重症肌无力转基因小鼠模型的建立

[目的]建立人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．[方法]用电鳐电器官分离纯化的乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以肌肉收缩力判定病情，以放射免疫测定法测定动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度及动物全身肌肉乙酰胆碱受体浓度．[结果]实验动物血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度为6～296nmol，全身肌肉乙酰胆碱受体损失率最高达65％，部分动物出现肌肉收缩无力表现．[结论]成功地建立了人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力模型．     

延边地区慢性丙型肝炎患者及病毒携带者的丙型肝炎病毒基因型分布

[目的]了解吉林省延边地区慢性丙型肝炎患和丙型肝炎病毒携带丙型肝炎病毒基因型的分布．[方法]应用逆转录-聚合酶链反应技术，检测了48例本地区抗丙型肝炎病毒阳性血清，其中有29例为逆转录-聚合酶链反应RNA阳性；对29例逆转录-聚合酶链反应阳性的标本，应用限制性片段多态性技术，进行丙型肝炎病毒基因型分型．[结果]25例慢性丙型肝炎患血清中17例为丙型肝炎病毒RNA阳性，各8例查出丙型肝炎病毒Ⅱ型和丙型肝炎病毒Ⅲ型，1例丙型肝炎病毒Ⅱ/Ⅲ混合型；在23例丙型肝炎病毒携带中12例为丙型肝炎病毒RNA阳性，其中有9例丙型肝炎病毒Ⅱ型，3例丙型肝炎病毒Ⅲ型．慢性丙型肝炎和丙型肝炎病毒携带之间丙型肝炎病毒基因型分布无显性差异．[结论]丙型肝炎病毒各基因型(Ⅱ和Ⅲ)与感染的病情严重程度关系不大．     

重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体基因的构建

[目的 ]构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 .[方法 ]应用PCR技术及基因克隆技术分两步完成重链和轻链可变区基因的克隆 ,再对构建的单链抗体A 7基因进行序列测定检测其核苷酸序列 .[结果 ]构建的重组质粒经序列分析 ,重链可变区基因长度为 36 9bp ,轻链可变区基因长度为 32 1bp ,单链抗体基因长度为 735bp ;单链抗体A 7基因正确地插入在载体质粒pHEN 2开放读码框架内 .[结论 ]成功地构建重症肌无力抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因 ,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础 .     

单链抗体A7基因的原核细胞表达

[目的]制备抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因,为基因治疗重症肌无力奠定基础.[方法]构建含有抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因的重组原核表达载体pHEN 2-单链抗体A 7,将其转化至大肠杆菌HB 2151中,以异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)为诱导剂,在外周质中进行表达,以硼酸钠裂解细菌细胞壁,制备含有单链抗体的裂解液,应用鼠抗c-myc单克隆抗体的斑点杂交试验检测表达的单链抗体A 7基因.[结果]在大肠杆菌的外周质中可见单链抗体A 7基因表达,培养上清液中未见单链抗体A 7基因表达.[结论]抗乙酰胆碱受体主要免疫原区单链抗体A 7基因在原核细胞成功表达.     

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞MMP-2、MMP-9 表达及细胞侵袭作用的影响

目的:探讨扶正解毒通络方对肝癌HepG2 细胞侵袭作用和基质金属蛋白酶(Matrix metallo proteinases,MMP)-2、MMP鄄9 表达水平的影响及可能的作用机制。方法: CCK8 实验检测扶正解毒通络方对HepG2 细胞活性影响;Transwell 侵袭实验检测扶正解毒通络方对HepG2 侵袭能力的影响;ELISA 法检测扶正解毒通络方干预HepG2 细胞后MMP-2和MMP-9 的表达水平。结果:CCK8 实验结果显示,扶正解毒通络方对HepG2 细胞意志呈剂量时间相关性。Transwell 侵袭实验显示,2.65 mg/ ml 扶正解毒通络方对HepG2 细胞侵袭力抑制率为52.45% (P<0.05)。ELISA 检测结果显示,扶正解毒通络方干预后HepG2 细胞上清液中MMP-2 和MMP-9 表达水平下降(P<0.05)。结论:扶正解毒通络方可以抑制肝癌HepG2 细胞的生长和侵袭,其机制可能是通过下调MMP-2、MMP-9 在肝癌细胞HepG2 的表达。     

