EGFP Kallikrein重组真核表达载体的构建及其在兔内皮祖细胞中的表达

目的：构建携带人组织激肽释放酶（tHK）基因，以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因的重组真核表达载体,并导入内皮祖细胞(EPCs)中表达，验证tHK基因修饰EPCs用于血管病治疗的可行性。方法：PCR扩增tHK目的基因，将该全长基因定向克隆至真核表达载体pEGFP N3上，构建重组质粒载体。并利用脂质体转染体外培养的EPCs，在活细胞状态下用荧光显微镜直接观察tHK EGFP融合蛋白在细胞中的表达；用RT PCR 方法验证tHK在mRNA水平的表达；用ELISA方法验证tHK蛋白水平的表达。结果：酶切和测序证实pEGFP Kallikrein重组质粒构建正确，重组质粒载体在EPCs 中获得了表达,表达的融合蛋白具有tHK 和EGFP 的双重活性。结论：通过基因克隆方法成功构建了pEGFP Kallikrein重组质粒载体，并且在EPCs 中稳定表达，为进一步研究tHK基因修饰EPCs双重治疗血管病的技术策略奠定了基础。     

重组人白细胞介素15表达载体的构建及其在大肠杆菌中的高效表达

目的 :获得重组人白细胞介素 1 5 (rhIL 1 5 )高效表达菌株。方法 :经细菌脂多糖 +γ干扰素活化的人外周血单个核细胞提取细胞总RNA ,用RT PCR方法扩增出编码人IL 1 5cDNA的基因片段 ,采用 pBV2 2 0表达载体 ,经DNA重组技术构建IL 1 5基因工程菌。结果 :核酸序列测定与预期一致 ,所表达的IL 1 5经SDS PAGE证明分子量约 1 5kD ,表达量占菌体总蛋白的 2 8% ,经CTLl2 细胞检测 ,表达产物粗提物 1∶1 0 0复性后效价可达到1 0 6IU /ml。结论 :构建的基因工程菌为IL 1 5高效表达菌株。     

结核杆菌Ag85B DNA疫苗的制备及其免疫效应初探

将结核杆菌抗原Ａｇ85Ｂ基因克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ3中 ,构建成重组ｐｃＤＮＡ3 Ａｇ85Ｂ ,作为抗结核的ＤＮＡ疫苗 ,观察其对小鼠免疫应答的能力 ,为进一步研制抗结核疫苗提供依据。1 结核杆菌抗原Ａｇ85Ｂ真核表达载体的构建及在Ｃｏｓ 7细胞中的瞬时表达 :由本室构建的重组质粒ｐＵＣ1 8 Ａｇ85Ｂ ,经ＥｃｏＲⅠ /ＳａｌⅠ酶切 ,获得 860ｂｐＤＮＡ片段 ,插入经ＥｃｏＲⅠ /ＸｈｏⅠ酶切的载体ｐｃＤＮＡ3中 ,用ＨｉｎｄⅢ和ＸｈａⅠ酶切分析鉴定阳性克隆 ,获得表达载体ｐｃＤＮＡ3 Ａｇ85Ｂ。用 5μｇ纯化的重组质粒ｐｃＤＮ…     

脑胶质瘤IL-6/IL -6R 自分泌或旁分泌环路的存在及意义

 目的　研究脑胶质瘤中IL 6 /IL 6R自分泌或旁分泌环路的存在和意义。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测白细胞介素 6 (IL 6 )和IL 6受体 (IL 6R)基因在脑胶质瘤细胞株、脑胶质瘤组织标本和正常人脑胶质细胞中的表达。结果　 2株脑胶质瘤细胞株均有IL 6和IL 6R的表达 ,5 2例脑胶质瘤组织标本中有 38例 (73.1% )表达IL 6、4 4例 (84 .6 % )表达IL 6R、33例 (6 3.5 % )同时表达IL 6和IL 6R。人脑正常胶质细胞仅有IL 6基因弱表达 ,而无IL 6R表达。结论　脑胶质瘤可能存在IL 6 /IL 6R自分泌或旁分泌环路 ,此环路与肿瘤的恶性增殖有关。     

重组人白细胞介素15工程菌高密度发酵条件探讨

目的研究表达重组人白细胞介素15(rhIL-15)工程菌高密度发酵的条件。方法采用发酵罐发酵,对影响工程菌生长和目的蛋白质表达的因素进行优化。结果以甘油为碳源可明显抑制有害物质乙酸的积累,提高工程菌的表达量和收获率。高密度发酵明显提高了目的蛋白质的表达量和工程菌的产量。结论该发酵工艺大大提高了rhIL-15工程菌的产量和表达水平,为rhIL-15的规模化生产打下了基础。     

