骨髓间充质干细胞对急性出血坏死性胰腺炎大鼠肺组织Toll样受体2/4mRNA表达的影响及意义

目的 研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)对急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)大鼠肺组织T0ll样受体(TLR)2/4表达的影响并初步探讨其机制.方法 采用逆行胰胆管牛磺胆酸钠注射制造AHNP大鼠模型,动物分为假手术组、胰腺炎组和BMSCs治疗组;流式细胞仪检测BMSCs表面标记阳性细胞率;RT-PCR方法检测肺组织TLR2/4mRNA表达变化;同时观察肺组织形态学改变,进行肺湿/干重比(W/D)测定.结果 与假手术组比较,胰腺炎组大鼠从3h时肺组织TLR2/4mRNA表达开始增高,在12 h时肺组织TLR2/4mRNA表达达到峰值;同时肺损伤加重,肺组织TNF-α浓度升高(P＜0.05).给予BMSCs治疗后,TLR2/4mRNA表达降低,肺损伤程度减轻,肺组织TNF-α浓度降低(P＜0.05).结论 急性出血坏死性胰腺炎时,组织内TLR2和TLR4mRNA表达上调,肺组织损伤加重.BMSCs可以明显抑制AHNP肺组织TLR2/4mRNA的表达,降低肺组织TNF-α浓度,从而减轻肺损伤.

Abstract：

Objective To investigate the effect of bone mesenchymal stem cells on Toll-like receptors (TLR) 2/4 expression in the lungs of rats with acute hemorrhagic necrotizing pancreatitis (AHNP). Methods Seventy SD male rats were randomly divided into sham-operation group (n=10), AHNP group(n=30) and MSCs-treated group(n=30). Masc rate of BMSCs with surface mark were measured by flow cytometer. TLR2/4mRNA expression in the the lung were measured by RT-PCR, and The ratio of Wet/dry and lung histological changs were observed. Results TLR2/4 mRNA could be detected in the lungs with low values in sham-operation group, markedly increased in 3 h, and peaked in 12 h in AHNP group (P＜0.05). Lung injuries were aggravated and the levels of TNF-α in the lung were increased (P＜0. 05) . Treatment with MSCs could effectively inhibit TLR2/4 mRNA expression and relieve lung injuries. The levels of TNF-α in the lung were decreased (P＜0.05). Conclusions The expression of TLR2/4 mRNA is increased in the lungs in AHNP and the lung injuries are aggravated. MSCs could markedly inhibit TLR2/4 mRNA expression in the lungs in AHNP, which would lead to relief of lung injury.     

特殊营养膳对重症急性胰腺炎患者的血糖调控作用

目的探讨特殊营养膳对重症急性胰腺炎患者的血糖调控作用。方法将60例重症急性胰腺炎患者随机分为对照组和治疗组,分别给予常规营养膳及特殊营养膳。在不同时间监测急性期反应、胰腺病变、血糖变化、感染及其相关并发症的发生率、病死率和住院天数。结果两组急性期反应指标及胰腺病变无明显差异,但治疗组各时间点血糖平均水平及胰岛素用量、感染及其相关并发症的发生率及住院天数显著低于对照组,但病死率无显著差别。结论特殊营养膳能有效缓解重症急性胰腺炎急性期反应,通过对血糖的调控减少感染及其相关并发症的发生。     

血管内皮生长因子-C反义寡核苷酸对胰腺癌淋巴管及血管生成的影响

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)-C反义寡核苷酸对胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型淋巴管及血管生成的影响。方法建立人胰腺癌细胞株panc-1裸鼠原位种植瘤模型,将动物随机分为磷酸盐缓冲液(PBS)对照组(A组)、错义对照组(B组)和反义VEGF-C干预组(C组),每组10只,寡核苷酸用量为每次10 mg/kg体重,隔日1次,每周3次,共3周。建模4周后,处死动物,留取血清和瘤体标本,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组织化学染色法检测反义VEGF-C干预对VEGF-C分泌水平及种植瘤淋巴管和血管生成的影响。结果A、B和C组血清VEGF-C的蛋白表达水平分别为(237．5±41．5)、(221．5±52．3)、(108．6±14．9)ng/L,C组较A、B组明显为低(P＜0．01)；3组种植瘤内淋巴管密度分别为13．8±2．1、12．4±1．9和4．2±1．6,C组较A、B组显著减少(P＜0．01)；3组种植瘤内微血管密度分别为27．5±8．7、25．9±4．2和19．4±5．6,组间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论反义寡核苷酸干预可以显著降低胰腺癌裸鼠原位种植瘤模型VEGF-C的表达水平,并对其淋巴管生成具有抑制作用。     

