利用Agilent 定制基因芯片筛选相同病理类型、不同预后的早期乳腺癌的分子标记物

目的分析相同病理类型、临床分期（Ⅰ~Ⅱ期）但预后不同的乳腺癌组织的基因表达差异,筛选出有意义的基因组合,寻找
与乳腺癌预后相关的基因,探索可以早期预测乳腺癌预后的基因分型诊断标准。方法用Agilent定制人8×15 000芯片对筛选
出的实验组8例早期乳腺癌患者的组织标本,结合其预后数据,进行差异基因表达分析;采用Real-time PCR技术,在同期收集的
验证组42例乳腺癌样本中对差异表达的基因进行验证。结果基因芯片检测分析发现,实验组预后差样本比预后好样本有差
异表达基因132个,其中44条基因显著上调,88条基因显著下调（差异均在2倍以上）。结论相同病理类型、临床分期、不同预
后的早期乳腺癌组织中基因表达存在显著差异,CD44、MKI67、NTRK2、Nek2、C16orf60、TOP2A、ANCCA、RRM2等8个基因可
以作为早期乳腺癌预后预测基因标记物。
     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统对胰腺癌血管生成的抑制作用

目的研究重组腺病毒介导的KDR启动子驱动的CDglyTK融合双自杀基因系统(AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌血管生成的抑制作用。方法将20只荷人胰腺癌裸鼠随机分为4组,每组5只。Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5氟胞嘧啶(5-FC)、更昔洛韦(GCV);Ⅱ组:仅注射前药5-FC、GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK;Ⅳ组:空白对照,不施加任何处理。采用重组腺病毒AdKDR-CDglyTK瘤体内多点注射,5-FC与GCV腹腔内注射的方法,观察各组治疗效果;微血管密度计数(MVD)分析该系统对胰腺癌血管形成的影响;RT-PCR检测各组的肿瘤组织,以了解有无双自杀基因CDglyTK(目的基因)的表达。结果Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别。MVDⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别为2.08±0.79,10.01±0.77,9.91±0.63,10.39±1.35,组间差异有统计学意义(F=93.29,P=0.00),Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组与Ⅰ组比较,差异有统计学意义(P<0.05),而Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR结果显示,Ⅰ、Ⅲ组的瘤组织内扩增出2.4kB的目的基因片段,而Ⅱ、Ⅳ组瘤组织内未扩增出目的基因片段。结论AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV在体内可明显抑制裸鼠胰腺癌血管形成和肿瘤生长。     

聚酰胺-胺型树枝状高聚合物介导Survivin反义寡核苷酸抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长的作用

背景：采用反义寡核苷酸等治疗方法可以抑制凋亡抑制因子Survivin的表达,从而诱导肿瘤细胞凋亡。目前使用Survivin治疗恶性肿瘤仍存在基因载体转染效率低下、不能长期稳定表达、易被酶降解等难题。目的：观察聚酰胺-胺型树枝状高聚合物（polyamidoamine,PAMAM）脂质体介导Survivin-反义寡核苷酸对人肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法：以人肝癌细胞SMMC-7721裸鼠皮下注射建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型,将PAMAM脂质体和PAMAM分别与Survivin-反义寡核苷酸混合得到载反义基因转染复合物。测定复合物的zeta电位及包封率。将两种载基因复合物注射道裸鼠移植瘤体内,观察两组移植瘤大小,检测移植瘤组织中survivin基因的表达。结果与结论：PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物的zeta电位高于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物（P〈0.05）,基因包封率两组比较差异无显著性意义（P〉0.05）。PAMAM脂质体-survivin-反义寡核苷酸复合物治疗组裸鼠移植瘤质量及survivin蛋白表达低于PAMAM-survivin-反义寡核苷酸复合物组（P〈0.05）。提示PAMAM脂质体能将Survivin-反义寡核苷酸高效递送到人肝癌移植瘤细胞,降低survivin蛋白的表达,诱导移植瘤细胞凋亡。     

重组腺病毒介导的KDR-CDglyTK融合基因系统对胃癌细胞增值的影响

目的 探讨腺病毒介导KDR启动子驱动的融合基因体系对人胃癌细胞SCG7901增值的影响.方法 重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和对照组不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV(ganciclovir)和/或5-FC(5-fluorocytosine),观察该体系对SCG7901细胞生长增值的影响.结果 携带双自杀基因(CDglyTK)和报告基因(GFP)的重组腺病毒载体,感染复数为100时,95%以上的受感染SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达.已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞同未转染的各自细胞在细胞生长方面无显著性差异(P＞0.05).在前药应用下,已转染腺病毒的SCG7901和HepG2细胞表现出对前药不同的敏感性:表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,与前者相比,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感(P＜0.01).融合基因的疗效优于单一自杀基因(P＜0.01).结论 KDR基因启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,抑制其增值.     

