广西壮族自治区133例艾滋病患者抗病毒治疗效果评价

目的了解广西壮族自治区部分艾滋病感染者抗病毒治疗后免疫功能恢复与病毒抑制效果。方法2004年7月至2005年10月在广西南宁与柳州地区招募接受抗病毒治疗时间＞3个月的艾滋病患者133例,并在同一地区选择感染时间接近、尚未接受抗病毒治疗感染者58例作为对照。通过专业问卷,了解抗病毒治疗患者服药依从性;采集患者的EDTA抗凝静脉血,通过CD4~+ T淋巴细胞计数与病毒载量测定,了解免疫重建与病毒抑制情况;通过基因型耐药性检测分析抗病毒治疗人群与未治疗人群中HIV-1耐药性毒株的发生情况。结果在接受抗病毒治疗人群中,约有70．69%患者的CD4~+ T淋巴细胞明显回升,23．28%患者CD4~+ T细胞未有明显变化,6．03%的患者CD4 T细胞计数明显下降;比较治疗与未治疗人群病毒载量水平,接受治疗人群载量对数均值(1．834±0．853)显著低于未治疗人群(3．621±1．121)(P＜0．05),治疗人群中67．91%的患者病毒载量水平低于检测限;治疗人群中耐药性发生率(11．90%)与未治疗组(11．63%)无明显差异。结论广西地区实施的抗病毒治疗对免疫系统重建、体内病毒的抑制具有明显作用;耐药性流行情况在治疗与未治疗人群中无明显差异。     

应用细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒药物

目的探讨采用已建立的细胞模型初筛抗人免疫缺陷病毒(HIV)药物的可靠性。方法以齐多夫定为阳性对照,使用HIV-1急性感染系统(MT-4/HIV-1ⅢB)、HIV-1耐药性毒株系统(MT-4/3TC耐药株)、HIV-1慢性感染系统(H9/HIV-1ⅢB)和HIV-1临床分离株感染系统(PBMC/HIV-1GX02),分别测定药物的细胞毒性和抗HIV-1活性,计算药物的半数细胞毒性浓度(TC50)、半抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI)。同时对4种药物DPC961、牛膝多糖、艾乃吉1号和痰热清注射液进行了抗HIV活性检测。结果测定了齐多夫定在4种细胞-病毒系统的TC50,IC50和TI与文献报道相近。DPC961在4种细胞/病毒培养系统的TI分别为979,5348,3912和2745;牛膝多糖分别为323,223,2777和173;艾乃吉1号仅在MT-4/HIV-1ⅢB模型上T1为2.6。结论使用本细胞模型通过检测药物的TC50,IC50及TI进行药物初筛是可靠的。药物DPC961、牛膝多糖和艾乃吉Ⅰ号具有不同程度的体外抗HIV-1活性,痰热清注射液未检测到抗HIV-1活性。     

中国中部农村艾滋病病毒感染状况不一致夫妻的随访研究

目的 在河南省某地农村建立艾滋病病毒（HIV）感染状况不一致（DC）的夫妻队列并进行随访,观察HIV通过异性性传播的频率及其影响因素。方法 通过访谈和血清学检测,确定了52对（一方HIV阳性而另一方阴性但无吸毒、性乱、输血等HIV感染危险行为）夫妻进入研究队列,在0．5、1和2．5年进行3次随访,每次随访均询问夫妻双方的性生活和安全套使用情况,同时抽取20ml抗凝静脉血检测HIV抗体、CD4’T淋巴细胞计数以及病毒载量。结果 （1）0．5、1和2．5年的随访率分别是92．3％、75．0％和28．8％。在随访的过程中,DC夫妻中HIV阴性一方HIV抗体始终保持阴性。未出现HIV抗体阳转及HIV的传播。（2）在队列建立时（0年）以及0．5、1和2．5年随访时,DC夫妻性生活次数每月1次至每周1次的分别占65．4％、72．9％、71．7％和80．0％,有时使用或从来不用安全套的比例分别是76．9％、66．6％、69．1％和60．0％,不同随访时间性生活次数和安全套使用频率的差异无统计学意义。（3）DC夫妻中的HIV阳性一方在0．5、1和2．5年随访时,CD4^＋T淋巴细胞计数保持稳定或上升的比例分别是85．4％、66．6％和60．0％。15对在2．5年随访到双方的夫妻,HIV阳性一方中病毒载量稳定和下降的占66．7％,绝大部分病毒载量保持稳定或下降者同时CD4^＋T淋巴细胞计数也保持稳定或上升。结论 研究中未观察到HIV在夫妻之间的传播。HIV阳性一方稳定的病毒载量和CD4^＋T细胞计数可能是HIV未发生传播的原因之一,宿主的遗传免疫学因素以及HIV的生物学特性对传播的影响值得深入研究。     