CPG ODN对人胰腺癌细胞株Panc-1生物学行为的影响及TLR9蛋白在胰腺癌中的表达

目的 检测TLR9在人胰腺癌及胰腺癌细胞中的表达,研究CPG ODN2216对Panc-1细胞生物学行为的影响,并探讨其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法确认TLR9蛋白在胰腺癌组织中的高表达,免疫荧光确认其在胰腺癌细胞株Panc-1中的高表达.通过细胞黏附、划痕实验、侵袭实验、细胞克隆及MTT增殖实验,研究CPG ODN2216对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响.结果 人胰腺癌标本及人胰腺癌细胞株Panc-1均高表达TLR9.划痕实验、体外黏附实验、基质胶侵袭实验、细胞克隆实验证明CPG ODN2216实验组细胞黏附力及活动力明显低于未加序列对照组.MTT法检测序列组增殖力明显低于未加序列对照组,且增殖活性具有时间剂量依赖性.结论 TLR9基因与人类胰腺癌的侵袭转移潜能相关,外源配体CPG ODN2216的使用可明显抑制人类胰腺癌细胞Panc-1的侵袭、迁移能力.

Abstract：

Objective To detect the expression of Toll-like receptor 9 (TLR9) in pancreatic cancer and to study the effect of CPG ODN2216 on the biological behavior of pancreatic cell carcinoma, and to explore their clinical significance. Methods Immunohistochemical method was used to examine the expression of TLR9 protein in pancreatic cancer tissue and immunofluorescence staining was also performed to detect TLR9 protein expression in pancreatic carcinoma cells. In vitro cell adhesion, wound-healing scrape assay, transwell invasion assay and cell colony formation assay were performed to assess the effect of CPG ODN2216 on the invasive properties of Panc-1 cells. Results TLR9 were highly expressed in the pancreatic cancer tissue and pancreatic carcinoma cells. In vitro experiments as cell spreading assays, cell adhesion, colony formation assay and invasion assays showed the cell adhesion and cell motility properties of CPG ODN 2216 group to be apparently weakened compared with the control group. MTT assay showed cell proliferation ability in the CPG ODN group to be notably decreased, and CPG ODN2216 had inhibitive effects on the growth of panc-1 cells in a dose and time-dependent manner. Conclusions TLR9 gene was correlated with the invasive and metastatic potentials of pancreatic carcinoma. The used of CPG ODN2216 induced the inhibition of migration and invasion of the Panc-1 cell line.     

胰腺实性假乳头状瘤的诊断和外科治疗

目的 探讨胰腺实性假乳头状瘤(SPT)的诊断和外科治疗方法.方法 回顾分析华中科技大学同济医学院附属协和医院胰腺外科中心自2003年至2007年收治的21例胰腺实性假乳头状瘤病人的临床、影像、手术以及随访资料.结果 21例确诊为胰腺实性假乳头状瘤的病人中,女18例,男3例,平均年龄33岁.病人的临床资料、影像学检查、术中探查对SPT的诊断及手术方式的选择具有较大的价值;其中行保留十二指肠的胰头切除术7例,3例行胰十二指肠切除术,其中2例因肿块侵犯血管行胰十二指肠切除联合血管切除及重建术,4例行胰腺节段切除术,5例行保留脾脏的胰体尾部分切除术,2例行胰尾切除联合脾脏切除,1例因肿瘤侵犯周围组织行胰体尾切除、脾脏切除术、左肾上腺部分切除术.术后病理学检查均证实为胰腺实性假乳头状瘤.随访结果显示所有病例均存活.结论 对SPT的诊断要充分重视病人的临床资料、影像学检查以及术中探查的结果,进而采用积极、恰当的手术切除治疗.     

延迟的丙酮酸乙酯治疗对重症急性胰腺炎大鼠胰外脏器损伤的影响及其机制

目的:探讨延迟的丙酮酸乙酯(EP)治疗对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠血清高迁移率族蛋白1(HMGB1)水平和胰外脏器损伤的影响.方法:96只大鼠随机分为3组,假手术组(Sham组,n=32)、重症急性胰腺炎组(SAP组,n= 32)和丙酮酸乙酯延迟治疗组(EP组,n=32),采用胰胆管逆行灌注人工胆汁的方法复制大鼠SAP模型.EP组建模12,18,30h分别尾静脉注射1次EP溶液30 mg/kg.建模后24和48h处死动物取材,取血清检测HMGB1水平及肝肾功能生化指标,取肺组织用于肺损伤检测.结果:延迟的EP治疗能有效降低SAP大鼠血清HMGB1水平.EP组血清丙氨酸转氨酶(ALT, 446±91 IU/L vs 53±98 IU/L.P<0.01)、天冬氨酸转氨酶(AS T.667±103 IU/L vs 1368±271 IU/L,P<0.01)、尿素氮(BUN,38±4 mg/ dL vs 41±4 mg/dL,P=0.05)和肌酐(Cr,1.2±0.3 mg/dL vs 1.8±0.3 mg/dL,P<0.01)水平以及肺湿/干比(8.22±0.42 vs 9.76±0.45,P<0.01)和组织学评分(7.1±0.7 vs 8.4±1.1,P<0.01)均明显低于SAP组.结论:延迟的EP治疗通过下调血清HMGB1水平减轻SAP大鼠胰外脏器损伤.EP可能是SAP患者抗炎治疗和脏器功能保护的有效选择.     

