脂质体介导E1A-TK基因转染人肺腺癌细胞A549体外研究

目的用脂质体转染真核表达质粒PcDNA3E1A-TK人人肺腺癌细胞A549,观察丙氧鸟苷（GCV）、X射线及二者联合对转染细胞的体外杀伤作用。方法用阳离子脂质体介导真核表达质粒PcDNA3E1A-TK转染人肺腺癌细胞A549,PCR、RT—PCR方法分别检测转染细胞中E1A—TK基因DNA整合、mRNA表达。MTT法测不同浓度GCV、不同剂量X射线及一定剂量X线照射后再给一定量GCV对转染细胞的生长抑制率。结果PCR、RT-PCR结果表明转染细胞有E1A-TK基因整合、mRNA表达。根据IC50,转染细胞对GCV、X射线的敏感性分别比亲代细胞提高111．3倍和2．9倍,在作用相同时间后,GCV＋X线照射治疗对转染细胞的生长抑制作用比单纯GCV或X线治疗明显增强（P〈0．01）。结论脂质体介导外源基因E1A—TK成功转入人肺腺癌A549细胞并获得表达：转染细胞获得了对GCV和X线的敏感性,GCV和X线对转染细胞有协同杀伤作用。     

Effects of herpes simplex virus thymidine kinase/acyclovir system on growth of human pulmonary adenocarcinoma A549 cell line in vitro and in vivo

Objective: To observe the effect of anciclovir (ACV) treatment on tumors induced by inoculation of TK gene-transfected human pulmonary adenocarcinoma A549 cells in nude mice. Methods: A recombinant plasmid containing TK gene was constructed and transfected into A549 cells by electroporation. The sensitivity of the transgenic cells (A549-TK) to ACV was examined by MTT assay in vitro and for in vivo observation, inoculation of A549-TK and A-549 cells into nude mice was separately performed to induce tumor growth, the response of which to ACV treatment was observed, and the tumor tissues were pathologically examined. Results: A recombinant plasmid containing TK gene was successfully constructed and transfected into A549 cells. The sensitivity of A549-TK cells to ACV was 43 times higher than that of A549 cells. The tumors induced by A549-TK cells showed no significant increase in size after ACV treatment (P>0. 05) , and light microscopy revealed local tissue necrosis, karyoklasis, and nuclei disappearance.     

国产与进口环丙沙星治疗下呼吸道感染的疗效对比观察

目的:对比国产环丙沙星与进口环丙沙星治疗下呼吸道感染的疗效.方法:下呼吸道感染患者96例,按使用国产环丙沙星(商品名悉复欢,广州产)还是进口环丙沙星(商品名西普乐,德国产)治疗分为国产组和进口组,各48例.比较2组的疗效、细菌清除率、未清除菌株组成、体外药敏试验的敏感菌百分率及不良反应.结果:国产组和进口组的治疗总有效率、细菌清除率、体外药敏试验的敏感菌百分率分别为88%和90%、88%和88%、92%(37/40)和95%(40/42),比较差异均无统计学意义(P＞0.05);国产组与进口组未清除菌株比较、不良反应比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论:国产环丙沙星的治疗总有效率、细菌清除率、未清除菌株组成、体外药敏试验的敏感菌百分率及不良反应与进口环丙沙星基本一致,具有较好的疗效,不良反应轻,用于治疗下呼吸道感染安全、有效,且药物来源充足,值得临床推广使用.     

B超引导下细导管引流冲洗法在急性脓胸治疗中的应用

目的:探讨超声引导穿刺细导管置管引流局限性多脓腔脓胸的应用价值。方法:11例复杂性脓胸在B超引导下经皮穿刺细导管置入分隔脓腔,并行冲洗引流;经置管冲洗引流不畅者予以尿激酶脓腔内注入。结果:所有患者在B超引导下均1次置管成功;6例复杂性脓胸经细导管置入冲洗引流而治愈;5例置管冲洗引流不畅后经尿激酶脓腔内注入,3例引流改善而痊愈;另2例因广泛纤维化而行胸外科处理。其中,2例发生气胸,经一般处理后而吸收。结论:应用B超介入引导和细导管引流、冲洗,是安全、有效的手段;但堵管率较高,经注入尿激酶可促进脓腔引流;发生脓腔内广泛纤维化者宜胸外科处理。     

