CPG ODN对人胰腺癌细胞株Panc-1生物学行为的影响及TLR9蛋白在胰腺癌中的表达

目的 检测TLR9在人胰腺癌及胰腺癌细胞中的表达,研究CPG ODN2216对Panc-1细胞生物学行为的影响,并探讨其临床意义.方法 通过免疫组织化学方法确认TLR9蛋白在胰腺癌组织中的高表达,免疫荧光确认其在胰腺癌细胞株Panc-1中的高表达.通过细胞黏附、划痕实验、侵袭实验、细胞克隆及MTT增殖实验,研究CPG ODN2216对细胞黏附力、活动力及增殖力的影响.结果 人胰腺癌标本及人胰腺癌细胞株Panc-1均高表达TLR9.划痕实验、体外黏附实验、基质胶侵袭实验、细胞克隆实验证明CPG ODN2216实验组细胞黏附力及活动力明显低于未加序列对照组.MTT法检测序列组增殖力明显低于未加序列对照组,且增殖活性具有时间剂量依赖性.结论 TLR9基因与人类胰腺癌的侵袭转移潜能相关,外源配体CPG ODN2216的使用可明显抑制人类胰腺癌细胞Panc-1的侵袭、迁移能力.

Abstract：

Objective To detect the expression of Toll-like receptor 9 (TLR9) in pancreatic cancer and to study the effect of CPG ODN2216 on the biological behavior of pancreatic cell carcinoma, and to explore their clinical significance. Methods Immunohistochemical method was used to examine the expression of TLR9 protein in pancreatic cancer tissue and immunofluorescence staining was also performed to detect TLR9 protein expression in pancreatic carcinoma cells. In vitro cell adhesion, wound-healing scrape assay, transwell invasion assay and cell colony formation assay were performed to assess the effect of CPG ODN2216 on the invasive properties of Panc-1 cells. Results TLR9 were highly expressed in the pancreatic cancer tissue and pancreatic carcinoma cells. In vitro experiments as cell spreading assays, cell adhesion, colony formation assay and invasion assays showed the cell adhesion and cell motility properties of CPG ODN 2216 group to be apparently weakened compared with the control group. MTT assay showed cell proliferation ability in the CPG ODN group to be notably decreased, and CPG ODN2216 had inhibitive effects on the growth of panc-1 cells in a dose and time-dependent manner. Conclusions TLR9 gene was correlated with the invasive and metastatic potentials of pancreatic carcinoma. The used of CPG ODN2216 induced the inhibition of migration and invasion of the Panc-1 cell line.     

胰腺癌的早期诊断

正胰腺癌是一种高度恶性的消化系统肿瘤,近年来其发病率和病死率均有升高趋势。美国癌症协会最新统计数据表明,2018年全美新发胰腺癌病例数预计为55 440例,死亡病例数预计为44 330例,已超越乳腺癌,居恶性肿瘤相关病死率第3位[1]。2015年国内统计数据表明胰腺癌病死率居第6位[2]。虽然近年来胰腺癌的诊疗技术取得了较大进步,但其预后并未显著改善,5年生存率仍     

胰十二指肠切除术后出血的防治

正胰十二指肠切除术(pancreaticoduodenectomy,PD)是治疗胰头、十二指肠及壶腹部恶性肿瘤及部分良性疾病的主要手术方式,其手术范围广,创伤大,并发症和手术病死率也相对较高。PD主要术后并发症包括胰瘘、胆瘘、乳糜瘘、术后出血、腹腔感染、胃排空延迟等[1],其中术后出血是一种严重并发症,可危及患者生命[2]。随着医疗技术和手术技巧的提高,在大的胰腺外科中心,胰十二指     

乌司他丁对蝮蛇咬伤患者肝肾功能的保护作用

目的　观察蝮蛇咬伤患者应用乌司他丁对肝肾功能的保护作用。方法　 5 1例蝮蛇咬伤合并肝肾功能损害的患者分为观察组 (2 6例 )和对照组 (2 5例 )。除常规治疗外 ,观察组予以乌司他丁 2 0万UQ12hivgtt,疗程 7～ 10d ;对照组不用乌司他丁。分别检测患者治疗前及治疗 1周后血清Cr、BUN、K 和日尿量用于评价肾功能 ;血清TBil、ALT用于评价肝功能。结果　观察组血清Cr、BUN和ALT明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,观察组日尿量较对照组明显增多 (P <0 .0 5 ) ,两组有统计学差异。结论　蝮蛇咬伤患者应用乌司他丁对肝肾功能的恢复有积极的作用     

内皮源性toll样受体4在急性肺损伤中的作用

目的 探索内皮源性或髓源性细胞表面toll样受体4(TLR4)介入急性肺损伤(ALI)的作用. 方法 采用TLR4基因突变(C3H/HeJ品系,TLR4mut/mut)及野生型(C3H/HeN,TLB4+/+)小鼠,通过骨髓移植建立"内皮细胞TLR4+/+髓系细胞TLR4mut/mut"(WT/Mutant:受体/供体)及Mutant/WT嵌合体小鼠,尾静脉注射LPS(5 mg·kg-1)复制ALI模型,5 h后测肺组织湿干重比(W/D),肺通透指数(LPI),肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平、炎症因子及黏附分子水平. 结果 TLR4mut/mut小鼠肺损伤较TLR4+/+小鼠较轻,WT/Mutant组小鼠肺组织损伤较Mutant/WT组重,且WT/Mutant组与WT/WT组差异无统计学意义.WT/Mutant组小鼠肺组织MPO水平、ICAM-1表达水平较Mutant/WT组高,且ICAM-1表达水平WT/Mutant组小鼠与WT/WT小鼠比较差异无统计学意义.炎症因子TNF-α、IL-1β的水平Mutant/WT组较WT/Mutant组高. 结论 内皮源性TLR4通过调控黏附分子表达而促进PMN肺组织招募,在介导LPS诱导的ALI中的发挥核心作用.     

