HBV基因组各基因真核表达载体的构建及转染

目的 构建HBV基因组各基因真核表达载体,转染HepG2细胞,建立稳定转染的HepG2细胞系.方法 采用PCR方法,以HBV全基因组质粒为模板扩增HBV基因的各基因片段,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染HepG2细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的HepG2细胞系,用细胞流式技术及细胞免疫组化技术检测HBV各基因产物在细胞内的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1( )/HBs、pcDNA3.1( )/HBc、pcDNA3.1( )/HBe、pcDNA3.1( )/HBp、pcDNA3.1( )/HB-preS1、pcDNA3.1( )/HB-preS2、pcDNA3.1( )/HBx真核表达载体,并建立了稳定转染的HepG2细胞系,成功地表达目的 基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染HepG2细胞系的建立为进一步研究各基因的功能奠定良好的实验基础.     

肾小管上皮细胞表达共刺激分子B7-DC并抑制CD4+T细胞活化

目的 探讨肾小管上皮细胞(TECs)表达B7-DC及其对T细胞活化的调节作用.方法 免疫组化检测肾穿刺标本B7-DC表达;流式细胞术分析人及小鼠肾小管上皮细胞B7-DC的表达变化;使用TECs/CD4 T共培养分析TECs表达的B7-DC对CD4 T细胞活化的影响.结果 慢性肾小球肾炎、狼疮性肾炎、小管间质性.肾炎等肾活检组织中发现B7-DC显著表达于肾小管.IFN-γ、TNF-a等炎症因子可诱导体外.肾小管上皮细胞表达137-DC.共培养试验发现阻断B7-DC信号可增强CD4 T细胞分泌细胞因子IFN-γ及IL-2并促进CD4 T细胞表达CD69.结论 肾小管上皮细胞表达B7-DC并可显著下调CD4 T细胞活化,在多种慢性肾脏疾病发展中可能发挥重要作用.     

Pre－S_（2）蛋白T细胞识别的精细特异性

本文采用合成交叠肽扫描的方法在６种不同Ｈ－２单倍型小鼠确定了ｄ／ｙ二种亚型Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白的Ｔ细胞识别部位。发现：（１）在所观察的６种同类系小鼠均存在对Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白反应的亚型特异性，这可能与Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白分子Ｃ末端的多态性有关；（２）Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白的Ｔ细胞识别部位在５种同类系小鼠位于Ｃ末端３２个氨基酸残基顺序内，在另一种同类系小鼠则位于Ｎ末端顺序，这与我们先前的理论观测结果相一致；（３）进一步分析发现：不同Ｈ２单倍型小鼠对Ｐｒｅ－Ｓ＿（２）蛋白的Ｔ细胞识别是ＭＨＣ分子依赖的；（４）２４－５５肽段的圆二色性表明该肽段内存在一个α－螺旋，可能是其作为Ｔ细胞识别部位的结构基础。以上结果对于设计新一代乙型肝炎疫苗有意义。     

SARS冠状病毒M蛋白HLA-A*0201限制性CTL表位的预测

目的 预测SAR冠状病霉M蛋白的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法 联合应用简单基序法和延展基序法。结果 预的测出4个九肽CTL表位。结论通过对SARS冠状病毒M蛋白抗原CTL表位进行预测，从而为SARS冠状病毒M蛋白CTL表位的实验探测和鉴定提供了线索，为认识CTL介导的细胞免疫机制以及基于CTL表位的疫苗研制提供了基础资料。     

应用CompBeads建立流式多色分析补偿的方法

目的 探讨一种快速简便的流式细胞仪多色分析时的关键参数(荧光补偿)设置方法.方法 以BD CompBeads、实验样品(本实验为慢性乙型肝炎患者外周全血)分别与单克隆荧光抗体染色,结合流式细胞仪Diva软件调节细胞仪光电倍增管(PMT)电压,计算建立荧光补偿矩阵.同时以获得的参数设置仪器,运行慢性乙型肝炎患者外周全血6色荧光标记实验样品.结果 用CompBeads建立的补偿参数稳定可靠,能有效消除荧光光谱之间的交叉重叠.6色荧光标记实验样品检测的结果,可见细胞亚群分布清晰,荧光强度比例表达适当,与通常采用的实验样品单染色方法补偿结果一致(P>0.05).结论 该方法能快速方便进行流式细胞仪检测时仪器参数最佳化设置调整,在多色免疫标记流式检测中有较大的应用价值.     

