bFGF对NIH3T3细胞TPK,PKC,ERK活性的影响

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对NIH3T3细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)及胞外调节蛋白激酶(ERK)活性的影响,探讨其信号转导机制.方法:分别加入bFGF及PKC抑制剂H-7、MEK1抑制剂PD98059孵育细胞,利用[γ-32P]ATP掺入外源性底物的方法测定活性.结果:bFGF可使细胞膜TPK、细胞质PKC及ERK活性明显升高.H-7 bFGF、PD98059 bFGF组与只加bFGF组比较TPK活性保持不变,而PKC及ERK活性均下降.结论:TPK、PKC、ERK介导bFGF的信号转导.ERK与PKC是TPK受体下游的两个分支,PKC与ERK可以互相激活.     

ECGF生物活性与肝素的相关性研究

观察肝素与内皮细胞生长因子（ＥｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒ。ＥＣＧＦ）的分离、生物活性及促创伤愈合作用的相关性。结果表明：用肝素亲和层析分离ＥＣＧＦ纯度高、产量多；肝素可使ＥＣＧＦ生物活性增加；另外，在动物实验中，肝素与ＥＣＧＦ合用可使创伤提前愈合。     

铅对海马区长时程增强过程中PKC活性的影响

为观察铅对海马区长时程增强过程中蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）活性的影响，用０．１％醋酸铅喂养大鼠３个月后，在高频刺激下诱发海马齿状回产生长时程增强，测定ＰＫＣ活性。结果：与对照组比较，细胞浆和细胞膜的ＰＫＣ活性明显升高（Ｐ＜０．００１）。提示：ＰＫＣ在铅干扰长时程增强中起关键性作用。     

运动干预对大鼠骨骼肌mTOR与P70^S6K磷酸化的影响

运动干预增加大鼠骨骼肌核糖体蛋白S6激酶(P70S6K)及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平,改善P70S6KmRNA表达,降低血液胰岛素浓度(P均<0.05).提示运动干预可能通过增加mTOR与P70S6K活性,提高骨骼肌对胰岛素的敏感性.     

aFGF对人卵巢癌细胞株(CAOV3) TPK、PKC及ERK活性的影响

目的探讨酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和细胞外信号调节激酶(ERK) 丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂PD98059对人卵巢上皮性癌细胞株(CAOV3)细胞内酪氨酸蛋白激酶 (TPK)﹑蛋白激酶C(PKC)及ERK活性的影响.方法不同浓度aFGF和 PD98059诱导CAOV3细胞,[γ-32P]ATP掺入外源性底物,液体闪烁测定TPK﹑PKC及ERK活性的变化;Western印迹方法检测ERK表达水平.结果随着aFGF浓度增加,CAOV3细胞内TPK、PKC及ERK活性随之升高,与aFGF浓度呈剂量依赖效应; PD98059抑制细胞内PKC及ERK 活性,与PD98059浓度亦呈剂量依赖效应,并且PD98059 对aFGF诱导的PKC及ERK活性抑制更显著(P<0.05).Western印迹方法检测ERK表达水平与上述结果基本一致.结论 aFGF可能通过TPK途径激活PKC及ERK来调控CAOV3 细胞增殖,PKC及ERK是TPK下游信号分子,二者处于同一信号通路上不同环节.     

碱性成纤维细胞生长因子对人肝癌Bel-7402细胞Skp2和p27^Kip表达的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对肝癌Bel-7402细胞Skp2、p27Kip表达的影响,探讨bFGF调控肝癌细胞增殖的信号转导机制.方法:分为对照组、bFGF组、bFGF+Wortmannin组,MTT法分析细胞增殖程度;流式细胞术分析细胞周期;RT-PCR法检测Skp2的mRNA表达;免疫印迹法检测Skp2、p27Kip蛋白的表达.结果:bFGF组细胞增殖比显著增加;bFGF可诱导细胞由G1期进入S期,而且上调Skp2的mRNA和蛋白表达、下调p27Kip蛋白表达;PI3K的抑制剂Wortmannin可部分抑制bFGF的上述作用.结论:bFGF可能通过激活PI3K/PKB途径调节Skp2、p27Kip表达,促进肝癌Bel-7402细胞增殖.     

