淡色库蚊抗性转录因子FTZ-F1蛋白原核表达与鉴定

目的 对淡色库蚊抗性转录因子FTZ-F1蛋白进行原核表达并鉴定。方法 对转录因子FTZ-F1蛋白进行生物信息学分析,包括蛋白的理化性质,二级结构及三维同源模型。采用PCR技术扩增FTZ-F1基因,比对分析后选取FTZ-F1基因保守区和功能区片段,片段长度为1122bp,然后将其连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1,再转化入感受态细胞BL21(DE3)后用IPTG诱导重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1的表达,运用SDS-PAGE和Western blot初步鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达,采用His标签镍离子蛋白纯化柱对表达产物进行纯化和增加蛋白的量,用SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白FTZ-F1的表达。结果 FTZ-F1蛋白有744个氨基酸,相对分子质量为79.57×10³。1%琼脂凝胶鉴定PCR扩增为单一条带,大约为2 240 bp,测序结果表明重组质粒pET-32a(+)-FTZ-F1构建正确。采用SDS-PAGE检测重组蛋白FTZ-F1,结果表明蛋白FTZ-F1在原核表达系统中主要以可溶...     

右美托咪定与尼卡地平用于正颌手术患者控制性降压的对比研究

目的：对比右美托咪定与尼卡地平用于正颌手术控制性降压的效果。方法：正颌患者60例,随机分为右美托咪定组（D 组）和尼卡地平组（N 组）。控制性降压：D 组以1μg／kg 剂量泵注右美托咪定,10 min 后以0．2～0．7μg／（kg·h）维持;N组泵注尼卡地平0．75μg／（kg·min）至目标血压后以0．2～0．5μg／（kg·min）维持。记录诱导前（T0）、降压即刻（T1）、降压后10 min（T2）、20 min（T3）、30 min（T4）、60 min（T5）、停止降压后10 min（T6）、30 min（T7）、术毕（T8）HR、MAP 变化;记录阿片类药物用量、拔管前 Riker 评分、拔管后5 min Ramsay 评分。结果：2组 T2～T7时 MAP 与 T0比较明显下降（P ＜0．05）;与 N 组比较,D 组拔管后5 min Ramsay 评分明显增加（P ＜0．05）,瑞芬太尼用量、拔管前 Riker 评分明显下降（P ＜0．05）。结论：与尼卡地平比较,右美托咪定行控制性降压术中血流动力学平稳、阿片类药物用量减少以及术后躁动发生率降低。     

多层螺旋CT在冠状动脉桥血管评价中的应用

目的:评价多层螺旋CT在冠状动脉搭桥术后随访的临床应用价值。方法:选择2001-12/2005-04在东南大学医学院附属扬州医院行桥血管多层螺旋CT检查的冠状动脉搭桥术后患者12例,其中1例相隔1年后复查,共13次扫描检查资料。所有患者应用美国通用电气公司的十六排八层螺旋CT机,采用snapshot冠状动脉成像方法进行检测,并进行CT图像重建后处理,重建出各主要血管及桥血管。分析桥血管和冠状动脉的通畅性,评价狭窄及狭窄程度。结果:13例次患者的22支桥血管多层螺旋CT均能很好显示,其中17支桥血管开通,5支桥血管未开通(完全闭塞)或有不同程度狭窄。13例次患者原供血血管均可见不同程度管壁钙化、管腔狭窄或闭塞。结论:多层螺旋CT可以全面地显示心脏的结构与功能、心肌的血流灌注和存活状态,直接无创显示冠状动脉,对于冠状动脉桥血管开通和狭窄的评价具有很好的价值。     

