Rb、β及γ-catenin蛋白在进展期胃癌及转移淋巴结癌细胞中的表达及临床意义

目的 探讨Rb、β与γ-catenin在进展期胃癌及转移淋巴结癌细胞再表达情况及其与临床病理诸因素的关系.方法 应用免疫组织化学染色方法 检测Rb在肿瘤原发灶及β与γ-catenin在86例进展期胃癌原发灶及其转移淋巴结癌细胞的表达情况.结果 胃癌原发灶癌细胞中65.12％出现Rb阳性,38.37％转移淋巴结癌细胞出现β与γ-catenin再表达阳性,Rb与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05),β与γ-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达阳性与肿瘤分化程度密切相关(P<0.05),γ-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达与肿瘤病理类型密切相关(P<0.05),β-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达与肿瘤病理类型无关(P>0.05),Rb表达与β-catenin在转移淋巴结癌细胞中再表达情况相关,与肿瘤病理类型、大小、浸润程度等因素无关(P>0.05).γ与β-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达相关(P<0.05),Rb在肿瘤原发灶癌细胞表达和β与γ-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达无关(P>0.05).β与γ-catenin再表达阳性者3年生存率与再表达阴性者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 Rb表达与进展期胃癌发展过程密切相关,与β-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达有关,β与γ-catenin在转移淋巴结癌细胞再表达是进展期胃癌发生过程中的重要事件,二者协同发挥作用,并对癌细胞在转移灶中聚集生长起重要作用,联合评价其功能具有重要临床意义.     

携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用

目的： 探讨携带凋亡素基因（Apoptin）和进行性增量基因3（progression-elevated gene 3, PEG3）启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法： 以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、Ad-Apoptin、Ad-mock（均为前期工作构建）分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平; 流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果： Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到（56.23±664）%,其抑制能力明显强于Ad-pEG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组（均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为（37.97±3.78）%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长（P<0.05）;有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为（41.0±0.7）d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的（34.4±1.6）d、Ad-Apoptin的（33.2±1.2）d和Ad-mock的（28.4±14）d （均P<0.05）。结论： Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血颗粒溶素表达增高及其意义

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化（PBC）中外周血颗粒溶素的表达及意义.方法 用荧光定量PCR（FQ-PCR）法检测60例PBC患者颗粒溶素的mRNA表达,用ELISA法检测血清中颗粒溶素水平,以100例体检健康者、80例肝炎后肝硬化患者和80例SLE患者为对照组.结果 PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）中颗粒溶素mRNA的平均拷贝数（2.8±1.9）×10^8高于肝炎后肝硬化患者（5.6±2.9）×10^6、SLE患者（9.5±2.4）×10^6和体检健康者（2.5±1.4）×10^6（P＜0.01）.血清中颗粒溶素的水平为（16.12±2.24）ng/ml,也显著高于体检健康者、肝炎后肝硬化患者、SLE患者.结论 FQ-PCR法检测颗粒溶素的mRNA水平及ELISA方法检测血清中颗粒溶素的浓度,有助于了解PBC患者体内免疫状态,为临床诊治和研究提供依据.     

重组结核分枝杆菌多表位肽的免疫原性研究

目的探讨纯化的重组结核分枝杆菌多表位肽激发细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic Tlymphocyte,CTL)免疫应答的能力,为新型结核疫苗的设计打下基础。方法通过细胞增殖和细胞毒性实验,研究纯化的重组表达多表位肽刺激外周血单个核细胞(PBMC)产生的增殖反应和细胞毒活性,初步鉴定重组多表位肽的免疫原性。结果以刺激系数(SI)>3为界,多表位肽(10μmol)能刺激全部10例HLA-A*0201阳性(A2+)结核菌素阳性(PPD+)健康个体的PBMC发生增殖,SI为46.2±5.6;增殖反应明显高于单肽(平均SI为10.2±2.3)以及PPD(平均SI为15.6±3.6)引起的细胞增殖反应(P<0.01)。在多表位肽诱导的CTL细胞毒活性分析中以负载抗原肽(10μmol)的T2细胞作为靶细胞,多表位肽诱导的CTL作为效应细胞,多表位肽能诱导全部的10例A2+PPD+健康个体中CTL杀伤活性,平均活性分别为(86.2±9.6%),显著高于单肽[平均为(25.4±3.6)%]和PPD[平均为(22.6±2.8)%](P<0.01)。结论重组优化多表位肽在细胞水平具有较好的免疫原性,能有效刺激PBMC产生细胞增殖反应和细胞毒活性。     

结核分枝杆菌Rv0309抗原的重组表达、纯化和鉴定

目的重组表达结核分枝杆菌Rv0309蛋白,以进一步探讨其免疫效应。方法将结核分枝杆菌抗原Rv0309的全长cDNA插入到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建成Rv0309重组质粒。将重组质粒转入大肠杆菌BL21并以IPTG诱导表达,进一步经GST亲合层析柱纯化,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组表达蛋白。结果获得了pGEX4T-Rv0309重组子,并在大肠埃希菌BL21中诱导表达重组Rv0309蛋白,其条带大小约23000,与预期结果相符。结论成功地进行了结核分枝杆菌抗原Rv0309的基因克隆与重组表达,为进一步研制新型结核病疫苗打下了基础。     

含中药龙血竭的血清处理方法研究

目的 研究含中药龙血竭的血清处理方法 .方法 采用适宜蛋白沉淀剂并以有机溶剂提取处理含中药龙血竭的血清样品,测定含药血清的HPLC图谱,以龙血竭溶液中5个特征成分的峰面积为对照计算提取率,确定制备含药血清的最佳方法 .结果 通过乙腈沉淀蛋白,采用乙酸乙酯进行提取,可使含药血清中龙血竭特征成分的提取率达到80%以上.结论 本法可作为龙血竭含药血清的制备方法 .     

