重组葡萄球菌B型肠毒素超抗原的制备及抗肿瘤活性分析

目的 采用基因工程技术制备葡萄球菌B型肠毒素（SEB），并对其体内外抗肿瘤活性进行分析。方法 对SEB在大肠杆菌中进行高效表达和分离纯化，并对其超抗原活性和免疫学活性与天然SEB进行比较研究，观察重组SEB对人肝癌细胞的体外抑制作用，以及对小鼠肝癌和肉瘤的体内抑瘤效果。结果 SEB获得高效表达，并一步将其纯化至均质，与天然毒素相比较，重组SEB的免疫学活与超抗原活性基本相似，首次证明，即使SEB的浓度为10ng/L，仍然对人肝癌细胞有显著地抑制作用，其对小鼠体内的肝癌和肉瘤有一定的抑制作用。结论 重组SEB在体内外均有一定肿瘤抑制作用。是潜在的肿瘤免疫治疗药物。     

单链二硫键稳定抗体靶向超抗原SEA(D227A)分子的表达、纯化及鉴定

目的:提高抗肝癌靶向超抗原SEA(D227A)的产量和稳定性,构建单链二硫键稳定抗体靶向超抗原分子scdsFv-SEA(D227A)。方法:构建scdsFv SEA(D227A)表达质粒,用IPTG诱导其在大肠杆菌BL21plusS表达。包涵体经洗涤和复性后,用QSepharoseHP和Hiprep26/60SephacrylS-200HR纯化。纯化蛋白经AMS烷化处理并结合PAGE电泳来检测二硫键形成情况,并通过ELISA和MTS分别检测重组蛋白与肝癌细胞的结合活性、稳定性和细胞杀伤活性。结果:重组蛋白以包涵体的形式表达,表达量占菌体总蛋白的30%以上。通过复性及QSepharoseHP离子交换柱和Hiprep26/60SephacrylS-200H凝胶过滤两步纯化后,获得目的蛋白,每升诱导菌液的产量高达60mg。活性测定结果表明,相比与单链抗体靶向超抗原和二硫键抗体靶向超抗原SEA,二硫键抗体靶向超抗原在不影响结合活性和杀伤效果的情况下,稳定性有了较大提高。结论:建立了一种新的稳定的免疫毒素和提高其产量的方法,为hscFv25抗体靶向超抗原的临床应用奠定了基础,同时为其他低稳定性或低产量抗体的改造提供了借鉴的方法。     

从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选葡萄球菌B型肠毒素抑制剂

目的:拟通过生物淘选从噬菌体表面展示环状7肽肽库中筛选出与葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcal enterotoxin B,SEB)结合并能抑制该毒素毒性效应的特异性短肽.方法:采用Phage-ELISA来鉴定所得目的肽的亲和性;利用竞争ELISA研究合成肽与SEB mAb竞争结合SEB的情况;通过动物实验考察其抑制SEB的超抗原特性和肠毒活性情况.结果:筛选所得短肽在一定浓度范围内可以抑制SEB对鼠脾淋巴细胞的激活;合成肽与SEB质量比160:1下,合成肽可较好地抑制SEB对乳猫的肠毒活性,并对SEB引起的小鼠致死具有明显保护作用.结论:得到了能与SEB特异结合并能抑制SEB超抗原特性和肠毒活性的短肽.     

神经外科术后并发脑室炎的诊断及治疗

目的:探讨神经外科手术后并发脑室炎的易发因素、诊断及治疗措施.方法:回顾性分析神经外科手术后脑室炎20例临床资料.结果:本组病例明确诊断后,经全身用药加用双侧脑室置管抗生素脑室内灌洗持续引流治疗,治愈13例,死亡6例,放弃者1例.结论:严格无菌操作是减少手术后脑室感染的基础,及时明确诊断、全身大剂量合理使用抗生素是治疗的关键,脑室抗生素双管持续引流是治疗的有效措施.     

肿瘤-睾丸抗原研究进展

肿瘤-睾丸抗原又称CT抗原,是一类在多种肿瘤组织中表达而在正常组织中除睾丸外不表达的抗原,因而是很有前途的肿瘤疫苗候选抗原.本文就目前肿瘤-睾丸抗原的定义、分类及其在肿瘤组织及正常组织中表达的特点和作为疫苗的临床研究进展作一综述.     

对去骨瓣减压术手术方式的一点反思

去骨瓣减压术是神经外科常用的手术方式之一。但是切口的位置、减压的范围及手术的方式却常常成为令人困惑的问题。为此在上世纪90年代初我院曾进行过专门讨论,虽然没有得出最后结论,但是对手术方式向标准化发展提出了建设性意见。从1992~2005年底的14年里我院共进行了各种去骨瓣减压术498例,均取得了良好的效果。对手术的方式、范围以及对预后的影响作如下分析。1资料与方法1·1一般资料本组男361例,女137例,年龄12~79岁,平均46岁。其中急重型颅脑损伤417例(363例伴有脑疝形成),急性颈内动脉阻塞造成的大面积脑梗塞27例(22例伴有脑疝形成),…