人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响

目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对重组真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5进行酶切鉴定和测序。以脂质体转染法将pBudCE4 .1/VEGF16 5导入VEC中 ,用Northernblot和免疫细胞化学染色法 ,分别从mR NA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达 ,并检测表达产物对VEC增殖的影响。结果 :人VEGF16 5基因的RT PCR产物为 5 76bp。测序结果显示 ,扩增的VEGF16 5基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致。经HindⅢ和BamHI酶切鉴定证实 ,VEGF16 5基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4 .1中。以其转染血管内皮细胞 (VEC)后 ,经Northernblot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF16 5基因表达。表达产物对VEC增殖有明显的促进作用。结论 :所构建的pBudCE4 .1/VEGF16 5真核表达质粒可在VEC中表达 ,表达产物可明显促进VEC增殖 ,为通过VEGF16 5基因转染防治移植器官内血管的狭窄奠定了基础     

参附注射液对非小细胞肺癌化疗所致骨髓抑制的影响探讨

目的:观察参附注射液对非小细胞肺癌化疗所致骨髓抑制的影响.方法:参附组加用参附注射液进行辅助化疗.结果:参附组骨髓抑制较对照组轻.结论:参附注射液可减轻化疗引起的骨髓抑制.     

pcDNA3.1(+)/t-PA真核表达质粒的构建及其在血管内皮细胞中的表达

目的　利用基因工程技术克隆人组织纤溶酶原激活物 (t- PA)基因并构建一种能在血管内皮细胞 (VEC)中高效、安全表达 t- PA的 pc DNA3.1(+) / t- PA真核表达重组质粒。方法　采用高效 Trizol试剂快速从胎儿肺组织中提取总 RNA,RT- PCR获得 t- PA c DNA,并将真核表达质粒 pc DNA3.1(+)和 t- PA基因片段分别双酶切 ,将回收的 pc DNA3.1(+)大片段 (5 .0 kb)与 t- PA基因片段 (1.9kb)重组。对 pc DNA 3.1(+) / t- PA质粒进行酶切鉴定和测序。脂质体介导 pc DNA3.1(+) / t- PA转染血管内皮细胞 ,并用 RT- PCR法和 EL ISA法分别从 m RNA水平和蛋白质水平检测 t- PA的表达情况。结果　成功地从胎儿肺组织中克隆了 t- PA基因 ,并构建了以 pc DNA 3.1(+)为载体的真核表达质粒载体。pc DNA3.1(+) / t- PA转染血管内皮细胞后 ,t- PA表达增加 ,(n=6 ,P<0 .0 1)。结论　含t- PA基因真核表达质粒构建成功     

转染t-PA基因对防治血管重建术后再狭窄的研究

目的观察在血管局部转染t-PA基因对血管损伤和重建术后早期再狭窄的影响,旨在为防治血管重建术后再狭窄(RS)提供试验依据。方法损伤日本大白兔髂外动脉复制动脉再狭窄模型,术后随机分为3组(每组n=20):A组,假弓术组;B组,生理盐水;C组,局部转染真核表达质粒pcDNA3.1(+)/t-PA。每组按预定的时间(3d,1w,2w,4w,8w)分为5个亚组,于相应时间点作B超检查兔右髂外动脉(REIA)内径,并取标本行病理学检查,IHC检测t-PA蛋白表达。结果B超提示:C组吻合口内径显著大于B组(P<0.01),病理学检查,C组的内膜面积,狭窄率比B组显著降低(P<0.05),C组管腔狭窄率比B组降低70%,IHC检测t-PA蛋白表达C组3d即开始,1w达峰值,2w开始下降,至8w恢复正常。结论血管局部转染t-PA基因,早期能显著抑制血管重建术后血栓形成,并抑制VSMC增殖。对控制血管重建术后RS发生有明显作用。