人源性抗HBsAg单链Fab基因在酵母中的表达

抗乙肝表面抗原的人源性抗体(Fab)在临床上有防治乙型肝炎病毒的应用前景，如用于预防新生儿乙型肝炎病毒的垂直传播和治疗性乙肝制剂等。本文将噬菌体抗体库筛选得到的人源性抗HBsAg Fab抗体基因，通过重叠PCR的方法借Linker将Fab的轻链(L链)和重链(H链)融合构建单一的链，即单链Fab(Single chain Fab)基因，并插入到酵母表达载体pPICZaA中。     

重组牛碱性成纤维细胞生长因子免疫原性的研究

本文用重组牛碱性纤维细胞生长因子作为免疫原注射给小白鼠，收集不同时相的血清，用间接ＥＬＩＳＡ检测其产生抗体水平，以评价其免疫原性。发现给小白鼠注射一定剂量的ｂＦＧＦ可引起抗体的产生，本研究首次对临床使用ｒｂＦＧＦ治疗肌萎缩侧索硬化症的患者，动态观察其血清ｒｂＦＧＦ抗体的消长情况，发现经肌肉注射ｒｂＦＧＦ可明显引起机体产物ａｎｔｉｒｂＦＧＦ，与疗效成反比，与疗程成正比；还首次发现有的ＡＬＳ病例在注射     

鼠抗人C_3McAb的制备及其特性

C_3成分是补体系统活化的枢纽,深入研究C_3是免疫病理学中的重要课题。但因纯化C_3难度较大,不易得到高纯度的抗C_3抗体,给研究工作带来许多不便。制备高度专一性的抗C_3McAb实属必需。我们将纯C_3免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,共获4孔稳定的杂交瘤,经抗C_3ELISA和CH_(50)抑制鉴定,有3个阳性孔,经有限稀释,有7株分泌较多抗体的克隆。来源于C_3孔的5个克隆分泌的Ig属IgG_1,用ELISA法检测     

染矽尘小鼠早期肺组织bFGF与FGFR-1的表达及意义

目的 观察染矽尘小鼠早期肺组织碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)及成纤维细胞生长因子受体-1(fibroblast growth factor receptor-1,FGFR-1)的表达情况,以探讨bFGF在矽肺发病中的意义.方法 采用气管暴露法建立小鼠矽肺...     

凡纳滨对虾次要过敏原肌质钙结合蛋白的质谱鉴定及免疫交叉反应

目的:质谱鉴定凡纳滨对虾相对分子质量(Mr)为21 000的次要过敏原组分肌质钙结合蛋白(SCP),分析它与其他虾、蟹等甲壳类过敏原的免疫交叉反应,以阐明SCP可作为甲壳类食物过敏原检测、检验及脱敏的标准过敏原物质。方法:运用MALDI-TOF/TOF-MS鉴定凡纳滨对虾Mr为21000的过敏原组分,利用软件BLAST、ClustalW分析甲壳类食物中该蛋白的氨基酸序列同源性,同时用纯化的21 000过敏原免疫小鼠制备其特异性多克隆抗体,通过该抗体与其他8种甲壳类食物蛋白粗提液的Western blot法结果分析该过敏原的免疫交叉反应。结果:质谱鉴定结果显示,凡纳滨对虾21 000过敏原为肌质钙结合蛋白;氨基酸序列同源性分析显示其与斑节对虾、中国对虾、克氏原螯虾、细趾小龙虾、褐虾的SCP序列一致性为81%～100%;Western blot结果显示,针对SCP的特异性多克隆抗体与凡纳滨对虾、刀额新对虾、斑节对虾、口虾蛄、罗氏沼虾、克氏原螯虾、远海梭子蟹、锈斑鲟、中华绒螯蟹粗提液在SCP对应的21 000左右处均有反应条带。结论:凡纳滨对虾Mr为21 000的次要过敏原为肌质钙结合蛋白,其氨基酸序列与多种甲壳类具有很高的同源性以及较强的免疫交叉反应。     

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）抗体研究进展

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是由Gospodarowiz等[1]于1974年在牛脑垂体中发现的,因对3T3细胞有强烈的促增殖和有丝分裂作用,且等电点为9.6而得名.此次发现展开了对成纤维细胞生长因子的鉴定,纯化及测序等研究的序幕.     

