KDR启动子驱动双自杀基因靶向杀伤人胃癌细胞的作用

目的:探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901的靶向杀伤作用.方法:应用重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染实验组SCG7901细胞株和对照组HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞杀伤效应及其旁观者效应.结果:携带双自杀基因和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和未转染SCG7901的细胞在细胞生长方面无显著性差异(t=0.224,P=0.823).已转染腺病毒的HepG2细胞和未转染HepG2的细胞在细胞生长方面也无显著性差异(t=0.120,P=0.904).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性,SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性(F=109.43,P=0.000).融合基因的疗效优于单一自杀基因(F=162.22,P=0.000).将感染腺病毒细胞与未感染细胞以不同比例混和培养,观察到该体系明显的旁观者效应.结论:KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并存在旁观者效应.     

利用基因芯片技术筛选早期乳腺癌的差异表达基因

目的 比较相同病理类型和临床分期预后不同的早期(Ⅰ、Ⅱ期)乳腺癌样本的基因表达差异,寻找有显著差异的基因,探索与早期乳腺癌预后有关的基因分型.方法 用Agilent4×44K人全基因组Oligo芯片对47例早期乳腺癌患者的组织样本,结合其预后好、差数据,根据其临床预后的不同分为对照组(预后好)24例和实验组(预后差)23例,进行差异基因表达分析;采用Real-time PCR技术,对两组乳腺癌样本中差异表达的基因进行验证.结果 基因芯片检测分析发现,实验组样本比对照组样本有差异表达基因126个,其中60个基因显著上调,66个基因显著下调(差异均在2倍以上).结论 不同预后的早期乳腺癌样本中,基因表达存在显著差异,早期乳腺癌的预后与这些基因的表达有关.     

腹腔镜改良IPOM法治疗腹股沟疝39例

探讨改良腹腔镜补片植入术(IPOM)的临床效果。采用腹腔镜腹股沟疝修补术加补片植入术治疗腹股沟疝39例,植入补片采用钉合法与锁边缝合法相结合。39例均在腹腔镜下完成,手术时间为31~63 min,平均41±7 min,无血管损伤、无顽固性疼痛、无感染和排异反应。术后随访3~12个月,未见复发。腹腔镜改良型IPOM法操作简便,手术时间短,恢复快,效果良好,适合临床开展。     

左乳囊状水瘤1例

患儿,男,6 周岁.出生时即发现左乳房部位一约5 cm×5 cm的以乳头为中心的圆形包块,质软,边界欠清,无触痛,无乳头溢液,腋窝淋巴结无肿大.肿块随年龄增长而逐渐长大,小儿生长发育无明显异常.就诊时查体见包块约15 cm×15 cm.     

创伤性休克大鼠血浆AM与NO变化的相关性实验研究

目的 探讨创伤性休克时大鼠血浆肾上腺髓质素(AM)和一氧化氮(NO)的变化特点及相关性。方法 将40只SD大鼠分为对照组(10只)、休克未复苏组(10只)、休克复苏组(10只)和氨基胍组(10只)。对照组10只麻醉后插管；30只SD大鼠制作创伤性休克动物模型，双侧股骨干砸伤后并经股动脉放血至MAP35～45mmHg。休克复苏组血压维持30min，然后回输失血和等量的林格氏液。氨基胍组在复苏时静脉注射AG60mg/kg异。观察休克前后血浆AM和NO浓度的动态变化。结果 大鼠创伤性休克后，血浆AM和NO水平均高于对照组，复苏后0．5h达到高峰，氨基胍组两指标变化不明显，AM的变化与NO的变化呈正相关。结论 提示AM与NO在创伤性休克发生发展中起重要的调节作用，且AM可能是通过NO介导而发生作用。     

