猪链球菌2型溶血素的纯化及生物学活性研究

目的:摸索天然和重组猪链球菌2型溶血素的纯化工艺,评价制备蛋白的生物学活性。方法:天然猪溶血素的纯化采用硫酸铵沉淀,阴离子交换层析和疏水层析制备,重组猪溶血素采用镍柱亲和层析进行柱上变复性后,用Th iolproyl-sepharose 6B进一步亲和纯化。通过溶血实验,细胞毒性测定实验评价纯化蛋白的活性。结果:制备的天然和重组猪溶血素纯度均在90%以上,具有较高的溶血活性,较高浓度时能损伤靶细胞,胆固醇能够完全封闭其活性。结论:制备获得的重组猪溶素与天然蛋白具有相近的生物学活性,为进一步研究猪链球菌2型溶血素在猪链球菌致病机制方面的作用奠定了基础。     

腺病毒IgM抗体AlphaLISA快速检测方法

目的 建立一种腺病毒IgM抗体的均相光激化学发光免疫快速检测方法(AlphaLISA).方法 通过筛选小鼠抗人IgM单克隆抗体标记受体微球、链霉亲和素偶联供体微球和生物素化腺病毒抗原的最适比例,构建腺病毒IgM抗体均相AlphaLISA快速检测体系;采用呼吸道感染样品对该检测体系进行评价,并与间接免疫荧光方法比较.结果...     

结核分枝杆菌Rv3873抗原表位预测及其蛋白片段抗原性研究

目的对结核分枝杆菌Rv3873进行生物信息学分析及抗原表位预测,原核表达Rv3873基因21～235位氨基酸蛋白片段,命名为Rv387321～235重组蛋白,初步分析其抗原性。方法 PCR扩增结核分枝杆菌Rv3873 21～235位氨基酸的基因片段,构建其原核表达载体,转化大肠杆菌BL21（DE3）,获得重组蛋白并纯化;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对Rv387321～235重组蛋白进行抗原性检测。结果具有优势抗原表位的Rv3873蛋白片段在大肠杆菌中高效表达;ELISA结果显示,Rv387321～235重组蛋白在结核病检测中的敏感性为28%,特异性94.6%。结论生物信息学预测Rv3873基因抗原表位,为寻找有价值的抗原靶点提供了参考;具有优势抗原表位的重组蛋白片段在结核病诊断中具有潜在应用价值,可作为联合诊断的备选抗原之一。     

乳腺炎金黄色葡萄球菌肠毒素和毒素休克综合征毒素-1的调查研究

目的用PCR方法对14个奶牛场分离得到的临床型乳腺炎金黄色葡萄球菌(金葡菌)124株,隐性乳腺炎金葡菌213株,山羊临床型乳腺炎金葡菌12株进行超抗原毒素sea,seb,sec,sed.see和tst基因的分子调查,结果表明:奶牛标本肠毒素基因和tst基因的阳性率为27.42%,隐性乳腺炎为1.41%,山羊标本为33.3%。奶牛标本产生毒素的类型以SEA,TSST-1和SEC为主,山羊标本产生肠毒素的类型以SEC为主。对于肠毒素基因和tst基因PCR阳性的金葡菌同时用ELISA和RPLA检测,3种方法检测结果基本一致。     

乙状窦后入路小脑桥脑角相关神经的显微解剖

目的:熟悉小脑桥脑角区的神经显微解剖,提高肿瘤的全切率,避免手术并发症方法:16例(32 侧)成人尸头标本,通过模拟乙状窦后入路在显微镜下解剖。结果:①小脑桥脑角区由三个脑池组成;②小脑桥脑角区内有面神经、蜗神经,前庭上、下神经和中间神经经过,三叉神经位于上述神经的头端,后组颅神经位于尾端,外展神经位于内侧。结论:通过乙状窦后入路解剖小脑桥脑角区的神经结构有重要意义。各神经结构的测量值对临床手术有极其重要的指导价值。     

胎盘早剥重型合并胎死宫内、弥漫性血管内凝血、子宫胎盘卒中1例

妊娠20周后或分娩期,正常位置的胎盘于胎儿娩出之前,部分或全部从子宫壁剥离,称为胎盘早剥[1]。现报道胎盘早剥重型合并胎死宫内、弥漫性血管内凝血、子宫胎盘卒中1例,供临床参考。     

嗜麦芽窄食单胞菌全菌灭活苗在小鼠体内的免疫保护作用

目的：评价嗜麦芽窄食单胞菌全菌灭活苗在小鼠体内的免疫保护性。方法利用甲醛制备嗜麦芽窄食单胞菌全菌灭活苗并免疫小鼠，检测其抗体效价达到要求后，通过体外健康人血调理杀伤实验以及体内攻毒实验评价全菌灭活苗的保护作用。结果在第二次加强免疫后，免疫组血清中特异性IgG滴度显著增加，其抗血清在体外具有明显的调理杀伤能力；在体内的攻毒实验中也具有显著的保护作用。结论灭活的嗜麦芽窄食单胞菌全菌灭活苗可刺激诱导动物产生体液免疫应答，使小鼠产生有效的免疫保护作用，为进一步探讨嗜麦芽窄食单胞菌全菌灭活疫苗奠定了良好的实验基础。     

嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70的表达、纯化及抗原性研究

目的：验证嗜麦芽窄食单胞菌热休克蛋白HSP70（DnaK）的抗原性。方法以嗜麦芽窄食单胞菌K279a为模板,PCR扩增DnaK基因的全序列,将该序列连接到pET－30a载体,转入大肠杆菌BL－21中,经1 mmol／L的IPTG 37℃诱导表达,目的蛋白纯化后进行Western印迹。结果与结论 Western 印迹证实表达的重组蛋白能与鼠抗人HSP70单抗特异性结合,且与该菌的全菌免疫后血清有反应,而与免疫前血清无反应。嗜麦芽窄食单胞菌HSP70具有抗原性,可作为保护性抗原候选分子。     

宫颈癌患者血液微转移的分子诊断及其临床意义

宫颈癌是常见的妇科肿瘤之一,在女性疾病中发病率仅次于乳腺癌,发病逐渐趋于年轻化。目前宫颈癌重要的治疗手段是手术辅以放疗和化疗,术后复发率较高,目前尚无可靠的无创性指标来预测疾病的复发、转移及预后。近年生物科学技术高速发展,关于实体肿瘤的微转移研究日趋成熟,宫颈癌微转移检测有助于早期筛选高危患者,从而更加有针对性地制定个体化的治疗方案,减少复发和远处转移,改善患者的预