包裹E1A基因的纳米粒子制备及转染人肺腺癌细胞A549实验研究

目的制备包裹E1A基因（腺病毒早期表达基因）的纳米粒子,并观察其介导E1A基因转染人肺腺癌细胞A549的可行性和效率。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小。用制备的包裹DNA纳米粒子转染人肺腺癌细胞A549,并以阳离子脂质体为对照,用PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A基因DNA整合和mRNA表达。结果制备的纳米粒子粒径为150～280nm,包埋率为0.78%,体外释放约为22d;在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数较脂质体组多（P〈0.05）;PCR、RT-PCR结果表明纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因整合和mRNA表达。结论成功制备了纳米粒子,纳米粒子可携带外源基因进行基因转染。     

包裹E1A基因的纳米粒子制备及转染人肺腺癌细胞A549实验研究

目的制备包裹E1A基因（腺病毒早期表达基因）的纳米粒子,并观察其介导E1A基因转染人肺腺癌细胞A549的可行性和效率。方法应用聚乳酸聚乙醇酸共聚物和聚乙烯醇包载E1A基因,制备纳米级粒子混合物,检测其包埋率、体外释放情况及粒径大小。用制备的包裹DNA纳米粒子转染人肺腺癌细胞A549,并以阳离子脂质体为对照,用PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A基因DNA整合和mRNA表达。结果制备的纳米粒子粒径为150～280nm,包埋率为0.78%,体外释放约为22d;在转染相等质量的DNA情况下,纳米组所得克隆数较脂质体组多（P〈0.05）;PCR、RT-PCR结果表明纳米粒子和脂质体转染细胞均有E1A基因整合和mRNA表达。结论成功制备了纳米粒子,纳米粒子可携带外源基因进行基因转染。     

人抵抗素基因克隆和蛋白纯化

从人脂肪组织用RT PCR扩增抵抗素基因cDNA并测序 ,PCR产物亚克隆到T载体 ,再克隆到原核表达载体 ,表达质粒转化大肠杆菌并诱导表达 ,以Glutathin Sephrose 4B亲和层析柱纯化了目的融合蛋白。     

ACV治疗转TK基因人肺腺癌细胞A549裸鼠皮下成瘤的实验研究

目的 观察活体内转ＴＫ基因肺腺癌细胞对ＡＣＶ（无环鸟苷）的敏感性。方法 转ＴＫ基因肺腺癌细胞Ａ５４９－ＴＫ、亲代细胞Ａ５４９分别接种于裸鼠腹部皮下左右侧成瘤后,给予腹腔注射ＡＣＶ治疗２周,测量治疗前后肿瘤大小,并做病理观察。结果 Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤治疗前后体积增大不明显（Ｐ〉０．０５）;Ａ５４９细胞接种的肿瘤治疗后体积明显大于治疗前,光镜发现Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤有局部坏死,胞核裂     

旁观者效应在HSV1—TK／GCV杀灭肺癌细胞A549中的作用

目的 研究旁观者效应在ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤细胞中的作用。方法 转ＴＫ基因肺癌细胞Ａ５４９－ＴＫ与亲代细胞Ａ５４９分别以不同比例、高低密度混合培养,加５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用５ｄ,ＭＴＴ法测活。结果 当细胞以高密度接种（１０＾４／孔）,ＴＫ＾＋细胞占２０％就能观察到较对照细胞出现明显的生长抑制（Ｐ〈０．０５）,而细胞以低密度接种（１０＾３／孔）,ＴＫ＾＋细胞占５０％出现较对照细胞明显地生长抑制（Ｐ〈０．０５）。结论 旁观者效应在ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭瘤中起重要作用,且这一效应与细胞间密切接触有关。     

HSV1—TK／GCV系统对人肺腺癌细胞S549生物学特性的影响

目的 观察转ＴＫ基因肺癌细胞对丙氧鸟苷（ＧＣＶ）的敏感性及ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤机制。方法 观察转ＴＫ基因，转空载体Ａ５４９细胞（下分别简称Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９－ｐＬＸＳＮ）和Ａ５４９细胞形态学改变、生长增殖特性。ＧＣＶ对３种细胞生长抑制（ＭＴＴ法）。电镜、流式细胞仪观察Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９细胞经５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用３ｄ后细胞凋亡。结果 转基因细胞变为不规则，呈多角型，透亮度下降