我国HIV-1流行株gp41抗原表位筛选与串联表达

目的探讨HIV-1gp41抗原表位串联表达蛋白用于HIV抗体检测的可行性。方法用HIV-1gp41蛋白亲和层析柱制备HIV-1感染者血清中的多克隆抗体，用噬菌体展示随机十二肽库进行生物淘洗，反向吸附非特异性噬菌体。经ELISA鉴定阳性克隆，DNA测序，确定优势表位。将优势表位与文献报道的另一个优势表位串联，克隆人pQE30载体进行蛋白表达。结果成功筛选到位于HIV-1 gp41蛋白上的优势抗原表位(YGPKDAETTAIW)，串联表位(YGPKDAETTAIW-GGGS-SC-SAKFTCTTQI)在pQE30载体中实现可溶性表达。重组蛋白具有良好的抗原性，能与不同的HIV-1抗体阳性血清呈特异反应。结论HIV-1 gp41抗原表位串联表达设计足可行的，串联表位重组蛋白可用于HIV-1抗体检测，但检测灵敏性低于常规方法。     

宁夏回族自治区HIV-1感染者抗病毒治疗前免疫学与病毒学指标调查

目的了解该地区部分HIV．1感染者抗病毒治疗前CD4^＋T淋巴细胞、病毒载量分布及耐药性毒株存在情况。方法利用流式细胞技术对CD4^＋T淋巴细胞计数，使用NASBA方法测定病毒载量，利用lit-PCR获得目的基因序列，登陆http：／／hivdb．stanford．edu分析耐药突变位点。结果该地区感染人群中66．66％的患者CD4^＋T淋巴细胞数〉350个／mm^3，患者病毒载量对数平均值为3．784±1．048，检测样本中有2例出现耐药性。结论该地区HIV-1感染者目前多为无症状期，但病毒拷贝数较高，耐药性毒株流行水平较低。应在该地区加强抗病毒治疗的宣传。     

巴氏法对异体骨中HIV病毒灭活效果的研究

目的 研究巴氏消毒法对异体骨材料中污染的人免疫缺陷病毒的灭活效果.方法 对连续3批异体骨材料进行浸泡染毒,用巴氏消毒法处理染毒异体骨材料,采用细胞培养法测定处理后的病毒滴度,并对样品进行细胞盲传3代,观察细胞病变情况.结果 用巴氏消毒法处理,染毒异体骨材料中HIV-1 IIIB毒株病毒滴度至少降低了5.67log,对检测标本盲传3代均未出现细胞病变.结论 巴氏消毒法能够有效灭活异体骨材料中污染的人免疫缺陷病毒.     

吗啡对HIV-1在MT2细胞和巨噬细胞中复制的影响

目的 附测定双抗体夹心法检测p24抗原表达.用Student-t检验或方差分析(ANOVA)比较不同细胞处理组间p24抗原表达差异;采用重复测量数据的方差分析比较不同时间吗啡处理组比对照组的p24抗原表达增加或减少倍数的变化趋势.结果 HIV-1感染MT2细胞后第3、4、5和6天,3个浓度的吗啡处理的(1)组的p24抗原表达[第3天:(4.44±0.30)、(5.59±0.25)和(4.60±0.24) ng/ml;第4天:(24.30±2.66)、(31.73±1.17)和(26.02±0.37) ng/ml;第5天:(56.30±1.26)、(81.77±2.49)和(63.66±2.57) ng/ml;第6天:(150.70±8.97)、(243.09±8.93)和(173.72±7.73) ng/ml]均高于(4)组[第3~6天分别为(1.93±0.05)、(8.03±0.09)、(15.30±0.91)、(41.01±0.84) ng/ml],差异有统计学意义(第3天:t值分别为14.15、24.74和19.14,P均<0.01;第4天:t值分别为10.59、34.92和81.2,P均<0.01;第5天:t值分别为45.83、43.51和30.07,P均<0.01;第6天:t值分别为20.09、39.02和29.55,P均<0.01).3个浓度的吗啡处理的(1)组的p24抗原表达比(4)组增加的倍数,随HIV-1感染MT2细胞的时间的延长具有上升的趋势,时间效应具有统计学意义(F=842.18,P<0.01).HIV-1感染巨噬细胞组后第4、6、8和10天,3个浓度的吗啡处理的(5)组的p24抗原表达[第4天:(0.68±0.15)、(0.87±0.41)和(0.75±0.09) ng/ml;第6天:(1.64±0.57)、(2.07±0.12)和(1.75±0.17) ng/ml;第8天:(6.31±0.17)、(8.81±0.34)和(7.19±0.11) ng/ml;第10天:(32.30±17.55)、(50.74±17.55)和(39.74±0.56) ng/ml]均高于(8)组[第4、6、8、10天分别为(0.60±0.01)、(1.16±0.07)、(3.84±0.45)、(17.55±0.86) ng/ml],差异有统计学意义(第4天:t值分别为7.27、11.06和3.02,P均<0.05;第6天:t值分别为8.93、11.3和5.45,P均<0.01;第8天:t值分别为8.83、15.11和12.42,P均<0.01;第10天:t值分别为13.65、17.84和36.69,P均<0.01).3个浓度的吗啡处理的(5)组的p24抗原表达比(8)组增加的倍数,随HIV-1感染时间的延长具有上升的趋势,时间效应具有统计学意义(F=135.58,P<0.01).结论 吗啡能够促进HIV-1在MT2细胞和巨噬细胞内的复制,并且随着感染时间的延长而增加;吗啡促进HIV-1复制的作用可被纳洛酮阻断.

