补心软脉颗粒的提取纯化工艺优选

目的:优选补心软脉颗粒的提取纯化工艺。方法:以红景天苷转移率和浸膏得率为综合评价指标,选取加水量、提取时间和提取次数为考察因素,采用正交试验法优选补心软脉颗粒中红景天等5味药材饮片的水提取工艺;以总黄酮醇苷转移率为指标,采用单因素试验考察银杏叶的醇提工艺;以红景天苷的转移率和除杂率为指标,采用单因素试验考察补心软脉颗粒水提液的醇沉工艺。结果:优选的水提工艺为红景天等5味加8倍量水提取3次,每次0.5 h;优选的醇提工艺为银杏叶加10倍量70%乙醇提取2次,每次1 h;优选的醇沉工艺为水提液浓缩至相对密度1.10～1.15,缓缓加入95%乙醇至含醇量70%,边加边搅拌,冷处静置24 h。结论:该优选的提取纯化工艺简便易行,为补心软脉颗粒的大生产提供实验依据。     

补骨脂的超临界CO2萃取工艺优选

目的:对补骨脂的超临界CO2流体萃取工艺条件进行优化.方法:选取萃取温度、萃取压力、萃取时间为考察因素,以补骨脂素和异补骨脂素萃取率为指标,采用单因素考察及正交试验对补骨脂萃取工艺进行优选.结果:优选的工艺条件为1.5倍量95％乙醇为夹带剂,萃取温度65℃,萃取压力20 MPa,萃取时间2h.结论:优选的超临界CO2流体萃取工艺合理,可行.     

tktl1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的:研究转酮醇酶样基因1(tktl1)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与临床病理的关系.方法:RT-PCR法检测转酮醇酶基因家族各成员(tkt、tktl1、tktl2)mRNA在42例HCC及癌旁组织中的表达并研究其与临床病理参数间的关系.结果:HCC组织中tktl1 阳性表达率明显高于tkt和tktl2的阳性表达率 (P＜0.05).tktl1在HCC中的阳性表达率明显高于癌旁组织(P＜0.05);而 tkt和tktl2阳性表达率在肝癌及癌旁组织间无明显差异(P＞0.05). HCC中tktl1的高表达同肿瘤分化程度,静脉癌栓,CLIP评分有关 (P＜0.05),而与性别、年龄、肿瘤大小、肝内及淋巴转移、AFP水平无关(P＞0.05).结论:tktl1与HCC的发生发展有关,影响肝癌的分化、转移及患者预后,有望成为HCC治疗的新靶点.     

197例Ⅲ-Ⅳa期鼻咽癌患者的预后因素分析

目的:探讨Ⅲ-Ⅳa期鼻咽癌患者不同临床特征及不同治疗模式对鼻咽癌患者预后的影响.方法:对初治进行了根治性放疗的197例Ⅲ-Ⅳa期鼻咽癌患者的临床特征和治疗模式进行回顾性分析.结果:本组患者总的1、3、5年生存率分别为74%、51%、46%,中位生存时间50.6个月;单因素分析显示N分期对预后有显著性影响(P<0.05),多因素分析显示年龄、N分期是影响鼻咽癌生存的独立预后因素(P<0.05);同时接受化疗,联合放化疗组与单纯放疗组比较生存无显著性差异;联合放化疗组中,同期放化疗58例,同期放化疗组与单纯放疗组相比生存无显著性差异;同期放化疗组,基于DDP的同期放化疗34例,羟基喜树碱化疗24例,前者与单纯放疗组预后要好于后者,两两比较均有显著性差异,而前者与单纯放疗组相比,两组的生存无显著性差异.结论: 年龄越大,N分期越晚预后越差;放疗联合不规范的化疗未能改善局部晚期鼻咽癌的生存.     

