后巩膜加固术作用机制的实验研究

目的探讨后巩膜加固术的作用机制.方法24只家兔分为4组,以人巩膜为材料行插片法后巩膜加固术,分别于术后2,4,12和24周取标本,行肉眼观察及光镜、透射电镜检查.结果植片与宿主巩膜融合为一,"新巩膜"的厚度和硬度明显增加,抵抗力增强;局部血液循环改善.结论后巩膜加固术能加强薄弱的后部巩膜,改善眼球后部的血液供应,从而达到治疗病理性近视眼的目的.     

VIPR2在形觉剥夺性近视眼中的动态表达

目的：探讨高度近视眼眼球后壁组织血管活性肠肽受体2亚型（vasoactive intestinal peptide receptor 2,VIPR2）的动态表达及意义。方法：选择出生1d的黄鸡共21只，右眼遮盖作为实验组，分别持续遮盖1周，2周和4周。左眼未遮盖作为对照组。2组均采用检影验光检测屈光度；眼科A超测定新鲜离体眼轴长度；对2组3个时间段眼球后壁行SP法免疫组织化学染色，检测VIPR2的动态表达。结果：实验组由实验前远视眼快速演变为高度近视眼，并随遮盖时间延长，近视度数加深，眼轴延长；2组视网膜光感受器外节、脉络膜均有VIPR2强阳性表达；随出生时间延长，2组VIPR2表达均逐渐下调。与对照组相比，实验组VIPR2表达明显上调（P<0.05）。结论：形觉剥夺可导致高度近视； VIPR2表达主要位于视网膜光感受器外节和脉络膜，可能参与了近视眼的形成与发展。     

光预适应对小鼠视网膜光感受器细胞光损伤的保护作用

目的　探讨光预适应对视网膜光感受器细胞光损伤的保护作用及其机制。方法　42只小鼠随机分为正常对照组、光损伤组、光预适应+光损伤组和光预适应组。光损伤组采用4000 Lux白色冷光源对BALB/c小鼠进行4 h持续照射;光预适应+光损伤组先采用600 Lux白色冷光源与黑暗（12 h/12 h）交替环境下饲养6 d,然后采用4000 Lux白色冷光源持续照射4 h;光预适应组仅采用600 Lux白色冷光源与黑暗（12 h/12 h）交替环境下饲养不同时间（2 d、4 d和6 d）。正常对照组、光损伤组和光预适应+光损伤组分别采用闪光视网膜电图（flash electroretinogram,FERG）和组织病理学检查检测视网膜光感受器细胞的功能和形态学变化。光预适应组运用实时荧光定量PCR法检测预适应对小鼠视网膜中白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor,LIF）mRNA相对表达水平的影响;运用Western blot法检测光预适应对信号转导子和转录激活因子3（STAT3）蛋白磷酸化水平的影响。结果　FERG检查结果显示,与正常对照组相比,光损伤组暗适应ERG a波振幅下降,差异有统计学意义（P=0.000）;与光损伤组相比,光预适应+光损伤组暗适应ERG a波振幅显著增加,差异有统计学意义（P=0.000）。组织病理学检查结果显示,与正常对照组相比,光损伤组小鼠视网膜外核层细胞核数量明显减少,差异有统计学意义（P=0.000）;与光损伤组相比,光预适应+光损伤组外核层细胞核数量明显增多,差异有统计学意义（P=0.000）。实时荧光定量PCR检测结果显示,光预适应显著增加LIF mRNA的相对表达量,且呈时间依赖性（F=128.776,P=0.000）。Western blot检测结果显示,光预适应显著增加STAT3蛋白磷酸化的相对表达量,且呈时间依赖性（F=73.493,P=0.000）。结论　光预适应对视网膜光感受器细胞光损伤具有保护作用,其可能通过激活LIF/STAT3信号通道发挥作用。     

大鼠视网膜与视皮层神经元原代培养方法学特点的比较

背景：神经元的原代培养是进行神经系统结构和功能研究的一种重要手段。如果能建立稳定良好的视网膜、视皮层神经细胞体外培养体系,对深入研究其各种细胞成分的生物学功能、病理改变过程与机制以及药物反应等十分重要。 目的：原代培养新生大鼠视网膜及视皮层神经元并比较二者特点,探求最佳分离和培养方法,为相关性眼病的临床基础研究提供实验模型。 设计、时间及地点：神经细胞原代培养。于2007-02/2008-03在中南大学湘雅医院实验中心、湖南师范大学生命科学学院完成。 材料：出生1~3d清洁级SD大鼠。 方法：分别采用机械分离及酶消化法分离新生大鼠视网膜及视皮层神经元,应用含10%新生牛血清、10%F-12 Nutrient Mixtures的DMEM培养基进行接种培养,含2% B-27 Serum-Free Supplements的Neurobasal Medium进行维持培养,利用尼氏染色进行神经元鉴定。 主要观察指标：培养视网膜及视皮层神经元,尼氏染色显示神经元比例。 结果：培养的神经元生长良好,胞体饱满,突起长。尼氏染色示视网膜神经元比例大于90%,视皮层神经元比例大于50%。 结论：视网膜及视皮层神经元培养方法及生长特点存在不同,需采用不同的方法进行培养以获得高纯度的神经元。     

左旋多巴治疗大龄患者屈光参差性弱视疗效的多因素分析

如何提高大龄患者屈光参差性弱视的疗效是弱视治疗研究的重要课题。本研究通过回顾性分析左旋多巴治疗58例大龄屈光参差性弱视患者的临床资料,筛选左旋多巴疗效的影响因素以指导临床治疗。     

Primary culture of retinal Müller cells in adult rats assisted by the peritoneal exudative cells