蜂胶提取物对肿瘤化疗药物减毒作用的实验与临床研究

目的：探讨蜂胶提取物抗肿瘤及减轻化疗药物毒性的作用。方法：通过整体动物实验,将昆明小鼠移植S180肉瘤,观察蜂胶提取物抑制肿瘤作用及与化疗药物合用时的协同及减毒作用。结果：蜂胶提取物的抑瘤率为27．74％,与环磷酸胺合用的抑癌率为50．32％,比单用蜂胶提取物及环磷酸胺分别提高22．58％和9．03％（P＜0．05）,并能减轻环磷酰胺所致的骨髓造血功能抑制,使血液白细胞维持在正常水平（P＜0．01）。结论：蜂胶提取物与环磷酰胺合用有协同抗肿瘤作用,并能减轻肿瘤化疗药物的毒副作用。     

心肝宝胶囊对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用

目的 研究心肝宝胶囊对阿霉素肾病大鼠的肾脏保护作用。     

携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定

目的:构建携带人血管内皮生长因子(VEGF)165基因的重组腺病毒载体。方法:应用EcoRⅠ和XbaⅠ酶切质粒PDC-VEGF和PDC315,连接DNA目的片段后转化大肠杆菌DH5α构建重组质粒PDC315-VEGF,对重组质粒进行酶切分析和测序鉴定。通过脂质体将质粒PDC315-VEGF与质粒pBHGE3共转染293细胞获取重组腺病毒,以重组腺病毒DNA为模板,PCR鉴定构建的重组腺病毒。扩增、浓缩纯化重组腺病毒,微量滴定法测定腺病毒滴度。结果:通过连接反应构建重组质粒PDC315-VEGF,酶切分析和测序证明构建正确。经细胞内同源重组构建携带人VEGF165基因的重组腺病毒,PCR扩增421bpVEGF165片段,证实VEGF165基因成功克隆到复制缺陷型腺病毒载体,腺病毒滴度为5.0×109pfu/mL。结论:通过双质粒细胞同源重组,生产携带人VEGF165基因的重组腺病毒,为动物试验奠定基础。     

非经典hla Ⅰ类分子(hla-g和hla-e)在人肿瘤细胞系的表达及ifn-γ的调节作用

目的探讨非经典hlaⅠ类分子在人肿瘤细胞系的表达及ifn-γ的调节作用。方法用rt-pcr法检测12种肿瘤细胞系和人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织标本hla-g和hla-emrna的表达。结果人脑胶质瘤组织及妊娠妇女滋养层组织均有hla-g和hla-emrna的表达;12株肿瘤细胞中仅人t细胞淋巴瘤karpas存在hla-g3的mrna表达,经ifn-γ处理后,karpas出现hla-g1/g5和hla-g2/g4的表达,宫颈癌hela细胞、黑色素瘤m21细胞和膀胱癌t24细胞出现hla-g3mrna的表达;12株肿瘤细胞中有9株表达hla-emrna。结论肿瘤存在hla-g和hla-emrna的表达,ifn-γ可促进hla-gmrna的表达。肿瘤细胞hla-g和hla-e的表达可能是肿瘤逃避免疫系统监视的机制之一。     

压力容量超负荷大鼠模型右心室重塑过程中细胞间质的改变

目的：通过人工套接大鼠右侧颈动静脉，造成左向右分流，导致大鼠右心室压力容量负荷增加，从多个不同层面研究大鼠右心室重塑过程中细胞间质的变化。方法：设4个实验组与4个对照组，每组10只体重、性别相匹配的近交系Wistar大鼠。实验组无菌手术套接大鼠右侧颈总动脉与颈外静脉，造成左向右分流，于术后1、2、4、8周分别测定动物体重(BW)，右心室与左心室加室间隔质量之比［R/(L+S)］及右心室质量与体重之比(RV mg/BW g)；右心室组织切片，普通光镜下观察组织学的改变，并利用计算机形态学分析软件分析细胞与间质的改变；提取右心室心肌组织中mRNA，应用RT PCR法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、纤维结合素Ⅰ基因表达量的变化。对照组手术操作同试验组，唯不套接动静脉，同样条件饲养。结果：术后第1周开始，试验组大鼠右心室压力即明显高于对照组，术后第1、2、4、8周之间相比，无统计学意义。试验组大鼠（RV mg/BW g）在术后8周时有统计学意义（0.64±0.05 vs 0.43±0.03，P＜0.01）; R/(L+S)至第8周时也有类似变化（0.36±0.04 vs 0.21±0.02，P＜0.05 ）；所有试验大鼠均未发生心衰现象，与对照组相比，Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达量在第1、4、8周时改变不明显，第2周时有统计学意义(Ⅰ型胶原：0.93±0.18 vs 0.79±0.07，P＜0.05；Ⅲ型胶原：0.43±0.07 vs 0.36±0.07，P＜0.05。平均光密度法)。纤维结合素Ⅰ第1周时即可检测到mRNA表达量升高，与对照组相比有统计学意义（0.26±0.06 vs 0.20±0.05，P＜0.05）；第2、4、8周时与对照相比无统计学差异。结论：①压力容量负荷改变能够引起大鼠右心室的重塑，包括心肌细胞和细胞周围基质，不同的改变可以有不同的时间特征，并和右心室压力有明显相关性；②反映细胞周围基质改变的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维结合素Ⅰ基因在改变的早期出现明显改变，说明右心室重塑是机体对外界环境改变积极适应的结果。