第66届美国肝病研究学会年会报道

<正>2015年11月13—17日,第66届美国肝病研究学会(American Association for the Study of Liver Diseases,AASLD)年会在美国加利福尼亚州旧金山Moscone会议中心召开,10 000余名来自世界各地的肝病领域专家学者参加了会议。AASLD年会是肝病领域的重要会议,本次年会报道了近1年来肝病基础研究与临床治疗新进展。大会包括100多项专题报告、38个分题共200多项大会分组报告和超过2000项壁报。限于篇幅,本文仅对病毒性肝炎、肝硬化及肝癌等肝病的研究新进展进行简要介绍。     

医学微生物学与免疫学精品课程建设探讨

精品课程是指具有特色和一流教学水平的示范性课程,精品课程建设是教育部实施“质量工程”的重要内容之一。分析和总结了对医学微生物学与免疫学精品课程多年（2003—2009年）建设的情况及已取得的成就,进一步提出精品课程建设是高等学校提高教学质量的重要组成部分。     

IL-4协同雌二醇对小鼠乳腺癌细胞生长的促进作用及其机制

目的：探讨白细胞介素4（IL-4）协同雌二醇对小鼠乳腺癌4T1细胞对其生物学行为的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养4T1细胞,加入不同浓度（0、12.5、25.0、50.0和100.0 μg·L^-1） IL-4或雌二醇（0、6.25、12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1）,作用72 h后MTT法检测乳腺癌4T1细胞增殖率。将乳腺癌4T1细胞分为对照组（不进行任何处理）、IL-4组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4）、雌二醇组（加入12.50 nmol·L^-1雌二醇）和联合组（加入50.0 μg·L^-1 IL-4+12.50 nmol·L^-1雌二醇）,MTT法检测各组乳腺癌4T1细胞增殖率,流式细胞术检测各组不同细胞周期乳腺癌4T1细胞百分比,Western blotting法检测各组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、Erk、p-Erk、P70S6K、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平。结果：与0 μg·L^-1 IL-4组比较,25.0、50.0和100.0 μg·L^-1IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与0 nmol·L^-1雌二醇组比较,12.50、25.00、50.00 nmol·L^-1雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与对照组比较,雌二醇组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）;与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞增殖率升高（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）;雌二醇组乳腺癌4T1细胞中S期细胞百分比明显升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与IL-4组或雌二醇组比较,联合组乳腺癌4T1细胞中S期和G₂/M期细胞百分比升高（P<0.05）,G₀及G₁期细胞百分比降低（P<0.05）。与对照组比较,IL-4组乳腺癌4T1细胞中ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高,雌二醇组乳腺癌4T1细胞中p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K、S6和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）;联合组乳腺癌4T1细胞中STAT6、p-STAT6、ERα、p-Erk、p-P70S6K和p-S6蛋白表达水平升高（P<0.05）。结论：IL-4协同雌二醇可促进小鼠4T1乳腺癌细胞膜IL-4受体（IL-4R）和雌激素受体（ER）表达,增强乳腺癌4T1细胞中Erk1和p70S6K激酶的激活及下游分子S6蛋白的磷酸化。     

浅谈设计性实验在医学微生物学教学中的优势

本文探讨了在医学微生物学实验课程教学中应用设计性实验的教学方法及其与传统验证性实验相比所具有的优势,为今后实验教学方法的改革积累了经验。     

C-myc标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响

目的 探讨在不同的免疫学检测方法中，与单链抗体相连的亲和标记肽对单链抗体与抗原结合活性的影响。方法 在制备“VH-连接链-VL”型结构抗乙酰胆碱受体单链抗体时，将c-myc标记肽与单链抗体的VL连接，应用先将抗c-myc抗体固定单链抗体的固相放射免疫测定法、直接将单链抗体与乙酰胆碱受体结合的液相放射免疫测定法，分别测定单链抗体与乙酰胆碱受体的结合活性。结果 在固相放射免疫测定法中，单链抗体不能与乙酰胆碱受体结合；在液相放射免疫测定法中，单链抗体则能与乙酰胆碱受体结合。结论 在应用不同的免疫学检测方法中，与单链抗体相连的c-myc标记肽可影响单链抗体与抗原的结合活性。     

抗乙酰胆碱受体α－银环蛇毒素结合区抗体可变区的序列分析

通过对３株抗乙酰胆碱受体（ＡＣｈＲ）的α－银环蛇毒素（α－ＢＴ）结合区抗体的配位特异性测定和可变区基因序列分析，探讨重症肌无力（ＭＧ）的发病机制。这３株抗体相互竞争对ＡＣｈＲ的结合，说明它们具有共同的识别部位。３株抗体的Ｈ链可能来源于同─种系基因，并且在抗原亲和成熟过程中发生体细胞突变；Ｌ链则由不同的亚组基因编码。结果表明，抗ＡＣｈＲα－ＢＴ结合区抗体的Ｈ链在决定抗体配位特异性上起重要作用。     

重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建

目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因.方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因.经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性.突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对.结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力.测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列.结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因.     

浅谈生物显微镜的规范化管理与日常维护

本文介绍了医学微生物学实验室中生物显微镜规范化管理的方法、日常维护、常见故障和解决方法等,为提高现有生物显微镜的利用率和延长其使用寿命提供参考.     

重症肌无力单链抗体A7基因在毕赤酵母中的表达

[目的]将抗乙酰胆碱受体单链抗体(ScFv)A 7基因转化至毕赤酵母GS 115,筛选阳性转化子并诱导蛋白表达,制备单链抗体A 7蛋白.[方法]将构建的含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因的重组真核表达载体pPIC 9 K-ScFv A 7经SalⅠ酶切线性化后,利用电转化方法转化受体毕赤酵母菌GS 115,以甲醇诱导蛋白表达,应用鼠抗c-myc单克隆抗体进行斑点杂交试验,检查所表达的单链抗体A 7蛋白.[结果]在酵母菌的培养上清液中发现单链抗体A 7蛋白的表达,而阴性对照菌中未见表达产物.[结论]抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7蛋白已成功地在真核表达系统中表达.