MT2-MMP基因沉默对缺氧条件下培养的胰腺癌AsPC-1细胞增殖、凋亡及侵袭力的影响

目的 利用特异性siRNA沉默人胰腺癌AsPC-1细胞的膜型金属蛋白酶2（MT2-MMP）基因表达,观察其对缺氧条件下培养的细胞增殖、凋亡和侵袭力的影响.方法 采用脂质体转染法将插入MT2-MMP特异性siRNA的真核表达质粒转染至人胰腺癌AsPC-1细胞株（siRNA组）,以转染过表达MT2-MMP质粒（过表达组）或阴性对照质粒（空载体组）的AsPC-1作为对照.实时定量PCR法和蛋白质印迹法检测转染细胞的MT2-MMP mRNA和蛋白的表达.在缺氧条件（37℃、1％O2、5％ CO2、饱和湿度的三气培养箱）下培养后,应用CCK-8法检测转染细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡,Transwells小室检测细胞的侵袭能力.结果 成功获取MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞株和过表达的细胞株.缺氧条件下培养24h后,空载体组、过表达组、siRNA组细胞增殖的吸光度值（A490值）分别为0.68±0.08、0.80 ±0.08、0.52±0.07;细胞凋亡率分别为（6.2±1.5）％、（2.8±1.1）％、（21.4±3.9）％;每个视野（200倍）的穿膜细胞数分别为（115.8 ±23.2）、（256.4±38.6）、（45.8±18.2）个.siRNA组较空载体组的细胞增殖显著被抑制,穿膜细胞数显著减少,而细胞凋亡率显著增加（P值均＜0.05）.过表达组较空载体组的细胞增殖显著增强,穿膜细胞数显著增加,而细胞凋亡率显著降低（P值均＜0.05）.结论 MT2-MMP基因沉默的AsPC-1细胞在缺氧条件下培养后细胞凋亡增加,增殖被抑制,侵袭力减弱.     

全身炎症反应综合征患者外周血单个核细胞Toll样受体2、4基因表达及其意义

目的探讨急腹症全身炎症反应综合征(SIRS)患者外周血单个核细胞(PBMC)内Toll样受体(TLR)2、4基因表达变化及其意义。方法103例急腹症手术患者包括SIRS组65例,非SIRS组38例。采用逆转录聚合酶链反应(RT PCR)法检测TLR2、4mRNA的变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测TNF α和IL 6的表达;分析TLR2、4mRNA与TNF α和IL 6的表达量、住院时间和多器官功能障碍综合征(MODS)发生率之间的关系。结果入院第1天TLR4mRNA、TNF α和IL 6表达均升高至峰值,随后随病程下降,TLR2mRNA自入院起持续高表达至第5天,TLR2、4mRNA的表达与TNF α和IL 6、住院时间呈正相关,且TLR2、4mRNA表达越高,发生MODS的危险性越大。结论急腹症SIRS患者PBMC内TLR2、4基因表达显著增加,提示TLR在急腹症SIRS的发生发展过程中发挥了重要的促进作用。     

Toll-样受体2/4mRNA在急性出血坏死性胰腺炎肺损伤中的表达变化及意义

急性出血坏死性胰腺炎（AHNP）起病急剧、发展迅速、并发症多、死亡率高.主要原因是在发病早期就可以引起多器官功能不全,严重时发展到多器官衰竭.其中以急性肺损伤（ALI）最多见,其具体机制不详.研究提示多种促炎症细胞因子（包括TNF-α、IL-6、iNos等）介导的全身炎症反应综合征（SIRS）可能在其发生中起重要作用.     

内镜下十二指肠乳头气囊扩张术治疗胆管结石的临床研究

目的　探讨应用十二指肠乳头气囊扩张术 (EPBD)后进行胆管结石内镜治疗的有效性和安全性。方法　实施EPBD 42例 ,应用气囊将十二指肠乳头开口扩张至 8mm ,直接用取石网篮取石 ,当结石较大时先行机械碎石网碎石后再取石。术后鼻胆管引流 ,并造影复查。结果　 41例成功完成EPBD ,3 8例单次内镜治疗清除结石 ,3例行两次十二指肠镜下取石治疗 ,其中 1例再次内镜治疗时改为十二指肠乳头括约肌切开术 (EST)后取石。 9例附加机械碎石术。 41例中无出血、穿孔、重症胆管炎或重症胰腺炎发生 ,无术后胆管明显积气 ;10例出现高淀粉酶血症 ,72h内恢复。结论　EPBD后取石具有与EST后取石相近的成功率 ,出血风险低 ,胰腺炎发生率并不高 ,机械碎石比例较EST术后为高。主要适用于直径小于 10mm的肝外胆管结石 ,但对较大结石也可应用。