VEGFP-CDglyTK系统诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)启动子驱动的CD/TK双自杀基因体系(Ad-VEGFP-CDglyTK)对肝癌细胞HepG2的体外杀伤作用.方法 用重组腺病毒Ad-VEGFP-CDglyTK体外感染表达VEGF的HepG2细胞,荧光显微镜观察其感染效率,然后给予前药更昔洛韦(GCV)和5-氟胞嘧啶(5-FC),在光镜、透射电镜下观察,用流式细胞术等方法 观察细胞凋亡、细胞周期及细胞内DNA含量的变化.结果 腺病毒对HepG2细胞的感染率随病毒滴度的增高而递增.在感染复数为100时,前药GCV和5-FC在一定范围(GCV 5-FC分别为:1mg/L 20mg/L,10mg/L 40mg/L,100mg/L 60mg/L)内呈剂量依赖性地诱导HepG2细胞凋亡;中浓度下(GCV:10mg/L,5-FC:40mg/L)作用细胞72h,透射电镜下可见HepG2细胞发生典型凋亡改变:空泡形成,染色质浓缩、沿核膜排列,甚至出现核碎裂现象.流式细胞仪测定见用药组出现典型的凋亡峰;随着药物浓度的增加,凋亡细胞所占的比例逐渐增加,实验组凋亡细胞数与对照组比较有显著性差异(P＜0.01);细胞周期分析显示前药能明显抑制HepG2/CD-TK细胞的增殖,主要作用在细胞G2-M期.结论 VEGF启动子可调控双自杀基因系统选择性杀伤表达VEGF的HepG2细胞,其机制与诱导细胞凋亡有关.     

AdKDR-CDglyTK融合基因系统治疗胰腺癌的实验研究

目的 观察腺病毒介导的KDR启动子驱动的CD/TK融合双自杀基因系统(以下简称为AdKDR-CDglyTK)对胰腺癌的治疗作用.方法 采用培养细胞移植法,将人胰腺癌细胞系Capan-2接种于裸鼠背部皮下,建立裸鼠人胰腺癌移植瘤模型.将20只裸鼠随机分为4组,每组5只.分组方法:Ⅰ组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC与GCV;Ⅱ组:仅注射前药5-FC与GCV;Ⅲ组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTKⅣ组:空白对照,不施加任何处理.重组腺病毒AdKDR-CDglyTK采用瘤体内多点注射,5-FC与GCV给药方法采用腹腔内注射的方法,观察各组小鼠的生存状况及肿瘤体积、瘤重、肿瘤生长抑制率、常规病理等指标;应用透射电镜观察细胞超微结构,用TUNEL法检测细胞凋亡率,比较观察各治疗组的治疗效果;并对各组的肿瘤组织行RTPCR的检测,以了解有无双自杀基因CDglyTK的表达.结果 第Ⅰ组裸鼠移植瘤的生长显著受到抑制,第Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组肿瘤生长情况无明显差别.第Ⅰ组肿瘤细胞凋亡指数为(34.20±4.60)%,较对照组显著增加(P=0.00).结论 AdKDR-CDglyTK联合前药5-FC及GCV对人胰腺癌Capan-2细胞具明显的抑制作用,并且诱导裸鼠体内人胰腺癌Capan-2细胞的凋亡.其可能的机制是通过下调凋亡抑制基因Bcl-2的表达.     