383例阴道真菌感染菌群鉴定及药敏分析

目的了解念珠菌性阴道炎致病菌的菌种分布情况及耐药情况。方法对念珠菌性阴道炎患者的标本运用玛嘉显色培养基法对分离自阴道念珠菌感染患者的383株念珠菌进行菌种鉴定。结果383例阴道念珠菌感染的病例经鉴定白色念珠菌368株（96．09％）,其次为光滑念珠菌10株（2．61％）,较少的有热带念珠菌4株1．04％）和克柔念珠菌1株（0．26％）。临床用7种药物中制霉菌素对阴道内真菌的敏感率最高为98．4％,两性霉素B敏感率为98．1％,酮康唑50.4％,伊曲康唑47．5％,咪康唑47．5％,氟康唑25．3％,特比萘芬23．5％。结论白色念珠菌是导致临床阴道念珠菌感染的优势菌群,其次有光滑念珠菌,热带念珠菌和克柔念珠菌等念珠菌感染。制霉菌素对阴道内真菌的敏感率最高,是治疗真菌感染的有效药物。鉴于伊曲康唑、咪康唑、氟康唑、特比萘芬等均存在不同程度的耐药,建议对反复发作的念珠菌性阴道炎患者根据药敏试验来选择药物,从而减少耐药菌株的出现,提高念珠菌性阴道炎的治愈率。     

心肌梗死继发室间隔穿孔外科手术后死亡的相关因素分析

目的探讨心肌梗死继发室间隔穿孔外科术后病死率及死亡相关因素。方法回顾性分析2005年1月至2018年12月在首都医科大学附属北京安贞医院心脏外科接受手术的全部51例心肌梗死继发室间隔穿孔患者的资料。男性34例, 女性17例, 年龄(63±8)岁(范围:44～82岁)。患者发生室间隔穿孔至手术的时间为(44±39)d(范围:3～187 d)。采用t检验和χ2检验对术后死亡的相关因素进行单因素分析, 多因素分析采用Logistic回归。结果 8例患者在术后住院期间死亡, 43例存活, 术后30 d病死率为15.7%(8/51)。3例患者在室间隔穿孔1周内接受手术, 其中死亡2例;推迟至4周后手术, 院内病死率为6.5%(2/31)。单因素分析结果显示, 术前肾功能不全、术前肌酐水平、心功能Ⅳ级、三尖瓣重度关闭不全、术后血液滤过治疗、术后第1天肌酐水平、手术距室间隔穿孔时间>4周与心肌梗死继发室间隔穿孔外科术后死亡相关。多因素分析结果显示, 高龄(OR=1.32, 95%CI:1.05～1.75, P=0.033)、心功能(纽约心脏病协会分级)Ⅳ级(OR=2.25, 95%CI:1.6...     

颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响

目的 探讨颗粒溶素对U937细胞分泌MCP-1、RANTES与TNF-α功能的影响.方法 ①在U937细胞中加入终浓度为100 ng/ml的乙酰肉豆蔻佛波酯(phorbol mynstate acetate,PMA),刺激2 d后,再加入不同组合的脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、葡萄球菌的脂膜酸(lipoteichoic acid,ETA)、颗粒溶素(granulysin,GNLY),刺激培养4 h后收集细胞上清,用ELISA检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)的含量.②在U937细胞或原代单核细胞中加入GNLY后,在37℃条件下,刺激4 h,收集上清,以ELISA分析MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1,单核细胞趋化因子-1)和RANTES(reduced upon acti-vation normal T expression and secreted,正常T细胞活化时表达和分泌减少因子)的含量;收集细胞并抽提总RNA后,以实时荧光定量RT-PCR方法检测部分基因表达水平的改变.结果 加入GNLY后,LPS诱导U937细胞分泌的TNF-α水平显著增加(P<0.05);U937细胞或单核细胞的MCP-1、RANTES的mRNA水平显著增加(P<0.05),上清液中MCP-1和RANTES水平也增加(P<0.05).结论 GNLY可促进LPS诱导单核细胞分泌TNF-α,本身可刺激单核细胞表达MCP-1、RANTES增高,这为以后进一步研究颗粒溶素的作用机制打下了基础.     

异丙酚联合阿托品开展无痛人流的临床观察

我院自１９９８年４月起使用异丙酚作为麻醉药联合阿托品开展无痛人流,经临床观察效果显著,现报道如下。１资料与方法１１临床资料选取我院自１９９８年４月至１９９８年１０月行人流术患者１３２例,均为健康妊娠妇女,年龄２１～３５岁,平均年龄（２８０±４５...