase, Caspase) 3、9的活性,Western blot方法检测细胞Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 H_2O_2能明显诱导ASMCs细胞凋亡,PIO对ASMCs细胞没有毒性作用,PIO能明显降低H_2O_2诱导ASMCs细胞MDA和ROS生成,提高SOD和GSH水平。PIO能明显上调Bcl-2并下调Bax蛋白表达,降低Caspase3和9的活性,抑制H_2O_2诱导的ASMCs细胞凋亡。结论 PIO通过调节氧化应激水平抑制H_2O_2诱导的ASMCs细胞凋亡。