Abstract：

Objective To determine whether Morphine has the ability to enhance HIV-1 replication in MT2 and Macrophage in vitro and assess the influence of Naloxone on Morphine2s effect.Methods MT2 cells were randomly assigned into 4 groups: (1) Morphine treatment for MT2 group, (2) Morphine+Naloxone co-treatment for MT2 group, (3) Naloxone treatment for MT2 group and (4) MT2 Control;Macrophages were also randomly assigned into 4 groups: (5) Morphine treatment for Macrophage group, (6) Morphine+Naloxone co-treatment for Macrophage group, (7) Naloxone treatment for Macrophage group and (8) Macrophage Control. Group (2), (3), (6) and (7) were pre-treated with 10-8 mol/L Naloxone for 0.5 h, and then group (1) and (2) were treated with 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L Morphine for 24 h;group (5) and (6) were disposed of 10-10 mol/L Morphine for 24 h.All 8 groups were added in HIV-1 viral strain with 50% tissue culture infective dose(TCID50).P24 antigen in MT2 cells culture supernatant at day 3, 4, 5 and 6, and in Macrophages culture supernatant at day 4, 6, 8, 10 and 12 after infection were determined with ELISA.Student2s t-test and ANOVA were used to compare the differential expression in different groups, and repeated measures ANOVA was used to compare the increasing or decreasing expression of p24 antigen in morphine treatment groups than that in the control group at different time points.Results On the 3rd day of infection with HIV-1 in MT2 cells, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8mol/L dose of group (1) were (4.44?.30), (5.59?.25) and (4.60?.24) ng/ml respectively, compared to control[(1.93?.05) ng/ml, t= 14.15, 24.74 and 19.14, all P<0.01].On the 4th day, 10-12, 10-10 and 10-8mol/L dose of group (1) resulted in a significant increase of p24 antigen expression [(24.30?.66), (31.73?.17) and (26.02?.37) ng/ml]in culture supernatants compared to control[(8.03?.09) ng/ml, t=10.59, 34.92 and 81.2, all P<0.01].On the 5th day, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of group (1) were (56.30?.26), (81.77?.49) and (63.66?.57) ng/ml respectively, compared to control [(15.30?.91) ng/ml, t= 45.83, 43.51 and 30.07, all P<0.01].On the 6th day, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of group (1) were (150.70?.97), (243.09?.93) and (173.72?.73) ng/ml respectively, compared to control [(41.01?.84) ng/ml, t= 21.09, 39.02 and 29.55, all P<0.01].The enhanced multiple of p24 antigen expression in three doses of morphine treatment group compared to control increased with HIV-1 infected MT2 cells time, trend analysis of repeated measurements showed statistically significant time effect (F=842.18, P<0.01). On the 4th day of infection with HIV-1 in Macrophage cells, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of group (5) were (0.68?.15), (0.87?.41) and (0.75?.09) ng/ml respectively, compared to control [(0.60?.01) ng/ml, t= 7.27, 11.06 and 3.02, all P<0.05]. On the 6th day, 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of group (5) resulted in a significant increase of p24 antigen expression[(1.64?.57) , (2.07?.12 ) and (1.75?.17) ng/ml]in culture supernatants compared to control [(1.16?.07) ng/ml, t=8.93, 11.3 and 5.45, all P<0.01].On the 8th day, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of group (5) were (6.31?.17), (8.81?.34) and (7.19?.11) ng/ml respectively, compared to control [(3.84?.45) ng/ml, t=8.83, 15.11 and 12.42, all P<0.01]. On the 10th day, the expression of p24 antigen in 10-12, 10-10 and 10-8 mol/L dose of Morphine treated group were (32.30?7.55), (50.74?7.55) and (39.74?.56) ng/ml respectively, compared to control [(17.55?.86) ng/ml, t= 13.65, 17.84 and 36.69, all P<0.01].The enhanced multiple of p24 antigen expression in three doses of group (5) compared to control increased with HIV-1 infected Macrophage cells time, trend analysis of repeated measurements showed statistically significant time effect (F=135.58, P<0.01).Conclusions Morphine has the ability to enhance HIV-1 replication in MT2 cell and Macrophage. This Morphine-mediated increase of p24 antigen expression can be blocked by Naloxone.     

