鼠源T细胞受体单克隆抗体对Ⅱ型胶原诱导DBA/1小鼠关节炎的治疗作用

目的观察鼠源T细胞受体(mTCR)单抗对类风湿性关节炎的治疗作用。方法将DBA/1小鼠随机分为正常对照、模型对照、地塞米松0.5 mg·kg-1和mTCR单抗25 mg·kg-1治疗组,每组6只。除正常对照组外,其余各组小鼠分别在第1天和第22天皮内注射牛Ⅱ型胶原与完全弗氏佐剂的乳化剂,制备Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)小鼠模型。地塞米松治疗组于第29～41天皮下注射地塞米松磷酸钠注射液,隔日一次;mT-CR单抗组分别在第0天和第21天皮下注射mTCR单抗各1次;正常和模型对照组皮下注射等体积生理盐水。动态观察小鼠体质量、足掌厚度和关节炎指数的变化,并计算CIA的发生率。给药后第60天实验结束,处死小鼠,HE染色观察踝关节组织病理变化,多功能流式液相芯片分析仪测定小鼠血清γ干扰素(IFN-γ),肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果在第42天,模型组小鼠CIA发生率为6/6,地塞米松和mTCR单抗治疗组分别为2/6和1/6;第49天,模型组和地塞米松治疗组CIA的发生率仍分别为6/6和2/6,mTCR单抗治疗组升高为5/6。在整个发病过程中,地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠的足掌厚度和关节炎指数较模型组降低(P<0.05,P<0.01),其中第38天时,正常对照组、模型组、地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠足掌厚度分别为2.34±0.06,2.96±0.49,2.61±0.44和(2.29±0.13)mm;关节炎指数分别为0.0±0.0,4.0±2.6,0.7±1.0和0.3±0.8。实验结束时,地塞米松和mTCR单抗治疗组血清IL-4含量分别为94±12和(105±38)ng·L-1,与模型组(67±8)ng·L-1比较明显升高(P<0.05);TNF-α含量分别为4.8±0.7和(3.8±0.8)ng·L-1,与模型组(6.7±1.5)ng·L-1比较明显降低(P<0.05);各组IFN-γ含量无明显变化。组织病理观察结果显示,与模型组相比,地塞米松和mTCR单抗治疗组小鼠踝关节炎症细胞浸润明显减轻,骨破坏减弱。结论 mTCR单抗对类风湿性关节炎可能具有治疗作用。     

辐射防护剂的研究进展

近年来,随着人类对宇宙空间的不断探索及核事故事件的增加,世界再一次掀起了辐射防护剂的研究热潮。辐射防护剂是一类能够防治射线对人体辐射损伤的化合物。目前,辐射防护剂的发展比较缓慢,世界上最有效的抗辐射药仍然是氨磷汀 (WR-2721),但是其存在一些严重的副作用且给药途径有限,因此,寻找更加高效低毒的辐射防护药物、更易使人接受的给药途径及给药频率变得越来越重要。本文综述了辐射防护剂的研究现状并对其研究动向进行展望。     

非诺贝特和吡格列酮对心肌细胞肿瘤坏死因子-α表达的影响及机制初探

 目的 观察过氧化体增殖物激活型受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)激活剂——非诺贝特和吡格列酮对新生大鼠心肌细胞肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达水平的影响,探讨可能涉及的机制。方法 体外原代培养新生Wistar大鼠心肌细胞,分别给予不同浓度的非诺贝特(PPARα激活剂)或吡格列酮(PPARγ激活剂)刺激,并辅加脂多糖诱导TNF-α表达。采用半定量RT-PCR法检测TNF-αmNNA的表达,ELISA法检测TNF-α的蛋白水平。心肌细胞瞬时转染TNF-α启动子控制的报告基因载体,测定CAT相对活性以反映TNF-α基因的转录活性。结果 与对照组相比,非诺贝特组和吡格列酮组的TNF-αmRNA及蛋白表达水平均明显降低,且呈剂量依赖性。心肌细胞瞬时转染全长TNF-α启动子控制的报告基因质粒(-721/+17),非诺贝特或吡格列酮可降低脂多糖诱导的CAT相对活性,而转染核因子κB(NF-κB)结合位点缺失的TNF-α启动子控制的报告基因质粒(-182/+17),非诺贝特、吡格列酮或脂多糖刺激均未能改变心肌细胞的CAT相对活性。结论 非诺贝特和吡格列酮可显著抑制新生大鼠心肌细胞中脂多糖诱导的TNF-α表达,具有抗炎作用,其机制可能部分通过抑制NF-κ信息通路发挥作用。     

曲酸的抗氧化作用与辐射损伤防护效应的关系

目的 探究曲酸的抗氧化作用与辐射防护效应的关系。方法 将C57小鼠按随机数字表法随机分为健康对照组、模型照射组、曲酸低浓度组及高浓度组。健康对照组不做任何处理,其他组在照前27 h分别皮下单次给予无菌蒸馏水、75及300 mg/kg的曲酸,经4 Gy ⁶⁰Co γ射线单次全身照射,并于照后第3、4、7天处死小鼠,分别测定小鼠血清及肝肾组织中的总超氧化物歧化酶（T-SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、股骨骨髓细胞DNA含量及骨髓细胞微核率,并体外测定曲酸对DPPH·自由基的清除作用。结果 曲酸300 mg/kg给药组小鼠血清及肝肾组织中总SOD活力、骨髓细胞DNA含量明显高于模型照射组（F=22.63、7.29、67.58、57.32,P<0.05）,而其血清及肝肾组织中MDA含量、骨髓细胞微核率明显低于模型照射组（F=26.22、27.06、4.51、14.28,P<0.05）,体外检测显示曲酸对DPPH·自由基具有明显的清除作用,曲酸、丁基羟基甲苯（BHT）清除DPPH·自由基的IC₅₀值分别为（4.55±0.26）和（1.83±0.10）mg/ml,其浓度同为20 mg/ml时DPPH·自由基清除率分别为（82.38±3.51）%和（96.41±0.45）%。结论 曲酸可清除体内自由基,保护小鼠遗传物质免受射线损伤,从而实现其抗辐射作用。     

