Genistein对人尿道鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察Genistein(GEN)对人尿道鳞癌细胞系HUS-98细胞增殖和凋亡的影响.方法MTT法检测细胞增殖,碘化丙啶(PI)和Annexin V-FITC双染色的流式细胞分析方法检测凋亡,台盼蓝拒染法测定淋巴细胞活力,免疫细胞化学检测雌激素受体(ER)蛋白的表达.结果低浓度(1×10-111～1×10-8mol/L)GEN促进HUS-98细胞的生长,处理3 d时,1×10-8mol/L组的细胞数比对照组的增加9%(P＜0.01);高浓度(1×10-7mol/L～5×10-4mol/L)GEN则浓度依赖性地引起HUS-98细胞数目逐日减少,但是除5×10-4mol/L外的其余浓度对正常淋巴细胞的生长没有影响.1×10-6mol/L GEN作用于HUS-98细胞24～48 h,凋亡细胞和坏死细胞的比率均增加,且有时间依赖性.HUS-98细胞表达ER蛋白.结论高浓度GEN具有抑制ER阳性的人尿道鳞癌细胞的生长和诱导凋亡及坏死的作用,为今后用于尿道鳞癌的治疗提供了实验依据.     

尾加压素Ⅱ对人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究尾加压素Ⅱ(UⅡ)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的诱导凋亡作用,以及这种诱导作用与细胞内游离Ca2+的关系。方法:(1)光镜观察培养的静脉内皮细胞形态。(2)分成浓度组和时间组:浓度组加入不同浓度的UⅡ(10-9～10-6mol/L),并将硫氮唑酮加入对照组及10-7mol/L组;时间组则观察10-7mol/LUⅡ作用后不同时间段HUVEC的凋亡率。(3)流式细胞仪分析细胞周期,计算凋亡率。(4)电镜检测细胞凋亡。结果:(1)UⅡ促进HUVEC凋亡,二者呈时间依赖性(P<0.05);二者呈明显量效关系(P<0.05)。(2)硫氮唑酮可抑制UⅡ的诱导作用。结论:UⅡ可诱导HUVEC凋亡,其机制可能与[Ca2+]i升高有关。     

低功率毫米波辐射对K562细胞增殖的影响

目的 探讨低功率毫米波对K562细胞活力的影响。方法 应用细胞培养、活细胞计数、光镜、电镜及PCNA免疫组化染色及图像分析等方法,检测频率41.32GHz的毫米波辐射K562白血病细胞和未辐射毫米波K562白血病细胞活力的影响。 结果 与对照组比较,毫米波辐射45和60min组,K562细胞活力下降和PCNA阳性细胞减少,光镜观察各组未见明显差别,超微结构显示细胞形态呈增殖抑制改变。 结论 低功率毫米波辐射对K562细胞具有抑制增殖的作用。     

高分辨率熔解曲线分析法检测胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1基因突变

目的 采用高分辨率溶解曲线分析法检测胶质瘤中异柠檬酸脱氢酶1(IDHl)基因突变,探讨其应用于临床检测的可行性.方法 首先采用高分辨率溶解曲线分析法检测9例胶质瘤患者中IDH1基因·的突变情况,并以直接测序法对结果进行验证.结果 通过高分辨率熔解曲线分析法,确认9例胶质瘤患者中有6例发生了IDH1突变,其中5例为R132H(CGT＞ CAT),l例为R132C(CGT＞ TGT),其余检测均为野生型.经直接测序对以上9例标本进行验证,证实所有患者的突变情况与高分辨率熔解曲线分析法的结果一致.结论 应用高分辨率熔解曲线分析法检测临床样本IDH1突变与直接测序法比较具有操作简便、快速、结果准确的优点,适合在临床开展.     

重组质粒pEGFP-ING4的构建及其对MCF-7细胞凋亡的影响

目的检测ING4(inhibitor of growth 4)对MCF-7细胞凋亡的影响。方法从人胎盘总RNA中克隆人ING4基因,构建其真核表达质粒pEGFP-ING4转染MCF-7细胞表达ING4后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;荧光定量RT-PCR检测ING4、NF-κB、caspase-3、IL-8、Bcl-2及Bax基因的表达。结果构建的重组质粒转染可见目的蛋白融合表达,与对照相比MCF-7细胞凋亡率增高;ING4、caspase-3及IL-8基因的表达上调,NF-κB与Bcl-2/Bax基因的表达下调。结论成功从人胎盘组织克隆了ING4基因并构建其真核表达质粒在人MCF-7细胞中表达;ING4在人MCF-7细胞中能引起凋亡相关基因的改变并促进MCF-7细胞的凋亡,这为进一步研究ING4的抗肿瘤机制奠定了基础。     