影响艾滋病病毒异性性传播有关因素的研究

目的　了解中国中部地区艾滋病病毒 (HIV)异性性传播的特点及其影响因素。方法(1)现况研究 :在中国河南、河北等省农村寻找至少一方HIV阳性、有稳定婚姻、年龄 2 0～ 50岁的夫妻 ,由专业研究人员对其进行访谈 ,并采集夫妻双方抗凝全血样本 2 0ml,检测病毒载量、CD4 CD8细胞计数 ;(2 )病例对照研究 :以一方HIV阳性 ,通过性生活导致对方HIV感染的夫妻为病例 ,以一方HIV阳性、双方有正常的性生活 ,但对方未感染HIV的夫妻为对照 ,进行病例对照研究。结果　 (1)共收集到 87对至少一方HIV阳性的夫妻 ,其中病例夫妻 7对 ,对照夫妻 56对 ,发生HIV性传播的夫妻占全部有性传播危险夫妻的 11.1% ;(2 )在对照夫妻中 ,男方HIV阳性的 14对 ,占 2 5.0 % ,女方HIV阳性的 42对 ,占 75.0 % ;(3 )病例组性生活次数≥ 4次 月的比例显著高于对照组 (Fisher’s检验 ,P =0 .0 47,OR =8.0 )。病例组病毒载量≥ 10 5 拷贝 ml的比例显著高于对照组 (Fisher’s检验 ,P =0 .0 16,OR =2 2 .0 )。病例组先感染一方的HIV病毒载量显著高于对照组的感染一方 (t=3 .591,P <0 .0 1)、而CD4细胞计数和CD4 CD8比值均显著低于对照组的感染一方 (t=2 .767,P <0 .0 5;t =6.0 6,P <0 .0 5)。结论　中国中部地区有稳定婚姻的夫妻中HIV异性性传播的     

HIV抗体质控血清的稳定性研究

目的 研究配制的质控血清的稳定性和影响因素。方法 将配制的HIV抗体质控血清进行不同的处理,然后统一用 3种试剂进行检测:（1）在 37℃,室温和 4℃保存不同时间;（2）加入 0.1％的叠氮钠和 0.01％的硫柳汞保存不同时间;（3）室温和-20℃之间反复冻融。结果 人工配制的质控血清在4℃条件下6个月内可以保持稳定,在室温条件下1个月内保持稳定。反复冻融及加入0.1％的叠氮钠或0.01％的硫柳汞对检测结果没有影响。双抗原夹心法试剂检测的S/CO值显著高于间接法试剂。结论 在常规条件下血清中的HIV抗体能够在较长时间内保持稳定。     

河南驻马店市性传播HIV感染者中流行的HIV亚型分析北大核心

目的分析河南驻马店市经性传播的艾滋病病毒(HIV)感染者中,HIV流行毒株亚型及其毒株特征。方法通过专业问卷调查,了解驻马店地区经性传播HIV感染者的基本状况。采集感染者的EDTA抗凝静脉血,检测其CD+4T淋巴细胞(简称CD4细胞)计数,提取外周血浆中病毒核糖核酸(RNA),使用反转录巢式荧光定量聚合酶链反应(PCR)方法扩增病毒全长gag和部分pol基因,利用Clustal软件比对序列,利用BioEdit软件手工校对,利用NCBI网站HIV分型工具分析病毒亚型,利用MEGA软件构建NJ树,分析病毒系统进化关系。结果共收集到HIV感染者血液74份,全部经性传播感染HIV。经过测序,共获得HIV全长gag基因56条(75.7%),全长pol基因38条(51.4%)。对61例HIV感染者感染病毒亚型进行了分析,其中B亚型毒株47例(77.0%),CRF01_AE毒株6例(9.8%),CRF07_BC毒株4例(6.6%),C亚型毒株2例(3.3%),新型重组毒株2例(3.3%)。系统进化分析显示,所有的B亚型毒株均为Thai B毒株。38例获得pol区序列的样本中,有4例具有耐药突变。结论驻马店市性传播HIV感染者中流行的HIV毒株构成复杂,Thai B亚型毒株是优势毒株,CRF01_AE、CRF07_BC、C等亚型毒株均已进入该人群,而且出现了新型重组毒株。针对该人群的HIV流行毒株监测至关重要。