兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

背景：目前对骨髓间充质干细胞常用的分离方法有密度梯度离心法、贴壁筛选分离法。 目的：联合应用密度梯度离心法和贴壁筛选分离法体外分离培养、扩增兔骨髓间充质干细胞，并对其进行鉴定。 设计、时间及地点：对比观察的细胞学实验，于2007-10/2008-03在上海市第六人民医院中心实验室完成。 材料：2月龄新西兰纯种大耳白兔6只用于骨髓间充质干细胞取材与原代培养，1.073 kg/L的Percoll分离液。 方法：实验采用Percol分离液利用密度梯度离心法及结合贴壁分离筛选法来分离、纯化骨髓间充质干细胞, 在采用密度梯度离心法得到骨髓间充质干细胞后，经贴壁培养及反复换液纯化骨髓间充质干细胞。分别取第3，5，7，9代骨髓间充质干细胞，行细胞计数，绘制细胞生长曲线。 主要观察指标：倒置显微镜下观察原代及传代细胞的形态、生长情况。采用CD44及CD34抗体进行间接免疫荧光标记鉴定培养的干细胞。CD44染色呈阳性，CD34染色呈阴性，说明所提取、纯化的细胞是骨髓间充质干细胞。 结果：增殖传代的骨髓间充质干细胞呈长梭形均匀分布生长，形态比原代培养的细胞更均匀，细胞生长旺盛、增殖迅速，胞核明显，核仁清晰，核浆比例大，细胞形态均匀，平行排列呈螺旋状或漩涡状，传代至第5代时无明显变化。随传代次数的增加，细胞增殖能力逐渐下降，第3~5代细胞增殖能力强。所分离培养的细胞均表达CD44,不表达CD34。 结论：在体外采用密度梯度离心及贴壁培养法可获得高纯度的兔骨髓间充质干细胞。     

靶向胰岛素样生长因子受体的RNA干扰技术抑制胶质瘤生长

目的研究靶向胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)的小干扰RNA(siRNA)对胶质瘤生长的抑制作用.方法逆转录-聚合酶链反应和Western blot测定RNA干扰后IGF-1R表达水平;采用Transwell体外侵袭实验进行细胞体外的侵袭力分析;流式细胞仪检测细胞凋亡率;裸鼠成瘤实验测定IGF-1R基因表达下调后胶质瘤C6细胞在体内致瘤能力的改变.结果靶向IGF-1R基因的siRNA可以有效抑制IGF-1R基因的表达,使IGF-1R mRNA表达减少60%,蛋白表达减少50%;流式细胞术检测到细胞凋亡率明显升高(P＜0.01);裸鼠体内成瘤能力降低.结论siRNA介导的IGF-1R基因下调能明显抑制胶质瘤细胞生长.     

硝酸异山梨酯治疗顽固性心力衰竭的临床分析

1 对象和方法 1.1 对象选择 68例皆为住院病人,其中男性41例,女性27例,年龄54～91岁,平均52.6岁.其中冠心病37例,风心病11例,扩张型心肌病13例,肺心病5例,甲亢性心脏病2例（甲亢控制良好）.心功能（纽约心脏病协会标准）三级19例,四级25例,均随机分入A,B两组.而且两组均无下列情况：合并糖尿病,出血倾向,严重肝肾功能不全.     

大鼠虚热证模型的建立与评价

目的:对热性中药致虚热证模型的复制和评价进行探究。方法:使用不同剂量热性中药附子、干姜、肉桂灌胃大鼠。每天观察大鼠的活动状态、毛发光泽、爪色、二便等一般状况,每天定时测定大鼠的肛温、粪便量、尿液量、饮水量、饮食量,并于体液消耗量出现明显差异时采集血液和相关组织器官,测定血清三碘甲状腺原氨酸(T3),甲状腺素(T4),血浆环磷酸腺苷(cAMP)及环磷酸鸟苷(cGMP)含量的变化和相关脏器指数。结果:与空白组比较,各模型组大鼠饮水量、体液消耗量大多数升高,动物出现虚热证的证候;且血清中T4含量呈增高趋势,T3/T4降低。模型低剂量组和模型中剂量组的cAMP和cGMP含量与空白组比较大多数显著升高,而模型高剂量组含量则有所降低。结论:灌胃热性中药可以复制出虚热证模型,体液消耗量的增加对虚热证模型复制有一定的指导意义。     

顶空进样GC-MS分析柴胡不同炮制品的挥发性成分

目的:研究柴胡不同炮制品中的挥发性成分,为揭示"勿令犯火"的炮制规律提供参考。方法:采用顶空进样GC-MS分析。采用HP-5 MS色谱柱。初始温度60℃,保持2 min;以10℃·min-1至250℃,保持10 min。电离方式为电子轰击,电子能量70 e V,离子源温度230℃,四级杆温度150℃,进样量1μL。采用面积归一化法测定挥发性成分的相对含量并对其加以鉴定。结果:生品柴胡挥发性成分占总检出物的89.21%,鳖血拌制柴胡97.37%,鳖血炒制柴胡98.00%,酒制柴胡94.90%,醋制柴胡98.88%。各炮制品均共有戊醛、己醛、庚醛和1-戊醇等成分。其中己醛为生品柴胡、鳖血拌制柴胡及鳖血炒制柴胡中含量最高成分。戊醛、庚醛和2-戊基呋喃在鳖血炒制柴胡中的含量均高于其他炮制品。己酸为醋制柴胡中独有成分。结论:柴胡不同炮制品的挥发性成分差异较大,可能是其发挥药效的重要物质基础。     