木瓜凝乳蛋白酶对长春新碱杀伤鼠肝癌细胞hepa-6的促进作用

目的　测定木瓜凝乳蛋白酶与长春新碱 (VCR)联合使用对鼠肝癌细胞hepa - 6的细胞毒性作用。方法　实验分为 3组 :酶组、VCR组、酶 VCR组 ,在培养不同时间 ,3种不同浓度的酶与VCR单独或联合使用时 ,采用MTT法检测对鼠肝癌细胞hepa - 6的细胞毒性。同时分析培养时间对木瓜凝乳蛋白酶活力的影响。结果　木瓜凝乳蛋白酶对hepa - 6细胞的半抑制浓度 (IC50 )约为 1 2 0 0 μg/ml,随浓度的增加对细胞的抑制率增加。 3种不同浓度的酶 (5 0 ,1 0 ,2 μg/ml)与VCR(1 0 μg/ml)联合使用时 ,在细胞培养至 4 8h前 ,木瓜凝乳蛋白酶均能促进VCR杀伤鼠肝癌细胞hepa - 6 ;这个现象与酶在生理盐水中的活力变化是一致的。结论　木瓜凝乳蛋白酶对鼠肝癌细胞hepa - 6具有细胞毒作用 ,对长春新碱杀伤鼠肝癌细胞hepa - 6具有促进作用     

抗人尿道高分化鳞癌单抗E6及F9在上皮性肿瘤组织的表达及其意义

目的　探讨E6,F9在鳞癌和腺癌中的表达及其临床意义。方法　利用免疫组织化学链霉菌抗生素蛋白 -过氧化物酶 (SP)法检测 3例正常人组织 ,4 8例肿瘤患者组织 ,其中包括乳腺、胃、结肠、肺腺癌、阴茎、口腔、原癌、宫颈鳞癌各 6例。结果　正常组织呈阴性染色。肿瘤组织呈现细胞膜和细胞浆阳性着色 ,E6阳性表达率在鳞癌中为 91% (2 2 / 2 4 ) ,腺癌中为 88% (16 / 18) ,直肠癌为 83% (5 / 6 ) ,在肿瘤组织中综合表达率为 89% (4 3/ 4 8) ,F9阳性表达率在鳞癌中为 91% (2 2 / 2 4 ) ,腺癌中为 83% (15 / 18) ,直肠癌为 83% (5 / 6 ) ,在肿瘤组织中综合表达率为87% (4 2 / 4 8)。结论　单抗E6,F9具有比较强的特异性 ,其高效表达可用来判定鳞癌和腺癌的生物学行为 ,并为鳞癌和腺癌的预后提供依据。     

单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗的免疫研究

目的　构建新型单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗 ,鉴定其在哺乳细胞中的表达 ,检测其激发动物产生免疫反应的能力。方法　RT -PCR鉴定gD基因在COS - 7细胞中的表达 ,ELISA检测血清中中和抗体水平 ,用病毒攻击后检测其保护效率。结果　pVAX -gD能在COS- 7细胞中表达 ,并可激发免疫动物产生高滴度中和抗体 ,有效保护动物免受致死量病毒的攻击。结论　构建的新型单纯疱疹DNA疫苗是一株很有希望的人用生殖器疱疹疫苗     

胰岛素样生长因子及其Ⅰ型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的调控

目的 探讨胰岛素样生长因子及其I型受体抗体对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的调控和其可能机制. 方法 原位凋亡(TUNEL)法检测胰岛素样生长因子及其I型受体抗体单独或联合作用于SW-13细胞后细胞的凋亡的情况,同时观察细胞形态及数量的变化. 结果 各组细胞凋亡率比较有显著统计学差异(P<0.001),其中1单用IGF-I组或IGF-Ⅱ组细胞凋亡率低于空白对照组低于混合作用组低于单用anti-IGF-IR组.而单用IGF-I组和IGF-Ⅱ组、IGF-I anti-IGF-IR组和IGF-Ⅱ anti-IGF-IR组组间比较无统计学差异(P>0.05).加入antli-IGF-IR组细胞形态也发生了明显的变化.结论 胰岛素样生长因子可促进SW-13细胞株的生长,这与其抑制了细胞凋亡有关,而这种生物学作用是通过胰岛素样生长因子I型受体介导,胰岛素样生长因子I型受体抗体可明显抑制这种生物学作用,可能在肾上腺皮质癌的治疗中发挥重要作用.     

钙离子载体诱导HL-60细胞分化成树突状细胞的实验研究

目的 :探讨一种钙离子载体 (calciumionophore,CI)A2 3187,能否诱导早幼粒白血病细胞株HL 6 0分化成具有活性的树突状细胞 (dendriticcells,DCs)。方法 :将生长状态良好的HL 6 0细胞分别加在普通培养液中 ,或在含不同浓度 (2 5～ 16 0 0 μg/L)的A2 3187及 10 0 μg/L重组人粒 /单集落刺激因子 (rhGM CSF)的普通培养液中培养。 2 4～ 96h后 ,在光镜及电镜下观察细胞的形态 ;用流式细胞仪检测细胞的表面标志 ,MTT比色法检测其刺激同种异体T细胞增殖的作用。结果 :HL 6 0细胞以适量 (2 0 0 μg/L)的A2 3187诱导 2 4h ,DC的特征性表面标志CD83分子的表达最高 ,72h可出现典型的树突状突起 ,96h细胞表面CD80 (B7.1)、CD86 (B7.2 )、MHC II分子及细胞间黏附分子CD5 4的表达最高 ,且能明显激活同种异体T细胞。结论 :钙离子载体A2 3187可将HL 6 0细胞诱导成具有活性的DC样细胞。