131^I-FIAU在不同载体介导的HSV1-tk转导心肌细胞中的实验研究

目的为以单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因（HSV1-tk）为报告基因的核素心脏显像寻找合适的载体并提供依据。方法以胶原酶单次消化法获得乳鼠原代心肌细胞，分别应用重组腺病毒Ad5-HSV1-tk（Ad5-tk）和脂质体lipofectamine^TM2000包裹的重组质粒pDC316-tk（pDC316-tk／lipoplex）将报告基因HSV1-tk转导入细胞，以空载体腺病毒作为对照；采用Iodogen固相氧化法对特异性报告探针氟-碘阿糖呋喃基脲嘧啶（FIAU）进行131^I标记，经Sep-Pak C18反相色谱层析柱纯化后，测定标记物的标记率和放化纯；比较各组细胞对131^I-FIAU的摄取情况，并应用半定量反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫细胞化学方法，在mRNA和蛋白质水平检测不同载体介导HSV1-tk转导心肌细胞后HSV1-tk的表达。结果131^I-FIAU的标记率为（53．82±2．05）％，放化纯为（94．85±1．76）％，标记物在体外稳定存在；转导后5h，Ad5-tk感染组和pDC316-tk／lipoplex转染组对131^I-FIAU的摄取率分别为（12．55±0．37）％、（2．09±0．34）％，且各时间点摄取率前者均明显高于后者（t=12．978～38．253，P均〈0．01）；2种载体介导心肌细胞转导后24h，RT—PCR即可检测到HSV1-tk mRNA的表达，且Ad5-tk感染组的表达水平明显高于pDC316-tk／lipoplex转染组（3．11±0．14与1．60±0．05，t=17．663，P〈0．01）；免疫细胞化学检测中二者阳性率分别为（81．70±0．40）％、（22．06±0．32）％，差异有统计学意义（t=23．237，P〈0．01）。结论腺病毒载体介导HSV1-tk感染心肌细胞的效率和对标记探针的摄取率均明显高于脂质体介导组，其可做为活体报告基因心脏显像的载体，可得到更为清晰的显像图。     

人膜联蛋白Ⅴ的表达及核素标记

目的 构建人膜联蛋白Ⅴ（Annexin Ⅴ）表达载体并诱导其表达．应用双功能螫合剂联肼尼克酰胺（HYNIC）偶联后应用核素^99mTc标记。方法PCR扩增含Annexin Ⅴ编码基因序列．将扩增产物克隆至His融合表达载体pET-28a（＋）．以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导His融合Annexin Ⅴ的表达．应用Ni-NTA Superflow纯化并经测序、SDS-PAGE及Western blot确证。表达的蛋白通过HYNIC偶联后进行^99mTc标记，考察标记物的特性。结果琼脂糖凝胶电泳示PCR扩增产物碱基数量与目的片段大小一致。对重组质粒的分析表明，插入片段的序列与发表的Annexin Ⅴ基因编码序列一致。在IPTG诱导下．经Western blot及SDS-PAGE证实，重组大肠埃希菌DH5α高效表达分子母约36kD的目的产物。…99mTc-HYNIC-Annexin Ⅴ标记率及放化纯均达到90％以上，稳定性在6h以上．可以满足核素显像的要求。结论 人Annexin Ⅴ编码序列已被克隆至His融合表达载体pET-28a（＋）上．并在大肠埃希菌DH5α中高败、大量表达。经HYNIC偶联后^99mTc标记．可以得到较高的标记率和放化纯。^99mTc-HYNIC-Annexin Ⅴ有望成为一种行良好临床应用前景的凋亡显像剂。     

