树突状细胞负载的exosome疫苗抗胶质瘤的实验研究

目的:旨在分离胶质瘤细胞释放的exosomes,致敏外周血树突状细胞(dendritic cell,DCs),观察其对细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytcs,CTLs)的激活效应.方法:离心超滤和蔗糖密度梯度离心法分离胶质瘤细胞释放的exosomes,固相免疫电镜法(SPIEM)制备exosomes的MACE-1及ICAM-1免疫电镜标本.常规方法从外周血单个核细胞诱导DCs并分离T细胞,将胶质瘤细胞来源的exosomes冲击或未冲击的DCs与T细胞共培养.MTT比色法检测体外细胞毒活性.结果:胶质瘤细胞分泌的exosomes为直径50-100nm的膜性微囊,经抗MAGE-1、ICAM-1抗体-胶体金免疫电镜标记,囊外膜可见点状、颗粒状电子致密物沉积.培养后DCs的表面标志物CD1a、HLA-DR、CD83、CD86的表达率较培养前明显升高,差异有显著性(P＜0.05).exosomcs致敏的外周血DCs激活CTLs的能力显著高于肿瘤冻融抗原致敏的DCs组,在效靶比为50:1时,两组CTLs对胶质瘤细胞的杀伤率为70.4%±4.1%vs 30.1%±2.8%,(P＜0.05).结论:胶质瘤细胞分泌的exosomes负载外周血DCs后活化CTLs,发挥抗肿瘤活性,可以作为一种有效的抗胶质瘤免疫治疗策略和方法.     

重型再生障碍性贫血患者骨髓T细胞克隆的初步研究

目的建立源于重型再生障碍性贫血(重型再障)患者骨髓的T淋巴细胞克隆,以便研究该病的发病机理.方法用免疫分选法分别从1名初诊重型再障患者及对照的骨髓中富集CD34+和CD3+细胞.将CD3+细胞作反应细胞、照射过CD34+细胞作刺激细胞,进行14d单向自身混合淋巴细胞培养.对活细胞作有限稀释和单个细胞分孔接种,与含IL-2和PHA-P的饲养细胞体系共培养.观察挑选细胞生长孔,计算接种率,用泊松(Poisson)分布初步判断单个细胞分离过程成功与否.而后将阳性孔细胞作转孔培养,定期用饲养抚育刺激、常规用IL-2支持增殖以扩大各克隆的数量.用SABC-P免疫细胞化学染色法,初步鉴定各克隆CD4/CD8抗原表型.结果自身混合淋巴细胞培养后的活细胞数,病例为4×103,对照为65.单细胞分离接种培养后,对照组的细胞生长孔数为0;而病例组的培养板上,共有11孔发生细胞增殖,相应的实际接种率是2.1%,未超出Poisson理论接种率值范围(＜26%),判明平均每个增生孔的细胞克隆前体数不大于1.这11个克隆中,9个呈CD4单阳性表型,阳性为98%;2个为CD8单阳性表型,阳性率为98%.结论从1例重型再障患者骨髓中分离出了11株T淋巴细胞克隆.进一步鉴定分析这些克隆的表型和特异性,以及探讨其Th1(Tc1)/(Th2)(Tc2)效应类型等功能表现,对研究重型再障的免疫学机理具有积极的意义.     

环孢霉素A联合红细胞生成素治疗纯红细胞再生障碍性贫血二例

我们采用环孢霉素Ａ(ＣｓＡ)联合红细胞生成素 (Ｅｐｏ)治疗 2例慢性获得性纯红细胞再生障碍性贫血 (纯红再障 ) ,均达到基本治愈 ,现总结如下。　　例 1,女性 ,2 6岁。进行性乏力、苍白 13年 ,既往外周血血红蛋白、红细胞数降低 ,而白细胞及血小板数正常 ,曾以铁剂、叶酸、ＶｉｔＢ12 等治疗 ,每 2～ 3个月输血 2Ｕ。家族中无类似疾患。入院时体检 :重度贫血貌 ,皮肤、巩膜无黄染 ,发育正常 ,无肢体畸形。浅表淋巴结及肝脾不肿大 ,胸骨无压痛。ＲＢＣ 1.6 4× 10 12 /Ｌ ,Ｈｂ 44ｇ/Ｌ ,ＨＣＴ 0 .15 4,ＭＣＶ 91ｆｌ,ＭＣＨ 2 9ｐｇ,ＷＢ…     

PML-RARα反义核酸对早幼粒白血病细胞株NB4细胞生长的影响

ＰＭＬ┐ＲＡＲα反义核酸对早幼粒白血病细胞株ＮＢ４细胞生长的影响于文强１孙秉中１陈竺２（１第四军医大学西京医院血液内科西安７１００３３２上海第二医科大学瑞金医院血液病研究所）关键词ＰＭＬ－ＲＡＲα反义核酸早幼粒细胞白血病中图号Ｒ５７５急性早幼粒细胞白...     