人免疫球蛋白转基因小鼠自身免疫性重症肌无力模型的建立

重症肌无力(myasthenia gravis，MG)是由乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor，AchR)抗体介导的自身免疫病。AchR抗体与神经肌肉接头处的AchR结合，通过抗原调变、激活补体导致突触后膜裂解而使AchR数量减少，结果出现肌肉收缩无力等症状。MG的动物模型——实验性自身免疫性MG(experimental autoimmune MG，EAMG)可经主动免疫动物富含AchR的电鳐(Torpedo)电器官制备的AchR(tAchR)诱导出。     

重症肌无力治疗性单价IgG抗体基因的构建

目的:构建一株对重症肌无力(MG)具有特异性免疫治疗作用的单价IgG类抗体基因.方法:应用定点突变技术,将致病性抗乙酰胆碱受体(AChR)抗体IgG637的重(H)链第322位氨基酸进行K322A突变,获得的突变型抗体IgG637/K322A基因再进行H链互补决定区3(CDR3)缺失突变,获得突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP基因.经转化大肠杆菌XL1-Blue进行增殖后,转染哺乳类细胞CHO-k1进行表达,表达产物经ELIAS检测与补体C3的结合活性,经RIA检测与特异性抗原人AChR的结合活性.突变抗体H链再经杵(T366Y)臼(Y407T)突变,以利于异源H链的配对.结果:突变型抗体IgG637/K322A丧失了与补体C3结合的能力,突变型抗体IgG637/K322A/CDR3ΔPLKP丧失了与人AChR结合的能力.测序证实已经获得了预想的杵臼突变序列.结论:已经成功的制备了无补体激活能力的单价IgG类抗AChR抗体基因.     

肝硬化后门静脉血栓形成的临床特点研究

目的研究肝硬化(liver cirrhosis,LC)后门静脉血栓(portal vein thrombosis,PVT)形成的临床特点。方法对9678例LC患者进行回顾性分析,采用腹部B超/腹部增强CT及腹部增强MRI检查门脉主干或左右分支,筛选出LC伴PVT形成者(PVT组),同时将LC后无PVT患者纳为对照组,比较2组的Child-Pugh分级、门静脉及脾静脉宽度、脾脏面积及厚度、腹水、上消化道出血、肝性脑病和肝肾综合征等并发症。结果 LC患者中有396例(4.09%)PVT形成。PVT组中LC的病因主要有乙型肝炎、酒精性及丙型肝炎LC,PVT主要分布在门静脉主干、门静脉右支、肠系膜上静脉、门静脉左支和脾静脉。按Child-Pugh进行分级,PVT组与对照组比较,肝损伤较重(P<0.01)。PVT组合并腹水、上消化道出血、肝性脑病及肝肾综合征等并发症的发病率均较对照组高(P<0.01)。PVT组门静脉和脾静脉宽度分别为(1.50±0.23)cm和(1.25±0.34)cm,对照组为(1.38±0.23)cm和(1.06±0.29)cm。PVT组脾脏面积为(97.48±32.90)cm2,脾脏厚度为(6.09±1.21)cm;对照组分别为(81.19±29.10)cm2和(5.26±0.99)cm。PVT组门静脉及脾静脉宽度和脾脏厚度均大于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。PVT组有侧支循环开放的患者占96.21%,对照组为78.25%,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 LC后PVT形成对LC患者的临床转归有重要影响。     

第66届美国肝病研究学会年会报道

<正>2015年11月13—17日,第66届美国肝病研究学会(American Association for the Study of Liver Diseases,AASLD)年会在美国加利福尼亚州旧金山Moscone会议中心召开,10 000余名来自世界各地的肝病领域专家学者参加了会议。AASLD年会是肝病领域的重要会议,本次年会报道了近1年来肝病基础研究与临床治疗新进展。大会包括100多项专题报告、38个分题共200多项大会分组报告和超过2000项壁报。限于篇幅,本文仅对病毒性肝炎、肝硬化及肝癌等肝病的研究新进展进行简要介绍。