PDGF-D对人肝癌细胞增殖及VEGF表达影响研究*

目的:研究血小板源性生长因子D（PDGF-D）对人肝癌细胞株BEL-7402增殖及其血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法:体外培养肝癌细胞株BEL-7402和肝癌旁非瘤性细胞株QSG-7701,采用RT-PCR 方法检测PDGF-D 与PDGFR βmRNA 在BEL-7402和QSG-7701的表达情况;将浓度分别为0（对照）、5、10、20、50、100、200 μ g/mL 的人重组PDGF-DD蛋白加入BEL-7402中,采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测肝癌细胞的生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期变化;半定量RT-PCR 检测VEGF及PDGFR β mRNA 表达情况,ELISA 检测PDGF-DD干预细胞后培养上清中VEGF蛋白的表达情况。结果:PDGF-D 及PDGFR βmRNA 在BEL-7402中高表达,与QSG-7701相比差异有统计学意义（P<0.05）。 PDGF-DD干预细胞后,可促进人BEL-7402增殖,浓度为100 μ g/mL 时达最高峰;细胞周期分布变化,G0/G1 期细胞数减少,S 期细胞数增加,与对照组相比差异有统计学意义;RT-PCR 结果显示,VEGF 及PDGFR β RI 值,实验组（除5 μ g/mL 组外）与对照组相比差异有统计学意义;ELISA 结果显示,加入PDGF-DD各浓度组VEGF蛋白浓度较对照组增高,差异有统计学意义,并呈量效依赖性关系。结论:PDGF-DD能促进BEL-7402的增殖,上调PDGFR β 及VEGF的表达。PDGF-D 及其信号传导系统在肝癌的发生、发展中可能发挥重要的作用,可作为肝癌预后预测指标和治疗靶点。      

人肝癌细胞BEL-7402非常规照射模式生物效应探讨

目的 探讨不同照射模式对人肝癌细胞株BEL-7402生物效应变化影响及其与人肝细胞株QSG-7701放射敏感度差异。方法 6MV X线两种模式照射BEL-7402细胞(包括0、1、2、3、5、7、9、10Gy共8个吸收剂量点,剂量率3Gy/min)：(1)急速照射组,照射完成时间0~4min;(2)模拟三维适形照射组：照射完成时间：12~15min。成克隆分析法计算存活分数,多靶单击数学模型拟合曲线,求出SF2、D0、Dq等参数值;6MV X线单次5Gy照射体外培养的BEL-7402、QSG-7701 细胞, 采用MTT 比色法、流式细胞术测定细胞受照后不同时间存活率、凋亡率、细胞周期。结果 BEL-7402细胞模拟急速照射组和三维适形照射组D0、Dq、SF2值分别为1.78和1.69、1.45和1.54、0.625和0.654;QSG-7701 细胞照后24 h 凋亡率最高(18 %),而BEL-7402细胞照后12h凋亡率最高(32 %),存活率最低(65%),两株细胞照后12 h 凋亡率和存活率差异最大（P<0.01）。结论 三维适形照射模式下分次照射时间延长,生物效应下降;BEL-7402及QSG-7701两株细胞在照后存在放射敏感度差异。     

TNRC9 基因 rs12443621多态与中国人乳腺癌的相关性

 目的 探讨TNRC9 基因 rs12443621多态与中国妇女乳腺癌易感性及临床病理特征的关系。 方法 抽取321例乳腺癌患者和330例健康对照外周血,分离淋巴细胞,抽提基因组DNA,采用聚合酶链反应 连接酶检测反应(PCR-LDR)检测TNRC9 rs12443621基因多态,比较基因型分布和发病风险及临床病理特征的关系。危险度比值比(OR)及95％可信区间(CI)应用非条件Logistic回归分析计算。结果 Rs12443621 GG、AG和 AA基因型在病例组和对照组分别为 35.6%、46.3%、18.1%和 33.1%、48.1%、18.8%。 TNRC9 rs12443621基因型与发病年龄、淋巴结转移情况及雌、孕激素状态均无相关性。结论 TNRC9基因rs12443621多态与中国妇女乳腺癌易感性及临床病理特征无相关性。     

CYP2B6 Q172H 和 K262R基因多态性对乳腺癌患者环磷酰胺化疗预后的影响

 目的 探讨CYP2B6 Q172H和K262R基因多态性与乳腺癌环磷酰胺类药物辅助化疗预后的关系。方法 100例确诊的乳腺癌患者,采用环磷酰胺类药物为主的方案进行辅助化疗;用聚合酶链反应-连接酶检测反应检测CYP2B6 Q172H和K262R基因多态。结果 100例乳腺癌患者中,携带 Q172H(516G>T) GG、GT和TT基因型的患者分别占59%、38%和3%;携带K262R(785A>G) AA、AG和GG基因型的分别占47%、43%和10%。携带Q172H GT和TT基因型的患者无复发生存率显著高于携带GG 基因型的患者(P<0.05);携带K262R AG和GG基因型的患者无复发生存率显著高于携带AA基因型的患者。多因素分析结果显示,Q172H 多态是影响患者复发的独立危险因素（P<0.05)。结论 Q172H GT和TT基因多态与接受环磷酰胺药物辅助化疗的乳腺癌患者的预后有关。     