骨髓图像计算机管理系统的研制及其应用

第四军医大学西京医院与国内大多数医院一样,长期以来骨髓涂片资料是采用人工分类保存,这种方法存在许多缺点:1.分类信息量有限,欠规范化,查找时费力,难于系统化统计研究;2.图像信息随保存时间的延长有可能改变。骨髓图片占据空间大,易破碎,为以后的回顾性研究带来困难。为了解决上述问题,     

实验诊断学第二课堂的开设与探讨

通过第二课堂活动使教学与临床紧密结合,弥补课堂教学中的不足.以参观及急诊见习作为临床第二课堂,扩大学员眼界,激发学习热情;制作与教学内容密切相关的全英文注释挂图,让学员自学、自讲,作为英语第二课堂,培养提高学员的英文自学、表达及交流等综合素质.民意测验表明,第二课堂活动深受学员欢迎,值得推广应用.     

格列卫与六亚甲基二乙酰胺对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的：研究格列卫和六亚甲基二乙酰胺(HMBA)对K562细胞增殖、凋亡、细胞周期及周期蛋白表达的影响．方法：MTT法观察细胞生长指数和细胞存活率,流式细胞仪、电镜检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测bcr-abl基因的表达,Western blotting检测蛋白表达．结果：联合应用两种药物后细胞存活率明显下降,凋亡比例略下降,细胞周期阻滞于G0／G1期,cyclinD1、cyclinE、cyclinA、CDK4、c-myc蛋白表达下调．结论：两种药物应用后出现细胞存活率下降、细胞周期阻滞、周期蛋白表达下调、凋亡比例下降,联合作用对细胞的增殖抑制具有协同作用,进入凋亡途径细胞减少。     

抗原负载的树突状细胞疫苗与肿瘤免疫治疗

<正> 免疫识别与免疫逃避是恶性肿瘤发病机理及防治中的关键矛盾,它决定着免疫反应的有无和强弱。在重建免疫识别的方法中,树突状细胞(Dendritic clells,DC)负载肿瘤相关抗原已经成为肿瘤治疗研究的热点。 树突状细胞的生物学特性 1 DC的来源及分类 Steinman和Cohn1973年从小鼠脾脏中分离出来一种新型细胞,根据其最初从淋巴器官分离,且具有树状突起而被     

p38MAPK在慢性髓细胞白血病信号转导中的作用

目的：探讨p38MAPK在慢性髓细胞白血病（CML）信号转导中的作用。方法：用脂质体转染法将bcr3/abl2反义寡核苷酸（ASO）导入K562细胞中,通过细胞凋亡、p38MAPK活性、p38MAPK表达和p38MAPK含量的变化,检测p38MAPK在CML信号转导中的作用。结果：bcr3/abl2ASO作用K562细胞24h后凋亡细胞比率、p38MAPK活性、p38MAPK表达和p38MAPK含量明显增加,分别为对照组的3.6、3.3、2.7和1.8倍,与对照组之间均差异有统计学意义（均P〈0.05）。结论：p38MAPK通过介导凋亡信号而在CML信号转导中起重要作用。     

反义核酸与维甲酸对NB4和HL-60细胞生长分化的影响

目的：急性早幼粒细胞白血病染色体ｔ（１５；１７）易位形成的ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因作为早幼粒细胞白血病的标志与ＡＰＬ的发病及维甲酸诱导分化效应密切相关。本研究将针对ＰＭＬ－ＲＡＲα基因的反义核酸和维甲酸对ＮＢ４细胞和ＨＬ－６０细胞生长分化的影响加以比较，探讨ＰＭＬ－ＲＡＲα基因对维甲酸诱导分化作用的影响。方法：用反义核酸来封闭ＰＭＬ－ＲＡＲα融合基因的表达并用ＲＴ－ＰＣＲ的方法检测。ＮＢ４细胞的生长、分化及功能通过细胞生长曲线、形态学、细胞表面标志及ＮＢＴ还原试验加以判定，细胞周期应用流式细胞仪进行分析。结果：①反义核酸仅能够抑制ＮＢ４的生长，促进ＮＢ４细胞的分化，具有特异性；②维甲酸能够同时影响ＮＢ４和ＨＬ－６０细胞的生长分化；③反义核酸能够降低ＮＢ４细胞Ｓ期细胞百分比，而维甲酸不能。结论：ＡＳＯＤＮ和维甲酸影响ＡＰＬ细胞的生长分化作用机制可能不同，而且反义核酸作用特异性强，作用时相早。