利用报告基因rNIS监测大鼠骨髓间充质干细胞移植大鼠心肌的可行性研究

Objective To investigate the feasibility of rat sodium/iodide symporter (rNIS) as a reporter gene monitoring rat bone marrow mesenchymal cells (rBMSC) transplanted to rat myocardium in vivo.Methods Recombinated adenovirus vector was constructed by rNIS/enhanced green fluorescence protein (EGFP) (Ad-rNIS/EGFP).rBMSC transfected by Ad-rNIS/EGFP were studied using fluorescence microscope.Fifteen rats were transplanted with rBMSC and randomly divided into three groups:rNIS group (with rNIS transfection), blocked group (with rNIS transfection) by oral intake of perchloric sodium before planar imaging(GE Millennium MPR SPECT), and control group (without rNIS transfection).All rats underwent 99Tcm-pertechnetate planar imaging.The biological distribution of 99Tcm-pertechnetate was studied.The expressions of rNIS gene and protein in myocardium were measured by real time polymerase chain reaction (PCR) and western blot, respectively.The expressions of CD29, CD44, CD90, CD11b, CD34 and CD45 were measured by immunohistochemistry.Results rBMSC transfected by Ad-rNIS/EGFP showed EGFP expression under fluorescence microscope.The transplanted rat myocardium could be visualized on 99Tcm-pertechnetate planar imaging in rNIS group.The relative uptake ratio( Rheart/Rhmb, RUR) was 6.7 ±0.4.RUR in control group (3.0 ±0.2) was lower than that in rNIS group (t =2.78, P=0.03).The percentage injection dose per gram of tissue (% ID/g) of the transplanted myocardium was 60.2 ± 20.8 in rNIS group,which was higher than that (2.5 ± 0.4) % ID/g of control group ( t = 7.13, P＜0.001 ).rNIS gene and protein were highly expressed in transplanted myocardium in rNIS group but less expressed in control group.The expressions of CD29, CD44 and CD90 were positive, CD45 and CD45 negative CD11b mildly positive in the myocardium transplanted with infective rBMSC.Conclusion rNIS can efficiently monitor rBMSC transplanted to rat myocardium.     

金纳米颗粒在急性心肌梗死诊疗中的应用

金纳米颗粒是一种由金构成的纳米材料,它具有生物相容性、导电性、抗氧化性等优点.在急性心肌梗死诊疗方面,基于金纳米颗粒的研究已获得显著进展,如可用作递送载体降低心肌梗死标志物水平、改善损伤的心肌结构及参与心脏组织工程支架材料的构建等.     

PET／CT 在恶性淋巴瘤疗效评估中的应用

恶性淋巴瘤是全球增长最迅速的恶性肿瘤之一,发病率每年以4％～5％的速度增长。北京市卫生局2012年发布的白皮书显示,北京市淋巴瘤发病率从2001年的4．37例／10万人上升至2010年的9．13例／10万人,增幅超过1倍。最新的全国调查数据显示,中国淋巴瘤发病率女性上升至第11位,2011年全国淋巴瘤发病率已达到6．43例／10万。淋巴瘤分型复杂,按照《WHO淋巴系统肿瘤病理分类标准》,目前已知淋巴瘤有近70种病理类型,大体可分为霍奇金淋巴瘤（HL,约占10％）和非霍奇金淋巴瘤（NHL,约占90％）两类。     

人工智能在PET/CT恶性肿瘤疗效预测和预后评估中的应用

PET在恶性肿瘤的诊断、治疗和预后评估等方面都起着重要作用。人工智能是利用计算机和先进技术模拟人类智能行为和批判性思维的科学领域, 其中机器学习和深度学习在医学中的应用最为广泛。大量可用数据及算法和计算能力的进步使人工智能在图像分析领域中发挥越来越重要的作用。该文综述了目前人工智能在PET/CT恶性肿瘤预测和预后中的应用研究, 并提出了该领域目前面临的挑战以及对未来的展望。     

99Tcm标记抗VEGF多肽ATWLPPR及其在正常小鼠体内生物学分布

血管内皮生长因子(VEGF)及其受体在肿瘤血管生成过程中发挥关键作用,已成为肿瘤诊断与治疗中一个新的靶向目标.丙氨酸-苏氨酸-色氨酸-亮氨酸-亮氨酸-精氨酸(Ala-Thr-Trp-Leu-Pro-Pro-Arg,ATWLPPR)是从随机噬菌体随机七肽库构建的合成肽库中筛选出来的小肽,能阻断VEGF与细胞表面受体的结合[1].故探讨ATWLPPR的锝标记方法以及标记物在正常小鼠体内的分布,对研究恶性肿瘤的早期、特异性诊断有积极的意义.