超声提取柴胡挥发油工艺及其GC-MS分析

目的:采用响应面法优选超声提取柴胡挥发油的工艺,并研究柴胡挥发油成分。方法:采用Box-Behnken响应面法设计试验,运用3因素3水平,以柴胡挥发油的得率为响应指标,考察液料比、提取温度、超声时间对得率的影响;对超声提取的挥发油进行GC-MS分析,采用峰面积归一化法,确定各成分的相对含量并进行鉴定。结果:最佳工艺为:料液比1∶16、提取温度51℃、超声时间26 min,经验证此条件下的挥发油得率为14.77%,与理论值14.85%相比差别不大,表明此法较为准确;采用GC-MS分析所得到的挥发油成分中,共鉴定出46种化合物,占总挥发油组分的96.84%。其中相对含量较高的成分为1,2-二甲基环戊烷、甲基环己烷、庚烷等,其中甲基环己烷为含量最高成分。结论:响应面法用于超声提取柴胡挥发油工艺的优选准确、可靠;超声法能较好的应用于柴胡挥发油的提取。     

内生菌发酵工艺的研究进展

内生真菌能够产生与宿主细胞相同或相似的生物活性物质,结合发酵技术能够有效的提升活性物质的获得率,这为通过内生菌的发酵培养来获得其药用活性成分提供了新的途径。本文主要综合分析了影响内生真菌发酵工艺中发酵产物生成的各个因素、工艺优化方法以及相关的研究进展,以期能够合理优化发酵工艺,为其大规模的工业化生产的应用提供理论借鉴。     

全面两孩政策下北京市免费短效避孕药具使用分析

目的 分析全面两孩政策下北京市免费短效避孕药具使用状况及其影响因素.方法 选取2018年北京市基本公共卫生(药具)服务需求调查数据库中,使用短效避孕方法且对免费短效避孕药具有需求的15～49岁育龄群众2341人作为研究对象,分析免费短效避孕药具使用一般情况,应用χ2检验和二分类Logistic回归法分析免费短效避孕药具...     

补骨脂乙素对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用和凋亡诱导作用及其机制

目的：观察补骨脂乙素（IBC）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其可能的作用机制。方法：将体外培养的Tca8113细胞分为对照组（0 μmol·L^-1）和不同浓度IBC组（10、20、40及80 μmol·L^-1）。通过MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中Akt、p-Akt、Erk、p-Erk、Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达水平。结果：MTT法检测,随着IBC浓度的增加和作用时间的延长,Tca8113细胞的增殖抑制率逐渐增加,12、24和48h半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（285.13±8.97）、（132.40±7.76）和（58.56±5.93） μmol·L^-1,不同时间点IC₅₀比较差异有统计学意义（P < 0.05）。流式细胞术检测,与对照组（1.69%±0.65%）比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞凋亡率（分别为8.21%±2.32%和22.45%±1.18%）明显升高（P < 0.05）。Western blotting法检测,与对照组比较,作用48h后20和40 μmol·L^-1 IBC组细胞中Bcl-2、p-Akt和p-Erk表达水平明显降低（P < 0.05）,Bax表达水平明显升高（P < 0.05）;Akt和Erk蛋白表达水平无明显变化（P > 0.05）;与对照组比较,作用48h后40 μmol·L^-1 IBC组Tca8113细胞中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。结论：IBC可抑制Tca8113细胞的增殖并诱导细胞凋亡,Akt和Erk通路可能是其诱导肿瘤细胞凋亡的途径。     

不同产地北柴胡药材的UPLC/Q-TOF-MS指纹图谱分析

目的:采用UPLC/Q-TOF-MS建立北柴胡药材的指纹图谱,鉴定其主要色谱峰,并结合主成分分析(PCA)模式识别方法评价不同产地药材的质量。方法:采用ZORBAX Eclipse Plus C_(18)色谱柱(2. 1 mm×100 mm,1. 8μm),以乙腈-0. 1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,使用电喷雾离子源(ESI),负离子模式下采集数据。通过质谱数据处理软件Peak View 1. 2,代谢组学分析软件MarkerView 1. 2. 1对不同产地柴胡药材进行PCA。结果:在35 min内建立了北柴胡药材的UPLC/Q-TOF-MS指纹图谱,并结合PCA区分了不同产地的药材,筛选出8个差异较大的化合物,并鉴定出其中3个化合物的结构,分别为3″-O-乙酰基柴胡皂苷A,3″-O-乙酰基柴胡皂苷D和6″-O-乙酰基柴胡皂苷D。结论:UPLC/Q-TOF-MS可用于不同产地北柴胡指纹图谱的快速鉴别,IBM SPSS Statistics 21. 0和PCA能够较全面地区分不同产地北柴胡药材中化学成分的差异,可用于评价该药材质量的优劣。