SARS病毒基因的PCR扩增及序列测定

目的 利用RT—PCR技术检测SARS疑似或临床确诊病人咽拭子、血清及自细胞中的SARS病毒，并分析了扩增产物内一个可能的突变位点。方法 采用Trizol试剂或病毒RNA提取试剂盒，抽提SARS疑似患者咽拭子、血清及外周血白细胞中的RNA，进行RT—PCR和nest PCR反应，检测SARS病毒RNA，并对扩增产物进行DNA测序。结果 14例SARS疑似患者中2例咽拭子RT—PCR结果阳性，约占14％；5例临床确诊病人中2例咽拭子nest PCR结果阳性，约占40％；6例临床确诊SARS病人中1例血清nest PCR结果阳性，占17％，其他5例疑似患者结果阴性；在22份疑似患者外周血白细胞中未检测到SARS病毒；扩增产物DNA序列与美国和加拿大在GenBank中报道的序列一致。结论 RT—PCR方法是一种快速有效的SARS病毒检测手段，为临床诊断及发病机制研究提供了依据；扩增片段内未发现突变。     

碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高 G_Z暴露大鼠脑组织中bcl-2和p53 mRNA表达的影响

目的　探讨细胞凋亡在反复高 GZ暴露所致脑损伤中的病理作用以及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和丹参对反复高 GZ暴露致脑损伤的防护作用及其机制。　方法　 2 0只 SD大鼠随机分成 5组 ,对照组大鼠 G值为 1GZ,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次 14GZ/4 5 s(两次间间隔 30 m in)作用。 b FGF处理组、丹参处理组和生理盐水处理组在 GZ暴露前后分别给予腹腔注射 b FGF(10 0 μg/kg)、丹参 (15 g/kg)或生理盐水 (2 m l)各一次。于暴露后 6 h处死大鼠取脑 ,用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测大鼠脑组织中 bcl- 2和 p5 3m RNA表达以及用原位末端脱氧核苷酸转移酶 (Td T)标记法 (TUNEL )检测脑内神经元细胞凋亡情况。　结果　 GZ暴露组可见明显的 bcl- 2、p5 3m RNA表达变化和部分神经细胞凋亡 ,而 b FGF和丹参能阻断 bcl- 2和 p5 3表达变化和抑制神经细胞的凋亡。　结论　 GZ重复暴露可引起大鼠脑神经细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl- 2和 p5 3的表达变化 ,细胞凋亡是反复高 GZ暴露致脑损伤的机制之一 ,而 b FGF和丹参对 GZ暴露所致的脑损伤具有防护作用。     

丹参和碱性成纤维细胞生长因子对正加速度重复暴露大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

背景：正加速度引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一，但其病理机制尚不清楚，防护措施有待进一步探讨。 目的：观察诱导型一氧化氮合酶在正加速度重复暴露大鼠脑组织中的表达变化，分析碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高正加速度暴露致脑损伤的防护作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：解放军空军总医院分子生物学研究中心。 材料：实验于2000-04／08在解放军空军总医院分子生物学研究中心完成。选用健康清洁级SD大鼠20只，按随机数字表法分为5组．即对照组、正加速度暴露组、碱性成纤维细胞生长因子组、丹参组和生理盐水组，每组4只。 方法：将所有大鼠固定于动物离心机的转臂上，头朝向离心机轴心。除对照组外，其余各组大鼠正加速度暴露G值为＋14Gz，增长率1．5G／s，峰值持续时间45s，共作用3次，两次中间间歇30min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤，所承受的G值为＋1Gz。碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组大鼠分别于离心前30min和离心后即刻腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子（100μg／kg）或丹参注射液（15g/kg），生理盐水组则给予等量生理盐水。于暴露后6h麻醉断头取脑，保存于液氮内用于RNA的提取。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平，以相对表达量即诱导型一氧化氮合酶／甘油醛-3-磷酸脱氢酶的比率来计算。 主要观察指标：各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平。 结果：各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平比较：①正加速度重复暴露组显著高于对照组[0．452&;#177;0．014，0．065&;#177;0．008（P〈0．01）]。②碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组显著低于正加速度暴露组[0.196&;#177;0．010，0．183&;#177;0．011，0．452&;#177;0．014（P〈0．01）]。 结论：正加速度重复暴露可引起大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶mRNA表达增加，它可能在反复高正加速度暴露致脑损伤中起重要作用，而碱性成纤维细胞生长因子和丹参对正加速度暴露所致的脑损伤具有防护作用。     

飞行员代谢综合征与脂蛋白脂酶基因Hind Ⅲ及Pvu Ⅱ位点多态性

目的 研究脂蛋白脂酶(LPL)基因内含子8 HindⅢ位点和内含子6 PvuⅡ位点多态性与飞行员代谢综合征(MS)及其胰岛素抵抗(IR)的相关性,为飞行员MS的预防提供参考依据.方法 采用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测48名飞行员MS患者和50名正常健康飞行员LPL基因内含子8 Hind...     