面向21世纪的免疫学教改体会

免疫学是一门前沿学科，其理论及技术涉及医学的各个领域。对于21世纪的医学人才，免疫学无疑是其基础医学教育的重要组成部分。本室着眼于21世纪高素质人才培养的需要，在进行充分调研的基础上，借鉴国际先进经验，结合我校实际，对医学本科生免疫学课程进行了教学改革。     

计算机多媒体辅助医学免疫学教学的体会

免疫学是一门新兴的前沿学科 ,随着免疫学的迅猛发展 ,现代免疫学已经渗透到基础医学和临床医学的许多领域 ,成为生物医学重要的基础学科之一。近年来 ,计算机多媒体辅助教学在各大高校教学中得到了广泛的应用。计算机多媒体技术是将文字、图像、声音等多种表达知识的媒体结合在一起 ,具有信息载体多样性、集成性和交互性等特点 ,深受学生的欢迎［１］。它改变了“一本书店、一张嘴、外加板书和挂图”的传统教学模式 ,对提高医学课程的教学效果发挥了重要作用。对于免疫学教学而言 ,多媒体辅助的计算机教学也极大地使过于理论化、抽象的免疫…     

盐酸托莫西汀

[通用名称 ]　ｔｏｍｏｘｅｔｉｎｅｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ ,盐酸托莫西汀[商品名 ]　Ｓｔｒａｔｔｅｒａ[化学名称 ]　 (- ) Ｎ 甲基 3 苯基 3 (Ｏ 氧甲苯 ) 盐酸丙胺　　 [理化性状 ]　本品为白色固体粉末 ,易溶于水(溶解度为 2 7.8ｍｇ·ｍＬ- 1) ;相对分子质量为 2 91.82 ,Ｘ线衍射证实其为Ｒ(- )异构体。[药理作用 ]　注意缺陷障碍 (ａｔｔｅｎｔｉｏｎｄｅｆｉｃｉｔｈｙｐｅｒａｃｔｉｖｉｔｙｄｉｓｏｒｄｅｒ ,ＡＤＨＤ) ,又称儿童多动症 ,发病率约为 5 %～ 7% ,目前多认为其发病机制与儿茶酚胺类神经递质多巴胺和去甲肾…     

人恶性胶质瘤细胞SHG-44经诺帝诱导分化后形态学改变及差异表达蛋白的质谱分析

目的:观察人恶性胶质瘤细胞SHG-44经去甲二氢愈创木酸类似物--诺帝诱导分化后形态学的改变,并分析差异表达蛋白.方法:分别用100、200 μmol/L诺帝诱导SHG-44细胞分化,观察处理后24、48、72 h细胞形态学的改变,并与未受刺激的空白对照组相比较;提取200μmol/L诺帝处理后的SHG 44细胞以及空白对照组细胞总蛋白进行双向电泳,用PDqest7.1软件比较两者间的差异表达蛋白,离子飞行时间质谱仪分析高丰度表达的差异蛋白.结果:200 μmol/L诺帝处理后SHG-44细胞的形态学改变较100 μmol/L更为明显;处理72 h时细胞分化最为明显.与空白对照组SHG-44细胞相比,经200 μmol/L诺帝诱导后,双向电泳发现了23个差异蛋白点,其中21个蛋白点表达下调,2个蛋白点表达上调.质谱分析高丰度表达的差异蛋白分别为:未知蛋白、增殖相关基因A、解链蛋白Up1、交替拼接因子ASF-3、cofiln 1、真核转录启动因子5A、β半乳糖苷酶结合凝集素、Pi类谷光苷肽-S-转移酶.结论:诺帝能诱导人恶性胶质瘤细胞SHG-44分化,并呈一定的时效及量-效依赖性,分化后的差异蛋白涉及到细胞增殖、分化、凋亡及基因转录调控等多个方面.     

Prostein31-39特异的、HLA-A*2.1限制性NKT细胞表型及功能初步研究

目的诱导培养前列腺癌相关抗原Prostein特异性NKT细胞,并对其表型及功能作初步研究鉴定。方法以Prostein31-39肽、IL-2、IL-12反复刺激培养HLA-A*2.1 健康志愿者外周血单个核细胞(PBMCs),对得到的细胞系进行细胞毒功能试验,并以多色流式细胞检测技术进行表型分析。结果Prostein31-39肽、IL-2、IL-12可以诱导PBMCs产生肽特异性CD3 /CD56 NKT细胞,具有较强的肽特异性细胞毒活性及NK样细胞毒活性。结论Prostein31-39肽、IL-2及IL-12可以协同诱导培养肽特异性NKT细胞,这为研究抗原特异性NKT细胞在前列腺癌免疫治疗中的作用奠定了基础。