四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的作用

背景:一些实验证明多糖在感染、炎症、细胞间黏附和信号传导、免疫识别、细胞增殖分化及维持细胞正常结构和功能生理、病理等方面均起重要作用。但植物多糖对胃肠道黏膜的保护作用有待进一步研究。目的:观察不同浓度的四君子汤总多糖对大鼠小肠上皮株IEC-6细胞增殖的影响。设计:观察对比实验。单位:广东省中医院中心实验室。材料:①细胞株:正常大鼠小肠上皮细胞株IEC-6(ATCCCatalogNo.RL-1592)由美国ATCC(AmericanTypeCultureCollection)购得,主要来源于小肠隐窝细胞。②试剂和药品:DMEM培养基,牛胰岛素,庆大霉素,胎牛血清,DPBS均为GIBCO公司产品;细胞增殖试剂盒(MTT)为Roche公司产品;消炎痛为Sigma公司产品。四君子汤总多糖按药典处方比例取党参,白术,茯苓和甘草适量,加水浸泡后,煮沸提取4h,重复1次,合并提取液,减压浓缩,高速离心除去不溶物,提取液置玻璃纸中逆向流水透析2h,再于提取液中加乙醇至浓度约80%,保存过夜后分取沉淀,合并所有沉淀,采用Sevag法除去粗多糖中的蛋白,冻干后得到的总多糖。方法:①将IEC-6细胞株于干冰中取出,迅速放入37℃水浴中解冻后,加入已装有DMEM培养液的T-150培养瓶后放入CO2培养箱中,于37℃,饱和湿度,体积分数为0.05的CO2环境下培养。细胞隔天换液1次,每5～7天进行传代,传代比例为1∶7。第15～20代细胞用于实验。②IEC-6细胞以1×104/孔的浓度接种于96孔细胞培养板上,接种后6h,各培养孔内依次加入浓度为50,100,200mg/L四君子汤总多糖,即为四君子汤总多糖3个剂量组。每天定时取出1板,按试剂盒说明书以MTT法进行细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组,在相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。③将IEC-6细胞按1×104/孔的浓度接种于96孔细胞培养板中,接种后次日更换以无血清培养液DMEM,24小时后,各培养板中分别加入消炎痛以及四君子汤总多糖,其中,消炎痛使用浓度为40mmol/L,即为消炎痛组。四君子汤总多糖使用3个剂量分别为50,100,200mg/L,即为四君子汤总多糖50,100,200mg/L组。药物作用20h后,按试剂盒使用说明书进行MTT法细胞增殖检测。以未加任何干预措施的IEC-细胞作为正常对照组,在各相应时间点以MTT法进行细胞增殖检测。主要观察指标:MTT法测定四君子汤总多糖不同作用时间对IEC-6细胞生长的影响结果;MTT法测定四君子汤总多糖对消炎痛所致的IEC-6细胞生长抑制的影响结果。结果:四君子汤总多糖不同剂量于不同的培养时间对IEC-6细胞的生长均有促进作用;IEC-6细胞在给予消炎痛40mmol/L作用24h后,细胞增殖的吸光度明显低于正常对照组(0.17±0.02,0.31±0.03;P<0.01)。当四君子汤总多糖使用浓度为100mg/L时,IEC-6细胞的吸光度明显高于消炎痛组(0.25±0.04,0.17±0.02;P<0.01),虽然未达到正常IEC-6细胞吸光度的水平,但与正常组无明显差异(P>0.05)。结论:四君子汤总糖具有促进IEC-6细胞增殖的作用,它可能通过对小肠上皮细胞增殖的影响而发挥对肠道黏膜吸收和免疫功能的调整作用。     

角类动物药质量控制模式与方法的创新和发展

通过述评角类动物药质量控制模式与方法 的现状,针对角类动物药本身的特点进行分析,探索从生物鉴定的角度建立角类动物药质量控制模式和方法 的可行性,并提出基于外观鉴别-物性鉴定-化学组分分析-生物效价检测序贯分析的角类动物药质量控制模式,为从根本上解决长期制约角类动物药发展的瓶颈问题,创建一套有效的内在质量控制方法 提供新的理论依据与技术支撑.     

荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒核酸的性能验证及评价

目的荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪检测乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)的性能验证及评价。方法参考ISO15189《医学实验室质量和能力认可准则(2012年)》,以及美国临床和实验室标准化协会(CLSL)EP系列文件的相关要求对实验室HBV DNA荧光定量PCR检测系统的精密度、正确度、可报告范围、抗干扰能力进行验证及评价。结果精密度:HBV DNA定量检测高浓度(106 IU/mL)和低浓度(103 IU/mL)标本的对数值批内变异系数分别为0.67%和3.65%,批间变异系数分别为1.72%和4.52%;正确度:标准物质标本检测结果的对数值与厂商给定靶值浓度的对数值差值在±0.4个Log值内;可报告范围:试验试剂在(2.22×10)～(2.22×108)IU/mL范围内具有良好的线性,线性回归方程为Y=1.027 X-0.408,R2=0.995,≥0.95;抗干扰能力:说明书浓度的干扰物质(血红蛋白、三酰甘油、胆红素)标本结果与不含干扰物质标本比较,其浓度的对数值偏倚CV7.5%,对数值差值在±0.4个Log值内。结论荧光定量PCR仪检测HBV DNA试剂的各项性能特征与厂家声明相符,满足预期用途,适用于临床常规检测。     

茶多酚对 H2O2 诱导 PC12 细胞损伤的保护作用

目的 研究茶多酚 (tea polyphenols, TP) 对H2O2 所致大鼠嗜铬细胞 PC12 细胞损伤的保护作用。 方法PC12细胞用 TP 及H2O2 处理,MTT 法观察细胞活力,乳酸脱氢酶 (LDH) 法检测细胞膜通透性及完整性,流式细胞术测定细胞周期分布,BrdU 免疫荧光法检测细胞周期相S期 DNA 合成。 结果 500 μmol/L H2O2作用 PC12 细胞 2 h,细胞出现明显损伤,细胞活力下降,培养上清液中 LDH 量增加,DNA 合成减少;5、10、20 μmol/L TP 预处理可有效提高细胞存活率,减少 LDH 渗漏,提高S期 DNA 合成。 结论 TP 对H2O2所致的 PC12 细胞损伤有保护作用。     