CD4+／CD25+与CD28+／TCR+T淋巴细胞亚群与进展期鼻咽癌患者预后的关系

目的 探讨外周血CD4+／CD25+与CD28+／TCR+T淋巴细胞亚群对预测进展期鼻咽癌患者预后的潜在价值。方法 收集本院2011年4月至2011年10月收治的53例进展期鼻咽癌患者（鼻咽癌组）的外周静脉血样本,应用葡聚糖 泛影葡胺密度梯度离心法收集淋巴细胞并用流式细胞仪检测CD4+／CD25+与CD28+／TCR+T淋巴细胞亚群的百分比。根据联合放化疗后随访18个月的结果分析CD4+／CD25+与CD28+／TCR+T细胞亚群水平与鼻咽癌复发的关系。同时选取29例健康志愿者作对照（对照组）。结果 鼻咽癌组的外周血CD4+／CD25+和CD28+／TCR+T淋巴亚群占总淋巴细胞的百分率为（10.6±2.7）％和（1.9±0.6）％,与对照组的（7.7±2.0）％和（2.9±1.0）％相比,差异均有统计学意义（P＜0.05）。参照对照组外周血CD4+／CD25+和CD28+／TCR+T淋巴亚群占总淋巴细胞百分率的95％置信区间分别为（6.9～8.5）％和（2.5～3.2）％,将鼻咽癌组的CD4+／CD25+T细胞分为正常组（≤8.5％）和升高组（＞8.5％）,CD28+／TCR+T细胞分为正常组（≥2.5％）和降低组（＜2.5％）。鼻咽癌外周血CD4+／CD25+T细胞升高组在治疗后18月内的复发率为32.1%,明显高于正常组的8.7%（P＜0.05）;CD28+／TCR+T细胞降低组和正常组的复发率分别为23.3%和19.0%,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论CD4+／CD25+T淋巴细胞亚群是潜在的可评价进展期鼻咽癌患者复发风险的预测因子。     

局部应用血管内皮生长因子及骨髓间充质干细胞对超比例随意皮瓣成活率的影响

目的研究血管内皮生长因子（VEGF）及人骨髓间充质干细胞（MSC）联合应用对超比例随意皮瓣成活率的影响。方法采用密度梯度离心法和贴壁筛选法分离、培养人MSC,鉴定其纯度及生物学特性。40只Wistar大鼠随机分成空白对照组、VEGF组、MSC组、MSC+VEGF联合应用组,每只大鼠背部设计2 cm×5 cm带蒂皮瓣,术后连续 14 d观察皮瓣愈合情况。术后第14天处死各组动物,计算皮瓣成活百分率;切取距蒂部4 cm处皮瓣行组织学检查,观察远蒂端皮瓣的微血管数量。结果1）经流式细胞术和成脂、成骨诱导方法鉴定,本研究分离并培养的MSC具有多向分化潜能。2）经临床观察,各组大鼠均未出现免疫排斥反应。空白对照组、VEGF组、MSC组、MSC+VEGF 组动物的皮瓣成活百分率分别为55.4%±4.4%、70.7%±6.3%、65.1%±7.1%、93.4%±9.4%,3个实验组皮瓣成活百分率均高于空白对照组（P<0.05）,MSC+VEGF组成活百分率最高,高于其他3组,差异均有统计学意义（P<0.05）。3）组织学检查可见：与其他3组相比,MSC+VEGF组的肉芽组织最为丰富,成纤维细胞多,新生毛细血管最多。结论 1）采用贴壁筛选法和密度梯度离心法结合的方法可以得到纯化且具有多向分化潜能的MSC;2）人MSC具有无免疫反应性或免疫反应性低的特点,跨物种应用不会引起免疫排斥反应;3）VEGF和MSC联合应用具有协同作用,可在短期内重建缺血区域的血液循环,解决超比例皮瓣的远蒂端缺血问题,提高皮瓣成活率和创面组织的修复质量。