光动力疗法对人胃癌细胞MGC-803的杀伤性干预

目的:观察5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学疗法对人胃癌细胞MGC-803的干预作用,探讨光动力学疗法治疗胃癌的可能作用途径。方法:实验于2004-03/2004-12在全军神经医学研究所完成。试剂5-氨基乙酰丙酸购自美国Sigma公司;MGC-803人胃腺癌细胞株购于中山大学实验动物中心。①分别使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,给予相同剂量的激光辐照。②使用相同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,给予不同剂量的激光辐照,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2。③使用不同浓度的5-氨基乙酰丙酸培养MGC-803胃癌细胞,浓度分别为0.25,0.5,1.0,2.0,4.0mmol/L,不予激光辐照。④给予不同剂量的激光辐照培养MGC-803胃癌细胞,能量分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100J/cm2,不给予5-氨基乙酰丙酸。以上4个实验均以四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,以不加5-氨基乙酰丙酸、无激光辐照培养的细胞作为空白对照,细胞存活率=处理组细胞吸光度值/对照组细胞吸光度值×100%。⑤培养MGC-803胃癌细胞,随机分为4组,即单纯MGC-803胃癌细胞组、单纯5-氨基乙酰丙酸组、单纯给予激光组及光动力学治疗组,使用吖啶橙-溴化乙锭染色法检测细胞凋亡情况。结果:①5-氨基乙酰丙酸浓度不同、激光辐射剂量相同:随5-氨基乙酰丙酸浓度逐渐递增,MGC-803细胞的存活率逐渐下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=266.39,P<0.01);但在浓度到达2.0mmol/L后,细胞存活率不再随着5-氨基乙酰丙酸的浓度的增加而下降。②激光能量不同、5-氨基乙酰丙酸浓度相同:随着激光剂量的增加MGC-803细胞存活率显著下降,各组细胞存活率之间差异有显著性意义(F=226.31,P<0.01)。③5-氨基乙酰丙酸浓度不同、不给激光辐射:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.79,P=0.54)。④激光辐射剂量不同、不给5-氨基乙酰丙酸:各组细胞存活率之间差异均无显著性意义(F=0.61,P=0.66)。⑤只有光动力学治疗组出现细胞凋亡现象,而其他细胞组基本无凋亡细胞。结论:在较低的浓度范围内,5-氨基乙酰丙酸介导的光动力疗法对人胃癌MGC-803细胞的杀伤作用随着5-氨基乙酰丙酸浓度的增加而增加,在较高浓度时则存在饱和现象,而且杀伤力与光剂量成正比。单纯激光不能产生光动力效应,5-氨基乙酰丙酸本身对细胞无毒性作用。5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗能够有效的治疗胃癌,光动力学疗法诱导肿瘤细胞凋亡是其可能作用途径之一。     

101例手术切除的结直肠癌组织介电特性的探讨

探究采用开端同轴线射频技术测量得到的结直肠癌组织和正常结直肠组织的介电特性是否具有显著差异,探讨能否应用该技术判断结直肠癌的病理类型。101例手术切除的新鲜离体结肠／直肠癌标本来自南方医科大学珠江医院手术室,应用开端同轴线仪器在170～500 MHz频率段分别检测癌组织和正常组织的相对介电常数和电导率。粗略选取170．32、212．90、255．48、298．06、383．22、468．38、500．00 MHz几个频率点的介电特性纳入统计分析。术后对标本行病理切片检查。结直肠癌组织的相对介电常数和电导率均比正常结直肠组织高（P＜0．01）,粘液腺癌组织的电导率在170．32、212．90、255．48、298．06、383．22 MHz时比腺癌组织高（P＜0．05）,结直肠癌高、中、低分化三种不同分化程度的介电特性无统计学意义（P＞0．05）。应用开端同轴线仪器可以快速而准确地辨别结直肠癌组织和正常结直肠组织,同时可以判断结直肠癌的病理类型。     