"蓝碟"手助技术在腹腔镜腹部手术的应用——附78例报告

目的探讨“蓝碟”（Lapdisc）手助器辅助腹腔镜手术（hand—assisted laparoscopic surgery，HALS）用于腹部手术的可行性。方法建立CO2气腹，根据病变部位和手术的要求，放置trocar和“蓝碟”手助器，对78例腹部疾病施行HALS，观察“蓝碟”手助器在腹部HALSA的实施过程，术中效果及术后临床效果。结果经Lapdisc完成70例HALS，术中出血量100—300ml，平均186ml；手术时间60—240min，平均140min；住院时间9—15d，平均10．2d。8例因腹腔镜下操作复杂危险而中转开腹。结论“蓝碟”手助器使用简单、感觉舒适，对切口提供完美保护，术中能维持良好的气腹状态。“蓝碟”简化传统腹腔镜的操作，可应用于绝大多数腹部外科疾病的HALS，安全可行。     

KDR启动子驱动双自杀基因诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对胃癌细胞凋亡的诱导作用。方法以重组腺病毒AdEasy-KDR-CDglyTK体外感染表达KDR的SCG7901细胞株和不表达KDR的HepG2细胞株,并给予不同浓度的前药GCV和（或）5-FC,观察该体系对SCG7901细胞的杀伤效应。分别应用透射电镜、Hoechest33258／PI染色、流式细胞仪观察细胞超微结构、细胞凋亡率和细胞周期的变化。结果携带双自杀基因（CDglyTK）和报告基因（GFP）的重组腺病毒载体转染后,95％以上SCG7901和HepG2细胞中有GFP表达。表达KDR的SCG7901细胞对前药具有较高的敏感性,不表达KDR的HepG2细胞对前药不敏感（P〈0．01）。两种前药联合应用优于任一前药单独应用的疗效（P〈0．01）。流式细胞术检测表明该体系可抑制SCG7901细胞DNA的合成,表现为s期细胞比例增高及G2期细胞减少。同时,Hoechest33258／PI染色和电镜下可见SCG7901有凋亡改变。结论KDR启动子可以调控融合基因体系选择性地杀伤人胃癌SCG7901细胞,并且该体系可以诱导胃癌细胞凋亡。     

NERC-300高频焊接仪在大鼠肝部分切除术中的对比研究

目的 探讨NERC-300高频焊接仪与超声刀在大鼠肝部分切除术中的效果.方法 将48只大鼠分为实验组和对照组各24只.实验组应用NERC-300高频焊接仪行肝部分切除术,对照组采用超声刀,比较两组大鼠存活率、手术时间、出血量、工作温度、热损伤范围及术后第1、3、7天肝功能变化.结果 术后第3天肝功能实验组恢复优于对照组(P＜0.05),术中工作温度实验组低于对照组(P＜0.05),热损伤范围实验组低于对照组(P＜0.05);两组大鼠存活率、手术时间、出血量及术后第1、7天肝功能变化比较均差异无统计学意义(P＞0.05).结论 NERC-300高频焊接仪行大鼠肝部分切除安全且有效.     

创伤性休克大鼠血浆肾上腺髓质素和一氧化氮变化与组织器官保护的相关性

背景:创伤性休克后,有大量炎性因子、一氧化氮合成、释放,在休克向不可逆的转化过程中起着重要作用。目的:探讨创伤性休克时大鼠血浆肾上腺髓质素(AM)和一氧化氮的变化特点及相关性。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验在第一军医大学珠江医院完成。健康SD大鼠40只,雌雄不拘,质量280～300g。由第一军医大学实验动物中心提供。干预:将40只SD大鼠分为对照组(10只)、休克未复苏组(10只)、休克复苏组(10只)和氨基胍(Aminoguanidine,AG)组(10只)。对照组10只麻醉后插管;30只SD大鼠制作创伤性休克动物模型,双侧股骨干砸伤后并经股动脉放血至MAP35～45mmHg。休克复苏组血压维持30min,然后回输失血和等量的林格氏液。氨基胍组在复苏时静脉注射AG60mg/kg。观察休克前后血浆AM和一氧化氮浓度的动态变化。主要观察指标:4组大鼠在创伤性休克时AM和一氧化氮的变化及相关性。结果:大鼠创伤性休克后,未复苏组和复苏0.5h时AM分别为(86.89±2.23)和(43.88±2.74)ng/L达到高峰;一氧化氮浓度分别为(47.88±2.29)和(86.56±2.15)μmol/L,均高于对照组。氨基胍组两指标变化不明显,AM的变化与一氧化氮的变化呈正相关。结论:提示AM与一氧化氮在创伤性休克发生发展中起重要的调节作用,且AM可能是通过一氧化氮介导而发生作用