siRNA前体慢病毒干扰A549细胞株蛋白激酶2a表达的载体构建及鉴定

目的构建针对蛋白激酶2a（caseinkinase2a,CK2a）基因的siRNA前体（shortharpinRNA,shRNA）表达载体,鉴定CK2a基因干扰效率。方法体外设计并合成针对CK2a基因的慢病毒shRNA干扰载体,通过PCR及测序证实载体构建成功。将人肺腺癌细胞株A549分为3组,病毒干扰组（CK组）将慢病毒颗粒以最适滴度感染细胞株A549,病毒空载组（NC组）将慢病毒颗粒空载体感染细胞株A549,阴性对照组（CON组）为未经任何处理的细胞株A549;检测各组CK2a的干扰效率。结果构建的慢病毒载体序列通过PCR、测序等鉴定证实与设计序列相同;实时定量PCR检测显示CK组A549细胞CK2amRNA表达率较NC组及CON组下降约80％;Westernblotting显示CK组A549细胞表达CK2a蛋白量较NC组及CON组明显减少。结论构建的shRNA表达载体可在mRNA和蛋白水平上有效抑制A549细胞株CK2a基因的表达。     

中医药治疗腔隙性脑梗死疗效观察

腔隙性脑梗死，属于中医的“中风，中经络”范畴。本病是一种常见的脑血管疾病。病因多是高血压病，动脉粥样硬化等。由于多是微小动脉的梗死。西药常用溶栓式物治疗效果不佳，功能难以恢复。因此预防本病病因，改善症状是治疗本病的关键。笔者经过多年临床实践，在辨证论治的基础上，加用炙马钱子等药物，多获良效，现报道如下。     

顺铂或紫杉醇联合放射治疗中晚期鼻咽癌临床研究

[目的]比较顺铂和紫杉醇在中晚期鼻咽癌放射治疗中的作用。[方法]在放疗全程中,低剂量每周1次分别应用顺铂或紫杉醇,观察顺铂组和紫杉醇组放疗半量和全量疗效、肿瘤消退时剂量分布以及毒副反应,并与对照组(单纯放疗)比较。[结果]两药在提高放射疗效、肿瘤消退时放射剂量分布和毒副反应方面差异无显著性(P>0.05)。[结论]顺铂或紫杉醇联合放射治疗中晚期鼻咽癌,在提高疗效、放射增敏以及毒副反应方面相近,但顺铂更经济,使用更方便。     

高-低密度法分离培养大胚龄人神经干细胞

目的 从大胚龄人胚脑中分离培养并鉴定神经干细胞。方法 采用高—低密度培养、无血清培养和单细胞克隆技术分离培养出神经干细胞，并应用免疫荧光染色鉴定。结果 从13周龄胚脑中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞，它们具有连续克隆能力，可传代培养，表达神经巢蛋白抗原，分化后的细胞表达神经元细胞、胶质细胞和少校胶质细胞的特异性抗原。结论 高—低密度培养法能成功地分离和培养大胚龄入神经干细胞。     