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK 基因靶向杀伤胃癌细胞的体外实验研究

目的探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的双自杀基因体系对人胃癌细胞SCG7901靶向杀伤作用以及是否存在旁观者效应。方法用MOI=100时,将携带融合基因重组腺病毒Ad-KDR-CDglyTK及Ad-CMV-CDglyTK体外感染SCG7901、ECV304和HepG2细胞,检测细胞的感染效率以及转基因肿瘤细胞在mRNA水平上融合基因的表达;在前药5-氟胞嘧啶(5-FC)和/或更昔洛韦分别按不同浓度、不同作用时间和方式下,观察双自杀基因体系对SCG7901细胞的靶向杀伤作用和旁观者效应。结果携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901、HepG2和ECV304细胞中有GFP表达。感染腺病毒Ad-CMV-CDglyTK的各细胞以及感染腺病毒Ad-KDR-CDglyTK的SCG7901及ECV304细胞对单一前药具有较高的敏感性,细胞的存活率各随单一前药浓度的增加而递减;而感染腺病毒的Ad-KDR-CDglyTK的HepG2细胞对前药不敏感。感染腺病毒Ad-KDR-CDglyTK的SCG7901及ECV304细胞分别在同一浓度前药的作用下,...     

双自杀基因联合Survivin反义寡核苷酸对结肠癌裸鼠的体内抑瘤作用

目的 研究VEGF启动子驱动的双自杀基因(Ad-VEGFP-CDglyTK)联合Survivin反义寡核苷酸对裸小鼠体内结肠癌移植瘤的抑瘤作用.方法 建立裸小鼠人结肠癌模型,将24只成瘤后的裸小鼠随机分为4组(n=6):空白对照组,不施加任何处理;重组腺病毒组,注射重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK与前药氟胞嘧啶(5-DC)、更昔洛韦(GCV);Survivin反义寡核苷酸(SurvivinASODN)组,注射Survivin ASODN;基因联合治疗组,注射重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK与前药5-FC、GCV,同时注射SurvivinASODN.治疗后测定瘤重并计算肿瘤生长抑制率;将瘤组织进行HE染色;免疫组化检测微血管密度(MVD).结果 各组最终瘤重及肿瘤生长抑制率分别为:空白对照组516.58±10.58mg,0%;重组腺病毒组238.74±15.77mg,53.78%±3.12%;Survivin ASODN组225.61±13.47mg,56.23%±2.60%;基因联合治疗组63.70±3.41mg,87.66%±0.70%.空白对照组与其他3组有显著差异(P<0.05),基因联合治疗组与重组腺病毒组、SurvivinASODN组比较亦有显著性差异(P<0.05).常规病理检查可见肿瘤细胞生长受抑制,特别是基因联合治疗组抑瘤作用最明显,肿瘤组织切片中可见片状坏死区,而且这些区域可见大量炎性细胞浸润.空白对照组、重组腺病毒组、Survivin ASODN组和基因联合治疗组MVD分别为19.25±3.19、11.33±2.46、10.42±2.35、3.33±1.56,空白对照组MVD明显高于其他3组(P<0.05),重组腺病毒组及Survivin ASODN组MVD均显著高于基因联合治疗组(P<0.05).结论 VF/3F启动子驱动的双自杀基因和Survivin ASODN均具有一定的体内抑瘤作用,两者联合应用具有协同作用,对于肿瘤的抑制作用更加显著.     

血管内皮生长因子与nm23-H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后之间的关系

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及nm23-H1基因在青年女性乳腺癌组织中的表达及其与预后间的关系。方法应用免疫组化方法检测48例青年女性、30例绝经后乳腺癌组织及10例乳腺纤维腺瘤组织中VEGF及nm23-H1基因的表达情况,分析他们之间及其与临床病理指标之间的关系,并随访患者5年生存率。结果青年组较绝经组患者淋巴转移率高(P<0.01);青年组与绝经组患者组织中,VEGF及nm23-H1的表达差异皆有显著性意义(P<0.01);青年组、绝经组以及乳腺纤维腺瘤组,两者表达差异也有显著性意义(P<0.01,P<0.01);各组中腋窝淋巴结转移者和未转移者VEGF及nm23-H1的表达差异均有显著性意义(P<0.01);各组中VEGF及nm23-H1的表达与组织分化程度无关(P>0.05);青年乳腺癌组织中VEGF与nm23-H1基因表达成负相关(P<0.01),随访发现:青年乳腺癌患者nm23-H1阳性者5年生存率显著高于p53阳性者生存率(P<0.05)。结论VEGF及nm23-H1基因的表达状况标志着青年乳腺癌恶性侵袭程度,因而二者可作为青年乳腺癌患者极有价值的生物学预后指标。