脂蛋白脂酶基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症的关系

目的探讨脂蛋白脂酶(LPL)基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症的关联性。方法采用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性方法检测87例飞行员高脂血症患者和79例血脂正常飞行员LPL基因第6内含子PvuⅡ位点多态性,并与血脂水平的关联进行对照研究。结果飞行员高脂血症组和血脂正常组的三种基因型P+P+、P+P-和P-P-及等位基因P+和P-构成比差异有显著性(P<0.01),高脂血症组P+P+基因型和P+等位基因明显高于正常血脂组。高脂血症组P+P+基因型者血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显高于P+P-和P-P-基因型,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平则降低(P<0.0 1)。结论LPL基因第6内含子PvuⅡ位点多态性与飞行员高脂血症相关。     

大鼠重复+Gz暴露脑基因表达谱

GZ引起急性脑功能障碍是航空医学研究的重要课题之一 ,近年来的基础研究已发现一些重要的基因如 fos、jun、热休克蛋白 - 70和一氧化氮合酶等在反复高 G值暴露引起脑损伤中起作用 [1 - 3 ] 。但其病理机制还远未明了。是否还存在其它一些相关的、新的基因 ,如何在大范围内同时观察这些基因的表达变化 ?笔者采用高密度互补 DNA(com ple-mentary DNA,c DNA)微阵列技术 ,同时检测 GZ重复暴露大鼠和对照组大鼠脑组织 2 0 48个基因或基因表达序列标签 (expression sequence tags,ESTs)的表达差异 ,旨在寻找 GZ重复暴露后大鼠脑组织…     

人膀胱癌细胞角蛋白20 mRNA表达的研究

目的　评估细胞角蛋白 2 0mRNA(CK2 0mRNA)是否可以作为膀胱癌临床诊断的一种有用标志物。方法　对 84例肉眼血尿患者的尿液进行尿脱落细胞学及CK2 0mRNA标记物RT/PCR检测。分析参数包括肿瘤数目、大小及WHO分级 ,术前或活检前尿脱落细胞学和CK2 0mRNA标志物。结果　病理活检证实 2 2例移行细胞癌中 ,CK2 0mRNA 18例为阳性 ,4例阴性 ;6 2例非膀胱癌患者中 ,CK2 0mRNA标志物 2例假阳性。与尿脱落细胞学比较 ,CK2 0mRNA标志物对膀胱移行细胞癌诊断的特异性和阳性预报值更高 ,分别为 96 .8%比 77.4 % (U =3.2 1,P <0 .0 1) ,90 %比 5 1.7% (U =2 .81,P <0 .0 1) ;但两者在敏感性和阴性预报值间无显著性差异 (U值分别为 :1.0 4和 1.2 1,P >0 .0 5 )。CK2 0mRNA表达与肿瘤分级间无明显相关性。结论　通过RT/PCR方法检测CK2 0mRNA是诊断膀胱移行细胞癌的一种良好生物标志物 ,其特异性明显优于尿脱落细胞学。     

丹参和碱性成纤维细胞生长因子对正加速度重复暴露大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

背景:正加速度引起急性脑功能障碍及其防护是航空医学研究的重要课题之一,但其病理机制尚不清楚,防护措施有待进一步探讨。目的:观察诱导型一氧化氮合酶在正加速度重复暴露大鼠脑组织中的表达变化,分析碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高正加速度暴露致脑损伤的防护作用。设计:随机对照动物实验。单位:解放军空军总医院分子生物学研究中心。材料:实验于2000-04/08在解放军空军总医院分子生物学研究中心完成。选用健康清洁级SD大鼠20只,按随机数字表法分为5组,即对照组、正加速度暴露组、碱性成纤维细胞生长因子组、丹参组和生理盐水组,每组4只。方法:将所有大鼠固定于动物离心机的转臂上,头朝向离心机轴心。除对照组外,其余各组大鼠正加速度暴露G值为 14Gz,增长率1.5G/s,峰值持续时间45s,共作用3次,两次中间间歇30min。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤,所承受的G值为 1Gz。碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组大鼠分别于离心前30min和离心后即刻腹腔注射碱性成纤维细胞生长因子(100μg/kg)或丹参注射液(15g/kg),生理盐水组则给予等量生理盐水。于暴露后6h麻醉断头取脑,保存于液氮内用于RNA的提取。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平,以相对表达量即诱导型一氧化氮合酶/甘油醛-3-磷酸脱氢酶的比率来计算。主要观察指标:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平。结果:各组大鼠脑组织中诱导型一氧化氮合酶mRNA的表达水平比较:①正加速度重复暴露组显著高于对照组[0.452±0.014,0.065±0.008(P<0.01)]。②碱性成纤维细胞生长因子组和丹参组显著低于正加速度暴露组[0.196±0.010,0.183±0.011,0.452±0.014(P<0.01)]。结论:正加速度重复暴露可引起大鼠脑内诱导型一氧化氮合酶mRNA表达增加,它可能在反复高正加速度暴露致脑损伤中起重要作用,而碱性成纤维细胞生长因子和丹参对正加速度暴露所致的脑损伤具有防护作用。     

自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风

目的 探讨自体黑素细胞体外培养扩增和移植治疗白癜风的疗效.方法 用负压吸疱法在白癜风患者正常皮肤区吸疱取皮,用胰蛋白酶消化皮肤制成细胞悬液,在M2黑素细胞选择性培养基中培养,每周传代1次,经4～5次传代,以免疫荧光和多巴胺染色检测培养细胞的纯度和生物学特性.观察培养的自体黑素细胞移植到白癜风患者皮损区后色素生成效果.结果 黑素细胞能在培养基中选择性生长,经4～5周培养,获得纯的黑素细胞,无成纤维细胞和角质形成细胞污染.16例患者28个皮损区接受了移植治疗,病变皮肤面积从2cm²到200 cm²,1个月后移植区出现部分色素,呈淡红色.所有皮损区在移植后3～5个月均有色素再生,色素水平较周围正常皮肤略深或稍浅,6～8个月时色素恢复稳定,颜色与临近正常皮肤接近.87.5%皮损区色素再生面积超过50%.未见瘢痕和其他不良反应.结论 自体黑素细胞体外培养移植治疗白癜风具有效果好、安全、取较小表皮可以治疗较大面积皮损区的优点.