miR - 23b 通过调控 ASK1 抑制糖尿病肾病纤维化

目的：探讨miR-23b通过与靶基因ASK1作用对糖尿病肾病纤维化的影响。方法：通过建立动物模型（I型糖尿病小鼠）和细胞模型（HK-2细胞）,应用实时定量荧光PCR、免疫荧光、基因转染结合RT—PCR,检测ASK1、FN、miR-23b在糖尿病组（Dia组）和正常组（Con组）（P〈0．001）表达变化及在mRNA和蛋白水平上的作用关系。结果：miR-23b在Dia组的表达低于Con组;ASK1、FN在Dia组高表达,并且ASK1在Dia组中持续高表达;过表达miR-23b可以同时在mRNA和蛋白水平上抑制ASK1,P38的表达,FN表达也显著降低。结论：miR-23b可能通过作用靶基因ASKl及其信号通路抑制糖尿病肾病纤维化。     

达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究

目的：探讨达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究。方法：正常C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组（Control）、糖尿病心肌病组（DCM）和达格列净组（DAPA）。应用链脲佐菌素（STZ）诱导并给予维持饲料联合构建糖尿病模型。DAPA组给予10 mg·kg-1·d-1的达格列净灌胃，Control组与DCM组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。干预8周后，应用超声机来检测各组心功能；乳酸脱氢酶（LDH）检测心肌损伤；HE染色观察心脏形态；Masson、天狼星红染色观察心脏纤维化程度；TUNEL检测心肌凋亡；免疫组化检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin胶原表达情况；qPCR法检测Caspase-1、GSDMD、α-SMA、Fibronectin的mRNA基因表达含量；Western blot法检测心肌焦亡及纤维化相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin、IL-18蛋白表达水平。结果：与Contr...     

东北地区亚甲基四氢叶酸还原酶基因C677T单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的相关性研究

目的::研究亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因单核苷酸多态性与乳腺癌易感性的关系.方法:采用以人群为基础的病例对照研究方法,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法检测MTHFR基因型在东北地区乳腺癌患者和正常人群中的分布.结果:MTHFR基因677位点在乳腺癌组和对照组中等位基因频率及基因型分布有显著差异性(P<0.05).进一步分析表明,纯合突变G/G基因型、杂合突变C/G基因型与野生C/C基因型相比,患乳腺癌的危险度分别提高了2.23倍和2.00倍.结论:MTHFR基因C677T突变基因型与乳腺癌的易感性有关.     

西洋参皂苷对H_2O_2致PC12细胞损伤的保护作用

目的研究西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤的保护作用。方法建立H2O2诱导PC12细胞损伤模型,化学比色法测定细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶活性,并在显微镜下观察其形态学特征。结果200μmoL/L H2O2诱导PC12细胞,10 h呈明显损伤作用,250μg/mL西洋参皂苷对H2O2致PC12损伤的细胞有增殖作用。结论西洋参皂苷对H2O2致PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧能力有关。     

妊娠期染毒 PFOS 对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响

目的：研究妊娠期染毒全氟辛烷磺酸盐（perfluorooctane sulfonate,PFOS）对子代成年雄性大鼠生殖系统的影响。方法：对妊娠第12天的SD大鼠采用灌胃方式染毒不同剂量PFOS（5、10mg／kg）。每天1次,连续8d。出生后第65（PDN56）天,检测子代成年雄性大鼠体质量及睾丸重量。采用实时荧光聚合酶链式反应检测睾丸间质细胞（adult Leydig cell,ALC）类固醇激素合成急性调节蛋白（steroidogenic acute regulatory protein,StAR）mRNA的相对表达量。结果：与对照组相比,5mg／kg剂量染毒组子体质量显著性降低（P〈0．001）,睾丸系数下降（P〈0．05）;睾丸组织中StAR mRNA的相对表达量下调（P〈0．05）。结论：妊娠期染毒PFOS可通过抑制ALC合成睾酮途径中StAR mRNA的表达水平,对子代成年雄性大鼠的生殖系统产生毒性作用。     