人oGPCRs与Gi1α的基因融合及其在昆虫细胞Sf9的表达

目的获得人孤儿G蛋白偶联受体（oGPCR）与G蛋白α亚基（Gi1α）的融合基因及其表达蛋白。方法采用RT-PCR法,从人HepG2细胞扩增oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174和Gi1α的完整表达序列,运用重叠延伸PCR法扩增得到人oGPCR成员GPR45,GPR85,GPR174分别与Gi1α的融合基因,将各融合基因与供体质粒pFASTBac1重组,而后分别转化DH10Bac菌株获得杆状病毒穿梭杆粒,制备重组杆状病毒并感染Sf9细胞,收获融合蛋白,经Western印迹鉴定。结果得到了上述oGPCR成员的融合基因oGPCRs-Gi1α,并使之在昆虫细胞成功表达,制备了足量的oGPCRs-Gi1α融合蛋白。结论oGPCR可与Gi1α成功融合,昆虫细胞表达体系是制备融合蛋白的理想手段,为今后深入开展oGPCRs的相关研究提供了保障。     

BLT2拮抗剂的体外抗肿瘤效应

目的：探讨白三烯B4受体BLT2拮抗剂LY255283对培养肿瘤细胞增殖的抑制作用。方法：RT-PCR法检测9种人源肿瘤细胞（SMMC7721、A549、Bel7402、BGC823、Eca109、HeLa、HL60、MCF7和Pc3细胞）中BLT2的表达情况;MTT法分析LY255283对上述体外培养肿瘤细胞的增殖抑制作用;流式细胞术及荧光显微镜分析LY255283对MCF7细胞凋亡的影响。结果：9种肿瘤细胞均检测到BLT2 mRNA的表达;LY255283明显抑制上述不同肿瘤细胞的增殖,其IC_（50）值分别为0.21、11.17、1.28、5.9、7.9、1.59、0.14、1.25和31.28μmol/L;在1.0和10.0μmol/L两个作用浓度,LY255283诱导MCF7细胞凋亡的发生率分别为20.47%和37.47%,均明显高于空白对照组（8.66%）和DMSO溶剂对照组（11.71%）（P均〈0.01）。结论：BLT2在9种人源肿瘤细胞均有表达,其特异拮抗剂LY255283具有抑制肿瘤细胞增殖效应,诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤的机制之一。     

GPCR-Gα融合蛋白及其在oGPCRs配基筛选中的应用

GPCRGα融合蛋白是近几年用于受体研究的新颖手段之一,它的表达确保了受体与G蛋白之间1∶1的化学计量关系、空间位置上的邻近性及适宜于高通量的配基筛选,使其为孤儿G蛋白偶联受体提供了一种新的研究策略,将在孤儿受体的配基筛选中发挥重要作用,对研发以oGPCR为作用靶点的新药产生积极意义。     

四物汤对血虚证小鼠骨髓细胞CD 34抗原表达的影响

目的：探讨四物汤对^60Coγ射线或环磷酰胺诱导的血虚证小鼠骨髓细胞CD34抗原分子表达的影响。方法：用^60Coγ射线全身照射小鼠升腹腔注射环磷酰胺造成小鼠血虚证模型，实验分正常组、模型组、小剂量组、中剂量组、大剂量组，荧光标记小鼠骨髓细胞并用流式细胞仪 测定CD34＋细胞在骨髓有核细胞中的比例，同时做小鼠骨髓细胞 落培养。结果与结论：四物汤可促进血虚小鼠骨髓中干祖细胞增生，增加CD34抗原分子的表达，为四物汤治疗血虚证提供了依据。     

CHO-hm_1R工程细胞株的建立及乙酰胆碱对其细胞内钙离子浓度的影响

目的　获得表达人毒蕈碱样乙酰胆碱Ⅰ型受体(hm1 R)的工程细胞株 (CHO hm1 R)并鉴定表达受体是否具有相应的功能活性。方法　以健康人基因组DNA为模板 ,PCR扩增hm1 R之cDNA ,并构建pcDNA3 .1 (+) hm1 R表达载体 ,转染CHO K1 细胞获得CHO hm1 R工程细胞株 ,将不同浓度的乙酰胆碱作用于细胞 ,以Fura 2为荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化 ;同时 ,观察阿托品预处理对乙酰胆碱作用的影响。结果　成功得到CHO hm1 R工程细胞株 ;乙酰胆碱 1 0 ,1 0 0 μmol·L-1 均可增高细胞内钙离子浓度 ,此反应可被阿托品 50 0 μmol·L-1 完全阻断。结论　CHO hm1 R工程细胞株可以用于hm1 R配基的检测 ,为建立相关孤儿G蛋白偶联受体的研究体系提供借鉴