Objective To investigate the effect of peritoneal exudative cells as feeder cells on growth from adult rats, which were identified with specifically biological marker of maerophage (CD68). The by enzyme digestion method, and identified by GFAP and vimentin immunocytochemicaUy. As the feeder cells. Results Over ninety-five percent of rat peritoneal exudative cells were macrophage, which have a flask and grew fast, with large applanate cell bodies. The third-generation cells grew slowly. After cocuhured with feeder cells, the Moiler cells showed more rapid growth rate with more cells in S and G2/M phase(S phase, t=4. 172, P<0.001; G2/M phase, t=3. 562, P<0.01)and less apoptotic rate (t =3. 804, P<0. 01). The growing cycle was cut down from 25-30 days to 18-22 days for the first-generation cells, from 10-15 days to 7-10 days for the second-generation cells. Conclusion It is an effective method to use the peritoneal exudative cells as feeder cells cocuhured with primary culture of retinal Müller cells,which can shorten the culture period of Müller cells in adult rats.     

豚鼠形觉剥夺性近视眼视网膜、脉络膜多巴胺代谢的变化

目的研究形觉剥夺对豚鼠神经视网膜、视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium,RPE）／脉络膜复合体多巴胺（dopamine,DA）代谢的影响。方法28日龄豚鼠36只,分为3组：正常对照组、遮盖组、遮盖＋去遮盖组,每组12只。遮盖组用半透明眼罩遮盖豚鼠右眼14d,遮盖＋去遮盖纽在遮盖11d后去遮盖3d。14d后测定角膜曲率半径、眼球屈光度和眼轴长度。处死豚鼠,取眼后极部视网膜、脉络膜组织,用免疫组化染色和Western blotting法检测酪氨酸羟化酶（tyrosine hydroxylase,TH）蛋白在神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的表达情况,用高效液相色谱检测神经视网膜、RPE／脉络膜复合体的DA、二羟基苯乙酸（3,4-dihydroxyphenylacetic acid,DOPAC）的含量。结果TH蛋白阳性表达于视网膜神经节细胞和内核层部分细胞,RPE／脉络膜复合体中表达阴性。遮盖14d后,豚鼠遮盖眼眼轴延长,近视形成,神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量降低（P〈0．05）。遮盖＋去遮盖纽的遮盖眼近视程度低于遮盖组．其神经视网膜TH蛋白表达量和DA、DOPAC含量升高（P〈O．05）,但仍低于正常对照组（P〈O．05）。各纽豚鼠RPE／脉络膜复合体的DA、DOPAC含量比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论形觉剥夺能调控豚鼠神经视网膜DA代谢,但不影响RPE／脉络膜复合体的DA代谢。     

Primary culture of retinal Müller cells in adult rats assisted by the peritoneal exudative cells

Objective To investigate the effect of peritoneal exudative cells as feeder cells on growth from adult rats, which were identified with specifically biological marker of maerophage (CD68). The by enzyme digestion method, and identified by GFAP and vimentin immunocytochemicaUy. As the feeder cells. Results Over ninety-five percent of rat peritoneal exudative cells were macrophage, which have a flask and grew fast, with large applanate cell bodies. The third-generation cells grew slowly. After cocuhured with feeder cells, the Moiler cells showed more rapid growth rate with more cells in S and G2/M phase(S phase, t=4. 172, P<0.001; G2/M phase, t=3. 562, P<0.01)and less apoptotic rate (t =3. 804, P<0. 01). The growing cycle was cut down from 25-30 days to 18-22 days for the first-generation cells, from 10-15 days to 7-10 days for the second-generation cells. Conclusion It is an effective method to use the peritoneal exudative cells as feeder cells cocuhured with primary culture of retinal Müller cells,which can shorten the culture period of Müller cells in adult rats.     

准分子激光屈光性角膜切削术治疗近视和近视散光3年疗效分析

目的 :评价准分子激光角膜切削术 (photorefoactivekeratecomy ,PRK)治疗近视、近视散光的远期疗效。方法 :按术前屈光度将 2 0 9例 (3 77例 )屈光度为 - 1 5 0～ 1 6 0D的患者分为二组 ,低中度组 (I组 )为 - 1 5 0～ - 6 0 0D(2 3 8眼 ) ,高度组 (II组 )为 - 6 2 5～ - 1 6 0 0D(1 3 9眼 )。应用美国Visx2 0 /2 0准分子激光仪对上述二组患者行PRK治疗 ,并对患者术后 3年的屈光度、视力、角膜屈光力、角膜厚度、并发症进行随访观察。结果 :I组、II组中屈光度 <± 1D者分别占 94 5 %和 6 1 9% ;≥± 2 0 0D分别占 0 % ,2 3 7%。术后裸眼视力≥ 0 5者在I组、II组中分别占 99 6 %和 79 9% ;≥ 1 0者分别占 85 3 % ,48 2 %。角膜屈光力两组均在术后 6个月稳定 ,角膜上皮下雾状混浊O级在I组、II组分别为1 0 0 %和 98 6 % ,术后眼压两组均正常。结论 :准分子激光屈光性角膜切削术治疗近视、近视散光效果肯定 ,尤对低中度患者疗效更佳     

视网膜母细胞瘤细胞系HXO－Rb_（44）化疗敏感性及多药耐药性研究

对视网膜母细胞瘤细胞系ＨＸＯ－Ｒｂ４４进行１１种不同类抗癌药物的敏感性测试，显示该细胞系存在多药耐药现象。该细胞系在手术取材前及培养过程中，未接触过任何抗癌药物，提示这种多药耐药现象为该肿瘤细胞固有的。本研究为进一步探索视网膜母细胞瘤的化疗抗性，寻找新的抗癌靶点提供了理论依据。