人骨髓间充质干细胞的免疫调节作用及向神经元样细胞诱导分化

背景:骨髓间充质干细胞作为具有多向分化潜能的干细胞,属于未分化的前体干细胞,其表型分化尚不成熟,因此在同种异体移植后无排斥反应或反应较弱.但是在体外条件下通过化学和生物诱导物使骨髓间充质干细胞转化为神经元,影响骨髓间充质干细胞向神经细胞、胶质细胞系统定向分化的因素比较复杂.目的:观察人骨髓间充质干细胞的免疫调节作用,及向神经元样细胞诱导分化的能力.设计、时间及地点:对比观察,于2008-01/2009-03在无锡市第三人民医院细胞室完成.材料:骨髓来源于人髋关节手术时的松质骨碎片或髂骨游离移植.方法:首先分离和培养骨髓间充质干细胞,建立双向混合淋巴细胞反应体系,在双向混合淋巴细胞反应中,将来自2个志愿者的外周血单个核细胞(各1×10~5/孔)等比例加入96孔板中,根据不同效靶比E/T ratios(骨髓间充质干细胞/外周血单个核细胞)加入丝裂霉紊处理过的骨髓间充质干细胞.在骨髓间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞实验中分别选择两种诱导培养基,方法1诱导:DMEM+体积分数为10%胎牛血清+1 μmol/L全反式维甲酸+20 μg/L 碱性成纤维细胞生长因子+20 μg/L表皮生长因子;方法2诱导:DMEM+2%二甲基亚砜+100 μmol/L 丁羟茴醚.主要观察指标:~3H掺入法测定淋巴细胞增殖率,观察骨髓间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响;通过条件培养基定向诱导,免疫荧光和免疫组织化学染色观察其分化为神经细胞的能力.结果:①骨髓间充质干细胞与混合淋巴细胞反应体系共同培养抑制了淋巴细胞增殖,其增殖抑制率与加入骨髓间充质干细胞的数量呈正比.②方法1诱导2 h后,光镜下可见骨髓间充质干细胞的细胞质向核收缩,呈典型核周体形态.3～5 h后多数细胞能形成神经元样细胞形态,但细胞数目无明显增加.3 d后大多数细胞转变为双极或多极神经元细胞样形态,部分细胞之间拉成网状.染色可见60%～70%神经元特异性烯醇化酶、45%～50%胶质纤维酸性蛋白阳性,巢蛋白阳性细胞下降为3.4%.方法2诱导2 h即可见细胞体积变小,形成双极或多极的细胞体,可持续诱导48 h,后大部分细胞浮起死亡.染色可见40%～50%神经元特异性烯醇化酶,35%～40%胶质纤维酸性蛋白阳性,巢蛋白阳性细胞在诱导2 h时一过性上升到63%,48 h时下降为1.6%.结论:骨髓间充质干细胞具有向神经细胞分化能力并且可以抑制混合淋巴细胞反应体系中淋巴细胞的增殖,对同种异体免疫反应具有负调节作用.     

鲎试验——内毒素对胆管静脉反流和循环动力影响的实验观察

长期以来检测内毒素缺乏一种简单、快速而敏感的方法。1956年Bang发现给美洲鲎注入G细菌可引起致命的D1C。Lerin等1964年在鲎体内及试管内都证实微量内毒素就可以使鲎细胞溶解物产生凝胶。此后鲎的阿米巴样细胞溶解试验(Limulus amebocyte Lysate Test,以下简称LLT)遂被用来诊断临床疾病。常用的方法有试管凝胶法、玻片微量法、蛋白     

经阴道自然腔道内镜与单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术临床效果

目的:比较经阴道自然腔道内镜(V-NOTES)和单孔腹腔镜下行子宫肌瘤剔除术的临床疗效.方法:选取本院在2018年5月-2020年11月收治的子宫前壁单发肌瘤患者96例,采用随机数字表法分为观察组与对照组各48例.对照组采用单孔腹腔镜子宫肌瘤剔除术,观察组采用V-NOTES子宫肌瘤剔除术.比较两组手术指标、并发症及术后...     

宝泻灵提取物的体外透皮吸收研究

目的研究不同透皮促进剂对宝泻灵提取物中各指标性成分体外经皮渗透的影响,筛选出有效的透皮吸收促进剂。方法采用改良的Franz扩散池,以离体大鼠皮肤为透皮屏障,通过体外透皮实验,用高效液相色谱法测定不同渗透促进剂对提取物中各指标性成分吴茱萸次碱、丁香酚和肉桂醛的累积渗透量、透皮渗透速率等体外透皮吸收动力学参数的影响。结果低比例氮酮、以及3%氮酮与不同比例丙二醇联合使用时的累积渗透量均有明显提高,其中以3%氮酮 10%丙二醇作为复合促进剂时的促渗作用最强。结论通过考察渗透促进剂对宝泻灵提取物各指标性成分的影响,为研究其透皮给药提供了参考依据。     

探讨电力企业实施健康管理的意义

目的本文主要通过详细的调查与研究,统计并且分析了我国电力企业职工健康现状,并且探讨了企业实施健康管理的意义。阐述了提高慢性病相关因素的知晓率以及治疗率,倡导人们树立健康的生活理念,促进企业员工的健康水平。方法随机抽14792例于2013年在我院体检的患者进行相关的体检,以每个疾病为人次单位进行例数与百分数的统计及健康评估。结果在14792例与慢性病相关的体检中,8842例患者的体检出现了异常指标,占总人数的60%。分别为高血压病(2247/15)、糖尿病(721/0.5)、脂肪肝(4689/32)、冠心病(248/0.2)、肥胖(1876/13)、超重(4920/33)、高血脂(949/0.7)、高尿酸(1166/0.8),提示慢性病相关危险因素在电力企业患病率较高。结论电力企业职工进行了以慢性病相关因素为重点调查及健康评估,并对企业实施健康管理有重要意义进行讨论。