以GFP为报告基因的酿酒酵母mRNA在哺乳动物细胞中的表达

目的　研究酵母mRNA在哺乳动物细胞中的翻译表达。方法　半乳糖诱导GFP基因在酿酒酵母细胞中表达,提取其mRNA ,RT -PCR鉴定,并以脂质体为介导,对血管内皮细胞HUVEC以及绿猴肾细胞COS - 7进行体外转染。结果　被转染HUVEC和COS - 7细胞分别出现绿色荧光,报告基因GFPmRNA在动物细胞中被识别、翻译。结论　提示酵母mRNA可能作为基因治疗物质应用于口服基因治疗的研究。     

人ING4的基因克隆及真核表达

目的 克隆人生长抑制因子家族(inhibitor of growth famility member4,ING4)基因,构建其真核表达载体pEGFP-ING4.方法 提取人胎盘总RNA,经RT-PCR扩增出ING4 cDNA,克隆至pEGFP-C2载体,构建的真核表达载体pEGFP-ING4用双酶切、基因测序进行序列鉴定;转染MCF-7细胞用荧光显微镜和免疫组化检测重组质粒的表达.结果 RT-PCR产物为750 bp的条带,双酶切和基因测序正确,转染可见目的 蛋白融合表达.结论 从人胎盘组织中成功克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达,为进一步研究ING4基因的作用及抗肿瘤机制奠定了基础.     

人肾上腺皮质癌SW-13细胞株的培养和生物学特性

目的探讨人肾上腺皮质癌SW-13细胞株的培养方法及生物学特性。方法将SW-13细胞株进行体外培养，MTT法检测其生长曲线，电镜下、光镜下进行细胞形态学观察。结果细胞需在37℃，无CO2，偏碱性环境下培养，6—8h完全贴壁，2d左右进入对数生长期。细胞生物学性状稳定。结论SW-13细胞株是一种生物学特性稳定、实用的细胞株，相信随着研究的进一步深入，其必将发挥更大的作用价值，有着更广的研究领域。     

鼻咽癌患者血清血管形成素水平的测定及其临床意义

目的:分析血管形成素(angiogenin,ANG)在鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma,NPC)患者血循环的含量及其临床意义。方法:采用ELISA测定42例NPC患者(Ⅰ期4例,Ⅱ期20例,Ⅲ期11例,Ⅳ期7例)和30例健康人血清ANG水平。结果:NPC患者治疗前血清ANG水平为(371.4±123.5)ng/mL,显著高于健康对照组的(292.5±74.2)ng/mL(P<0.01),且血清ANG水平随着NPC临床分期的增加而升高(P<0.05);治疗后患者达到部分缓解或完全缓解,血清ANG水平为(340.6±112.4)ng/mL,比治疗前明显降低(P<0.05),但仍然高于健康对照组(P<0.05)。结论:NPC患者血清ANG水平上升,ANG升高程度与肿瘤的进展有关。     

抗重组人骨唾液酸蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

目的研制重组人骨唾液酸蛋白(rhBSP)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法以纯化的rhBSP免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗rhBSP mAb;用亚型鉴定试剂条鉴定IgG亚类;ELISA鉴定mAb的特异性和效价。结果获得2株能稳定分泌特异性mAb的抗rhBSP的杂交瘤细胞系AHB1和AHB5,Ig亚类分别为IgG2a和IgG1,轻链均为κ型,其效价分别为1×10-3和1×10-7。腹水mAb经Protein A亲和色谱柱纯化后,纯度达92%以上。结论获得抗rhBSP的mAb,为进一步研究BSP的生物学功能和用于临床诊断实验研究创造了条件。     

低功率毫米波辐照对HL60细胞增殖的影响

目的为探讨低功率毫米波对HL60细胞活力影响的机制。方法应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen，PCNA）免疫组化染色及图像分析等方法，检测低功率（功率密度约2mW／cm^2）及频率41．32GHz的毫米波辐照HL60白血病细胞增殖的影响；分为辐照时间15、30、45、60min组和对照组（0min组）共5组。结果与对照组比较，毫米波辐照45min和60min组，HL60细胞活性增加和PCNA阳性细胞增多，光镜观察各组未见明显差别，超微结构显示HL60细胞形态呈增殖改变。结论低功率毫米波辐照对HL60细胞有促进增殖的作用。     

重组载体pEGFP-ANG的构建及ANG基因在HUVEC中的表达

目的 :建立血管生成素 (angiogenin ,ANG)基因的真核表达系统。方法 :采用化学合成拼接法 ,获得人ANG全长cDNA并测序 ,构建重组荧光真核细胞表达质粒 pEGFP ANG ,然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)。应用荧光显微镜观测及免疫组化染色 ,对转染细胞内 pEGFP ANG的表达进行鉴定。结果 :测序表明 ,编码的氨基酸序列与人ANG完全一致。荧光显微镜下可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光。免疫组化检测显示 ,转染的HUVEC中有棕色颗粒。结论 :获得了人ANG的全长编码基因。构建的重组体pEGFP ANG转染HUVEC后 ,可表达人ANG蛋白     

肾移植患者血清血管形成素水平检测及其临床意义

目的　观察肾移植患者在手术前后血清血管形成素 (angiogenin ,ANG)水平的动态变化并分析其可能的临床意义。方法　 2 4例行肾移植手术的患者为肾移植组 ,2 6例健康志愿者为正常组 ,取二者的血清 ,其中肾移植组分术前 1天、术后 1天、1周、2周、3周、4周和 2个月各取血 1次 ,运用ELISA法检测血清ANG浓度 ,全自动生化分析仪测定血清肌酐 (Cr)和尿素氮 (BUN)浓度。结果　术前肾移植组血清ANG浓度 (317 6± 89 7)ng/ml与正常组 (2 92 7± 73 5 )ng/ml比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,术后 1天即开始升高 (36 9 8± 10 3 2 )ng/ml,P <0 0 5。术后 3周为最高 (5 0 4 8± 15 3 1)ng/ml,P <0 0 0 1。其后开始回落 ,2个月左右降至正常组 (P >0 0 5 )和术前 (P >0 0 5 )水平 (315 3± 92 8)ng/ml。术后患者血清Cr和BUN浓度均有明显降低 ,但与升高的血清ANG水平无关 (P >0 0 5 )。结论　肾移植患者血清ANG水平在术后迅速升高 ,持续约 2个月。这可能是一种保护性修复机制 ,有助于血管吻合、抗感染和切口愈合 ,但与术后肾功能恢复的预后无明显相关性