乳头瘤病毒表位融合蛋白的基因定点诱变

目的定点诱变热休克蛋白-乳头瘤病毒表位融合蛋白的基因中编码半胱氨酸的密码子,解决下游纯化工作中产生多聚体蛋白的问题。方法在对蛋白质序列进行计算机表位预测及生物学特性分析的基础上,利用PCR的定点诱变技术,使原始基因序列中编码半胱氨酸的TGC突变为编码甘氨酸的GGC,克隆并表达了该基因编码的蛋白质。结果经克隆、测序后证实已成功获得突变基因,其编码的融合蛋白经纯化后没有多聚体的产生。结论利用PCR定点诱变技术对基因进行突变,在不改变蛋白质抗原性质的基础上,优化蛋白质序列,提高蛋白质纯化质量和效率。     

人酸性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌的高效表达

目的：探讨人酸性成纤维细胞生长因子（acidic fibroblast growth factor, aFGF）在大肠杆菌中高效表达的方法及重组人aFGF的生物学活性。方法：①通过PCR法扩增人aFGF引入点突变,对其密码子进行改造;②构建aFGF-pET-28a重组质粒并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;③重组蛋白的纯化及生物学活性研究。结果：通过PCR扩增,将设计的核酸水平突变引入到aFGF DNA中,使其自起始密码ATG后的前50个碱基均为原核细胞偏爱密码子、并保持原氨基酸序列不变,成功地实现了重组人aFGF在大肠杆菌中的高效表达,并通过降低培养温度使大肠杆菌中可溶性目的蛋白的含量大幅增加,原核表达的aFGF亦具有天然生物学活性。结论：通过对aFGF DNA碱基进行改造,可大幅度提高aFGF在大肠杆菌中的表达量,且目的蛋白具有良好的生物学活性。     

单核细胞趋化蛋白-1基因-2518G/A多态性与中国湖南地区汉族人群脑梗死关系的研究

目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)基因-2518G/A多态性与中国湖南地区汉族人群脑梗死(CI)的关系。方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)、DNA测序等方法检测162例CI患者(CI组)和150名健康对照者(NC组)MCP-1基因-2518G/A多态性;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组血清MCP-1水平。结果CI组GG、GA、AA基因型频率分别为39.5%、37.0%、23.5%,G、A等位基因频率分别为58.0%、42.0%;NC组GG、GA、AA基因型频率分别为27.3%、39.3%、33.4%,G、A等位基因频率分别为47.0%、53.0%。CI组GG基因型和G等位基因频率显著高于NC组(均P<0.05)。CI组血清MCP-1含量[(157.68±11.60)pg/ml]明显高于NC组[(131.82±10.72)pg/ml](P<0.05);MCP-1基因-2518G/A多态位点中含G等位基因者(GG+GA)血清MCP-1含量[(149.44±15.71)pg/ml]显著高于非G等位基因携带者(AA)[(134.57±15.84)pg/ml](P<0.05)。结论MCP-1基因-2518G/A位点的G等位基因可能是中国湖南地区汉族人群CI发病的遗传易感基因。携带G等位基因的个体可能通过上调MCP-1表达而增加CI的发病风险。     

1.5T MRI动态增强定量参数对不同级别前列腺癌的诊断价值

目的：分析与探索1.5T磁共振动态增强定量参数，对于各级别前列腺癌诊断的作用。方法：回顾分析我院2016年12月至2020年9月经手术病理证实并于术前2周内接受盆腔MRI动态增强扫描的前列腺癌患者45例，按前列腺癌病理分级将其分为高、低级别两组，测量各组动态增强扫描MRI的定量参数K_trans、K_ep、V_e，比较两组各定量参数的差异。结果：高级别组中的前列腺癌定量参数K_trans、K_ep、V_e为(0.65±0.44)min、(5.28±5.12)min、0.23±0.05；低级别组中前列腺癌定量参数K_trans、K_ep、V_e为(0.32±0.10)min、(1.60±1.18)min、0.25±0.03。高、低级别前列腺癌的K_trans、K_ep值比较异差具有统计学意义(P<0.05)；两组V_e值差异无统计学意义(P>...