脓毒症患者血清N端B型钠尿肽原水平与预后的相关性

目的探究并分析血清N端B型钠尿肽原(NT-proBNP)水平对脓毒症患者病情与预后的相关性。方法选取深圳市第二人民医院2010年1月至2012年1月收治的150例患者为研究对象,根据治疗后的预后状况分为生存组(125例)和死亡组(25例),比较两组患者血清NT-proBNP、急性生理和慢性健康状况(APACHEⅡ)评分、血乳酸及左心室射血分数(LVEF);根据脓毒症程度分为脓毒症组(55例)、严重脓毒症组(60例)、脓毒症休克组(35例),分析观察三组患者血清NT-proBNP水平及APACHEⅡ评分、血乳酸及LVEF的变化。结果存活组和死亡组患者血清NT-proBNP、血乳酸及APACHEⅡ评分和LVEF的比较,差异均有统计学意义(P<0.05);脓毒症休克组患者与严重脓毒症、轻度脓毒症组的血清NT-proBNP水平差异有统计学意义(P<0.05);血清NT-proBNP与APACHEⅡ评分存在直线相关关系。随着患者的病情加重,血清NT-proBNP、血乳酸水平及APACHEⅡ评分分别依次升高,而LVEF却降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脓毒症患者血清NT-proBNP水平明显增高,随着病情的增加,其呈线性增长趋势。血清NT-proBNP水平变化有助于评估脓毒症患者病情以及预后的判断,值得临床推广使用。     

哈尔滨市区1988-2009年居民意外伤害死因分析

目的 探讨哈尔滨市区居民意外伤害的死亡特征、分布规律和对居民健康的影响,为制订伤害防制策略提供依据.方法 采用回顾性调研究的方法对哈尔滨市区1988-2009年居民死因资料进行统计分析.结果 1988-2009年居民因意外伤害导致死亡23 161人,年平均死亡率为34.52/10万,标准化死亡率为29.66/10万,男性居民意外伤害年均粗死亡率和标准化死亡率分别为女性居民的2.24倍和2.19倍.男性居民意外伤害的前三位死因为机动车辆交通事故、自杀、被杀;女性前三位死因则为自杀、机动车辆交通事故和意外中毒.0～14岁、15～64岁和≥65岁居民年均死亡率分别为11.25/10万、35.65/10万、69.84/10万,3组不同年龄居民死亡率比较,差异有统计学意义(P＜0.01).1999-2009年居民意外伤害的死亡率和标准化死亡率比1988-1998年分别下降了25.55%和33.95%.居民意外伤害的死亡率和标准化死亡率分别由1988-1998年的39.92/10万、36.08/10万下降至1999-2009年的29.72/10万、23.83/10万.结论 哈尔滨市区居民的意外伤害死亡率在全死因中位居第四位,而在意外死亡中,交通事故是造成居民死亡的首要原因,男性居民的死亡率明显高于女性,除溺水和被杀外,其他主要意外死因≥65岁老年人的死亡率均显著高于其他年龄.意外伤害是哈尔滨市区严重的公共卫生问题,应予以重视和控制.     

急性肺损伤中性粒细胞凋亡异常及甲基强的松龙调控的研究

目的 探讨急性肺损伤时支气管肺泡灌洗液(BALF)中的中性粒细胞(PMN)凋亡发生规律及甲基强地松龙调控关系.方法 豚鼠30只,分为3组1组生理盐水正常对照组,2组油酸致病组,3组油酸+甲基强的松龙组.组2、组3分别由尾静脉注射油酸(0.12 mL/kg)造成豚鼠急性肺损伤模型.组1则注入生理盐水.油酸+甲基强的松龙组在实验造模前2 d由腹腔注射甲基强地松龙0.10 mg/kg体质量,1次/d.组1、组2、组3分别于注射后2 h用生理盐水进行全肺支气管肺灌洗,收集BALF.用梯度密度法离心收集PMN.用原位末端标记法检测BALF中PMN凋亡.结果 油酸致病组、油酸+甲基强的松龙组和正常对照组BALF中PMN凋亡百分比分别是(2.500±1.080)%、(4.200±1.033)%和(6.400±1.505)%.油酸致病组、油酸+甲强龙组较正常对照组BALF中PMN凋亡均显著降低(均P＜0.01).结论 急性肺损伤炎性细胞PMN凋亡延迟,PMN持续激活和释放毒性内容物与肺损伤有密切关系.甲基强地松龙能调控干预急性肺损伤时PMN凋亡延迟.