结合第四轮教育教学改革探索附属医院科学学位研究生培养模式

附属医院在临床医学科学学位研究生的培养过程中,应发挥学校、医院与研究室的不同优势,促进研究生自主学习成长。根据研究生培养过程的不同阶段,做到理论学习与临床实践相结合和临床实践与科学研究相结合,从而促进科学研究对理论知识和临床问题的认知。在临床医学科学学位研究生培养过程中,要明确培养目标,细化培养方案,强化培养科研素养和临床实践操作,注重质量控制和过程监督,并应重视科研课题的选择、学术活动和导师指导小组的作用。     

4种化学物质对HaCaT细胞氧化应激相关基因表达的影响

目的: 探讨过氧化氢、姜黄素、槲皮素及叔丁基对苯二酚对84种氧化应激相关基因表达的影响。方法: 取对数生长期的HaCaT细胞,采用不同浓度的过氧化氢、姜黄素、槲皮素及叔丁基对苯二酚,用四甲基噻唑蓝(MTT)法评价受试物的细胞毒性。将不同浓度的过氧化氢(0.5和1.25 mmol/L)、姜黄素(5和20μmol/L)、槲皮素(200和500μmol/L)及叔丁基对苯二酚(10和50μmol/L)分别处理HaCaT细胞4 h及24 h后,提取RNA,对RNA质量进行评价,然后采用实时荧光定量PCR(qPCR)方法检测HaCaT细胞中84种氧化应激相关基因的表达水平。结果: MTT试验显示,过氧化氢、姜黄素和叔丁基对苯二酚浓度分别在>1 mmol/L、>10μmol/L和>50μmol/L时,HaCaT细胞的存活率在80%以下;而槲皮素在浓度为1 000μmol/L仍未显示出明显的细胞毒性。qPCR结果显示,上述4种化学物质在不同浓度不同时间对HaCaT细胞氧化应激相关基因的表达有一定的影响。过氧化氢1.25 mmol/L作用4 h能引起HMOX1、SPINK1等基因表达上调而1.25 mmol/L作用24 h时CCL5表达下调;姜黄素20μmol/L作用4 h能引起HMOX1、ALB等基因表达上调以及GSR等基因表达下调;槲皮素500μmol/L作用4 h能引起ALB、HMOX1等基因表达上调以及SEPP1等基因表达下调;叔丁基对苯二酚10μmol/L作用4 h能引起基因EPX、HMOX1等基因表达上调,而10μmol/L作用24 h时AOX1等基因表达下调。结论: 过氧化氢、槲皮素、姜黄素及叔丁基对苯二酚,这4种化学物质均可引起氧化应激相关基因发生改变,均能引起基因HMOX1表达上调,而且高浓度的化学物质引起的基因表达变化高于低剂量,为抗氧化剂的添加提供了一定的理论依据。     

结核分枝杆菌黏附素HBHA的克隆表达及其免疫原性研究

目的应用克隆表达技术从大肠杆菌中获得重组的结核分枝杆菌黏附素HBHA蛋白,并以HBHA免疫小鼠观察抗HBHA抗体的产生并探讨其免疫原性。方法1)应用PCR技术扩增结核分枝杆菌hbhA编码基因的特异片段。2)结核分枝杆菌hbhA编码基因的克隆及在大肠杆菌中的表达。3)应用克隆表达的HBHA蛋白免疫小鼠,并用ELISA法测定小鼠血清抗HBHA抗体水平。结果1)结核分枝杆菌hbhA基因成功地克隆到PET-32 a(+)表达载体中,并在大肠杆菌中获得了高效表达。重组HBHA主要存在于包涵体中,纯化包涵体并获得了大量的重组HBHA。2)重组HBHA免疫小鼠可产生较高水平的抗HBHA抗体(>1∶102 400),表明重组HBHA在纯化过程中仍保留较强的免疫原性。结论结核分枝杆菌黏附素HBHA具有较好的免疫原性。     

结核分枝杆菌DNA介导模式识别受体激活天然免疫机制的研究进展

结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)是引起机体发生结核感染的重大病原体。天然免疫在宿主抵抗MTB入侵过程中发挥了重要作用，机体细胞内的多种模式识别受体(pattern recognition receptors, PRR)参与了针对MTB的识别。PRR作为天然免疫的“启动器”,在识别MTB后经过信号通路的转导激活天然免疫的产生。可被PRR识别的MTB组分种类繁多，包括：DNA、脂多糖、蛋白质等。本文重点关注可被PRR识别的MTB DNA,从其来源、可被识别的PRR种类，以及PRR以MTB DNA为病原相关分子模式介导相关分子信号通路激活天然免疫的机制3个方面综述了MTB DNA经由PRR激活天然免疫的过程，并着重探讨了Toll样受体9、环鸟苷酸-腺苷酸合成酶和黑色素瘤缺乏因子2样受体等PRR激活天然免疫机制的研究进展。最后，讨论了MTB DNA的应用前景，以期为开发MTB DNA相关疫苗和结核病的诊断拓展思路。