MicroRNA-25通过调控MAP2K4抑制糖尿病肾病纤维化的研究

目的检测microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及不同条件培养下的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达,探讨其对糖尿病肾病纤维化的调节作用。方法实时荧光定量聚合酶链反应检测microRNA-25的表达。生物信息学预测、细胞瞬时转染和Western blot验证microRNA-25的下游靶蛋白。结果 microRNA-25在糖尿病肾病动物模型及高糖培养下的HK-2中表达降低(P<0.01)。MAP2K4可能是microRNA-25的下游靶蛋白。过表达microRNA-25可以从蛋白水平上抑制MAP2K4、α-SMA的表达(P<0.01)。结论 microRNA-25可以通过调控MAP2K4从而抑制糖尿病肾病纤维化的进展。     

熊果酸对胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用

目的：本文通过不同浓度的熊果酸（ursolic acid,UA）作用于人胃癌SGC-7901细胞,探讨UA对其生长的影响。方法：采用体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,MIT法观察不同浓度UA对细胞生长的影响;用10μmoL／L,20μmoL／L,40μmoL／L和80μmoL／L不同浓度UA处理SGC-7901细胞12h后,倒置显微镜观察细胞形态变化以及MTT检测细胞的生长情况。结果：在细胞抑制实验中20～40μmoL／L UA可使SGC-7901细胞发生皱缩,40—80μmoL／LuA作用12h后,SGC-7901细胞形态明显变圆,出现不同程度的漂浮;同时MTT实验结果表明,不同浓度的UA能抑制SGC-7901细胞的生长并呈浓度依赖性。结论：UA能够抑制SGC-7901细胞的生长,具有较强的抗肿瘤活性。     

重组人转化生长因子β1原核表达及多克隆抗体制备

目的克隆人转化生长因子β1(TGF-β1)基因,原核表达TGF-β1蛋白,制备兔抗人TGF-β1多克隆抗体。方法应用RT-PCR技术扩增人TGF-β1基因序列,构建pET-28a-TGF-β1重组质粒。转化至E.coli BL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Western-blot检测目的蛋白的抗原性。免疫新西兰白兔,获得兔抗人TGF-β1多克隆抗血清。饱和硫酸铵盐析法纯化多克隆抗体,间接ELISA法检测多克隆抗体效价,Western-blot技术进行抗体特异性检测。结果获得了TGF-β1编码序列和表达载体,目的蛋白主要存在于超声破碎后的包涵体中;经Western-blot检测目的蛋白存在抗原性;获得纯化的兔抗人多克隆抗体效价达1∶10 000。结论获得的兔抗人TGF-β1多克隆抗体效价较高,具有良好的特异性。     

糖尿病心肌病与miR-1/miR-206和胰岛素样生长因子表达的关系

目的探讨糖尿病心肌病与miR-1/miR-206和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达量之间的关系。方法C57BL/6小鼠经腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病心肌肥大模型,两个月后,取心脏组织,采用Real-Time PCR检测糖尿病心肌病相关基因心房钠尿肽(ANP),B型尿钠肽(BNP),转录共激活因子(P300)和IGF-1以及miR-1/miR-206表达。结果在糖尿病心肌病小鼠模型中,糖尿病心肌病相关基因ANP、BNP、P300、IGF-1基因表达水平显著升高(P<0.01)。同时miR-1/miR-206表达水平显著降低(P<0.01)。结论糖尿病心肌病小鼠miR-1/miR-206以及IGF-1的表达有显著变化,表明在糖尿病心肌病发病过程中可能是由miR-1/miR-206通过调控IGF-1的表达起作用。     

组织贴壁法原代培养人皮肤瘢痕成纤维细胞

目的：探索和建立可靠的人皮肤瘢痕成纤维细胞培养方法,为皮肤瘢痕体外研究提供平台。方法：采用组织块贴壁法进行瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,CO2浓度为5%,饱和湿度下培养。结果：皮肤瘢痕原代成纤维细胞培养成功,18d～20d可传第一代,以后每7d～10d可传一代,细胞形态为长梭形。结论：培养出的人皮肤瘢痕成纤维细胞可用作体外实验研究。