低浓度铅对鼠脑海马神经细胞蛋白激酶C的影响

目的：为了探讨中枢神经系统铅中毒的生化机制，测定染铅鼠脑海马区神经细胞的ＰＫＣ活性的改变。方法：用慢性染铅Ｗｉｓｔａｒ大鼠为动物模型，用［γ－２３Ｐ］ＡＴＰ掺入外源性底物的方法测定ＰＫＣ活性。结果：染铅鼠海马神经细胞内胞浆ＰＫＣ活性明显升高（Ｐ＜０．０１），胞膜ＰＫＣ活性亦升高，但无统计学意义。结论：神经细胞胞浆ＰＫＣ对铅有高度敏感性，可能是铅致神经毒性作用的关键调节物。     

铅对小鼠脑细胞外信号调节激酶活力的影响

目的 研究不同浓度乙酸铅染毒对发育期不同时段小鼠脑组织细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinases，ERK)活力表达的影响。方法分组饲养小鼠，对照组喂以蒸馏水；实验组于交配后改喂含不同浓度乙酸铅(0．5、2．4、4．8、7．2、9．6和14．4mmol／L)的水溶液。新生鼠通过母乳摄人铅；断乳后幼鼠自行饮水摄入铅。新生鼠按生后不同日龄(P1，P8，P15，P22，P30)取脑组织。利用ERK磷酸化抗体，通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测不同日龄不同染铅浓度小鼠等量脑标本中ERK活力表达。结果Western blot结果显示，较低浓度的铅可引起某些发育时段ERKl／2活力水平升高，如Pb 0．5mmol／L．组P30时段和Pb 2．4mmol/L组P22时段的ERK活力比对照组明显升高，而逐渐升高的铅浓度可以引起P22-P30时段小鼠脑中ERK活力表达逐渐下降，9．6mmo1/L Pb浓度下P30时段小鼠脑ERK活力降至最低。但在更高的铅浓度(14．4mmol／L)下，未见ERK活力继续降低。另外，Pb 7．2组在P1、P8和P15时段明显高于正常对照组，而P22和P30时段则明显低于正常对照组。结论铅对P22和P30时段小鼠脑中ERK活力水平有明显的影响。低浓度铅可引起某些发育时段ERKl／2活力水平升高，较高浓度铅引起某些发育时段ERKl／2水平降低。     

慢性铅暴露小鼠海马细胞凋亡相关基因的表达

目的探讨发育期慢性铅暴露对小鼠海马B-细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcelllymphoma/leukemia-2,bcl-2)和bcl-2相关X基因(bcl-2associateX,bax)mRNA表达的影响。方法用RT-PCR法检测慢性铅暴露时小鼠海马bcl-2和baxmRNA表达水平。结果慢性铅暴露可使小鼠脑海马bcl-2mRNA表达水平明显下降,而baxmRNA表达水平明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论慢性铅暴露可使小鼠脑海马bcl-2mRNA表达水平显著下降,而baxmRNA表达水平显著增加。     

急、慢性铅中毒对海马CA1区长时程增强和活化的细胞外信号调节激酶2影响

目的　探讨急、慢性铅中毒对大鼠海马活化的细胞外信号调节激酶 2 (ERK2 )含量的影响及其与海马CA1区长时程增强 (LTP)的关系。方法　大鼠怀孕后分别饮用蒸馏水或 0 .2 %醋酸铅溶液 ,断乳后鼠仔则直接饮用 ,于 30d后测定LTP ,并取海马作为慢性铅中毒标本测定ERK2含量。正常 30d大鼠海马片稳定培养 2h后 ,分别用含或不含 2 0 μmol·L-1 醋酸铅的人工脑脊液孵育 ,不同时间点收集 ,作为急性铅中毒标本测定ERK2含量。用Western印迹法测定标本活化的ERK2含量。结果　高频刺激后对照组和慢性铅中毒组峰电位分别为刺激前的1 85 %和 88% ;慢性铅中毒组活化的ERK2则比对照组降低了 46 %。海马片培养中 ,对照组活化的ERK2含量基本保持不变 ,铅中毒组在 30和 60min时分别下降了 68%和 33% ,1 2 0min后恢复到正常水平。结论　活化的ERK2含量降低可能是铅中毒致使CA1区LTP不能形成的原因之一