SARS冠状病毒灭活疫苗研究初报

目的研制出安全、有效、质量可控的SARS冠状病毒灭活疫苗;同时,制备能用于SARS被动免疫和治疗用的异源高效价特异性抗体,用于SARS的免疫防治.方法采用细胞培养法,从非典型肺炎患者标本中分离获得病毒株,通过电镜、血清学以及RT-PCR技术进行病毒鉴定.运用细胞规模化培养技术大量制备SARS冠状病毒.用温度灭活法和甲醛灭活法对SARS冠状病毒进行灭活处理,筛选灭活条件.将不同类型和不同剂量的佐剂与灭活病毒加以配伍,优化SARS灭活疫苗;同时,以小鼠、兔、猴等为实验对象,进行灭活疫苗的免疫原性评价.用灭活疫苗免疫马,获取异源(马)高免血清,并进行应用效果评价.结果从分离得到的SARS冠状病毒中,优选出适合疫苗制作的SARS病毒株2株-F69和Y3,初步建立了大规模培养SARS病毒的技术体系,病毒TCID50达到106以上.确定了SARS病毒的灭活方法,优选出灭活疫苗的佐剂,并已生产出一定量的SARS灭活疫苗.将灭活疫苗初步用于小鼠、兔等的免疫接种,对其体液免疫和细胞免疫效果进行了初步检测.结论试验研制的SARS灭活疫苗具有较强的免疫原性,设计的灭活疫苗生产技术路线是可行的,进一步的研究工作结束后,可望进行规模化开发生产.     

人bFGF单克隆抗体的制备及MabF7对黑色素瘤B16的体外抗瘤效应

目的:制备抗人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单克隆抗体,并探讨其体外对黑色素瘤细胞B16的抗肿瘤效应.方法:以rhbFGF免疫Balb/C小鼠,用杂交瘤技术制备单克隆抗体;间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,测定腹水型单抗的效价及其Ig亚类;用RT-PCR、细胞免疫组化和双抗体夹心等方法检测黑色素瘤B16细胞中bFGF的表达;用MTT法检测单抗MabF7对B16细胞的体外抑瘤效应;用流式细胞术及DNA琼脂糖电泳技术检测细胞凋亡.结果:共获得19株稳定分泌抗bFGF单抗的杂交瘤细胞株;ELISA效价＞105;除 MabF8、MabF9为IgG2a外,其余为IgG1;黑色素瘤细胞B16中有bFGF mRNA及其蛋白的表达,且可在细胞培养液中检测到bFGF;经蛋白A纯化的MabF7对B16细胞的抑制作用呈剂量及时间累计效应,抑制率为(39±4.12)%,P＜0.01.流式细胞术结果显示,随抗体浓度增加及作用时间延长,肿瘤细胞在G1期前出现明显的亚二倍体期;DNA电泳结果显示,抗体作用后的细胞DNA呈明显的梯度条带. 结论:MabF7具有体外抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用,其机制与诱导细胞凋亡有关.     

重组人源抗HBsAg Fab的糖基化分析

目的：分析重组人源抗HBsAg Fab的糖基化。方法：应用PAS糖染色法和经酶切糖苷酶H去糖基后，用MALDI-TOF-MS质谱仪对重组人源抗HBsAg Fab的糖基化进行分析。结果：PAS染色法的结果显示，毕赤酵母（Pichia pastoris）表达的重组人源抗HBsAg Fab呈淡红色。用质谱仪测定P．pastoris表达的经内切糖苷酶H去糖基后的重组人源抗HBsAg Fab的相对分子质量（Mr），从50678．49降低到49245，相差1433．49（约相当于少了8个甘露糖基）。结论：P．pastoris表达的重组人源抗HBsAg Fab，为一种具有生物活性的低糖基化的蛋白，为深入研究其性质及功能奠定了基础。     

组胺在肿瘤免疫中的双向调节作用

Histamine is one of the important mediators of many diseases such as hypersensitivity,gastric ulcer, and inflammation. It regulates the local immune response in tumor tissues by multiple mechanisms with ambivalent and double - faced effects, which have been uncovered partially by thorough molecular immunological analyses. Histamine has differential effects on the growth of tumor cell depending on selective reaction with its receptors, and on the secretion of variety of cytokines from local activated immune cells in a reciprocal manner by shifting TH1/TH2 polarization towards predominance of TH2. In this review, we summarized recent data suggesting that endogenous histamine should be an important correlated factor involved in bidirectional regulation both to tumor tissue and to infiltrating immune cells．