内皮源性toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的 探索内皮源性或髓源性细胞表面toll样受体4(TLR4)介入急性肺损伤(ALI)的作用. 方法 采用TLR4基因突变(C3H/HeJ品系,TLR4mut/mut)及野生型(C3H/HeN,TLB4+/+)小鼠,通过骨髓移植建立"内皮细胞TLR4+/+髓系细胞TLR4mut/mut"(WT/Mutant:受体/供体)及Mutant/WT嵌合体小鼠,尾静脉注射LPS(5 mg·kg-1)复制ALI模型,5 h后测肺组织湿干重比(W/D),肺通透指数(LPI),肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平、炎症因子及黏附分子水平. 结果 TLR4mut/mut小鼠肺损伤较TLR4+/+小鼠较轻,WT/Mutant组小鼠肺组织损伤较Mutant/WT组重,且WT/Mutant组与WT/WT组差异无统计学意义.WT/Mutant组小鼠肺组织MPO水平、ICAM-1表达水平较Mutant/WT组高,且ICAM-1表达水平WT/Mutant组小鼠与WT/WT小鼠比较差异无统计学意义.炎症因子TNF-α、IL-1β的水平Mutant/WT组较WT/Mutant组高. 结论 内皮源性TLR4通过调控黏附分子表达而促进PMN肺组织招募,在介导LPS诱导的ALI中的发挥核心作用.     

保留脾脏胰腺体尾切除术的临床应用研究

目的 探讨保留脾脏胰腺远端切除术的手术适应证及临床意义.方法 回顾性分析75例因胰腺体尾部占位病变而施行保留脾脏胰腺远端切除术病人的临床诊疗资料.结果 本组75例均成功行保留脾脏胰腺体尾切除术,其中浆液性囊腺瘤18例、黏液性囊腺瘤15例,胰腺实性假乳头状瘤11例,慢性胰腺炎9例,导管内乳头状黏液性肿瘤8例(其中2例有恶...     

肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义

目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体4在肝脏缺血再灌注损伤小鼠肺组织中的表达及意义.方法 以野生型小鼠C3h/Heouj及TLR4缺失小鼠C3h/Hej复制全肝脏缺血再灌注损伤模型,分别于缺血20 min再灌注1 h,6 h时经支气管肺泡灌洗(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)获取肺泡巨噬细胞和肺泡灌洗液,采用免疫组织化学法检测肺泡巨噬细胞表面TLR4的表达,并以鲎试剂内毒素检测试剂盒和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测灌洗液中内毒素及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平.同时检测肺组织湿/干重比值、肺组织髓过氧化物酶(myeloperosidase,MPO)的含量以及计算肺组织学评分.结果 (1)与假手术组小鼠相比,野生型小鼠(C3h/Heouj)在缺血再灌后各时间点肺泡巨噬细胞Toll样受体4蛋白表达升高,6 h强于1 h,且支气管肺泡灌洗液中TNF-α的水平明显升高,肺组织湿/干重比值持续升高,MPO的含量持续增加(P＜0.05).(2)与C3h/Heouj小鼠相比,C3h/Hq组小鼠在再灌注后支气管肺泡灌洗液中TNF-α的含量明显降低(P＜0.05),肺损伤明显减轻(P＜0.05),肺组织湿/干重比值及MPO的含量明显下降(P＜0.05).(3)各组小鼠缺血再灌注后1 h肺泡灌洗液中内毒素水平与假手术组相比,差异无统计学意义(P＜0.05),而在6 h时则明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 小鼠全肝缺血再灌注过程中,肺泡巨噬细胞表面Toll样受体4激活,并与肺功能损伤有关.     

氯喹减轻重症急性胰腺炎肝损伤的机制研究

目的：探讨氯喹（CQ）减轻重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤作用的机制。方法：60只Wistar雄性大鼠分为假手术组,SAP组,L-Arg治疗组,L-NAME治疗组,CQ治疗组,CQ+ L-NAME治疗组,每组各10只。RT-PCR和Western Blot检测肝组织TLR4的表达。结果：SAP 组肝组织TLR4表达明显增高,一氧化氮（NO）浓度降低,肝损伤加重(P<0.05)。L-Arg组NO升高,TLR4表达受抑,肝损伤减轻(P<0.05)。L-NAME组NO明显抑制,肝组织TLR4表达升高,肝损伤加重(P<0.05)。CQ组TLR4表达降低,肝组织NO升高,肝损伤减轻(P<0.05)。CQ+L-NAME组肝组织NO明显降低,TLR4升高,肝损伤加重(P<0.05)。结论：TLR4表达上调在SAP肝损伤的发生、发展中可能有重要作用。CQ可能通过提高NO的合成和释放而抑制TLR4的表达,减轻SAP并发肝损伤。