子宫内膜异位症动物模型的建立及应用

子宫内膜异位症 (ｅｎｄｏｍｅｔｒｉｏｓｉｓ ,以下简称内异症 )是一种常见的良性妇科病变 ,多发于生育年龄妇女 ,是引起盆腔疼痛和不孕的主要原因之一。近年来 ,其发病率有明显上升趋势 ,迄今为止 ,关于内异症的真正发病机制并未最终阐明 ,一个主要原因是这种疾病仅发生于人类和灵长类动物 ,这严重限制了对该疾病的研究 ,因此 ,需要一种可在实验动物体内复制该病的方法。 192 2年Ｊａｃｏｂｓｏｎ首次建立了兔的内异症模型 ,是通过把子宫组织自体移植入腹腔制成 ,从而开创了内异症研究的新局面。内异症动物模型的制作主要基于子宫内膜种植…     

盆腔炎与不孕症

目的　了解慢性盆腔炎的病因 ,以及患盆腔炎后的病理变化及其与不孕的关系。方法根据病史和体征 ,并结合输卵管造影、腹腔镜检查对 5 5例我院收治的盆腔炎致不孕患者进行了分析。结果本组盆腔炎患者中 32例 (5 8% )人工流产 ;35例行腹腔镜检查发现输卵管淤曲充血 (2 9% )、盆腔粘连 (6 0 % )、输卵管卵巢包裹 (5 8% )、直肠窝封闭 (2 6 % ) ;31例输卵管造影发现双侧不通 2 4例 (77% )、单侧不通 7例 (2 3% )。结论从本组患者看 ,盆腔炎的病因 ,绝大多数与手术有关 ,盆腔炎引起盆腔粘连、输卵管扭曲、伞端粘连、积水等 ,造成输卵管不通、子宫及输卵管内膜损伤 ,导致不孕。     

子宫内膜异位症患者腹腔液血管内皮生长因子与内抑素的表达

目的探讨子宫内膜异位症(内异症)患者腹腔液中血管内皮生长因子(VEGF)和内抑素(ENS)在内异症血管生成调控机制中的作用。方法采用ELISA法检测50例内异症患者(Ⅰ~Ⅱ期26例、Ⅲ~Ⅳ期24例)和42例非内异症患者(对照组)腹腔液中VEGF和ENS的含量,分析二者浓度及其比值与内异症之间的关系。结果内异症组腹腔液VEGFENS浓度和VEGF/ENS比值均高于对照组(P<0.01);内异症患者中Ⅲ~Ⅳ期VEGF和ENS含量均高于Ⅰ~Ⅱ期(P<0.01)而VEGF/ENS比值前者则低于后者(P<0.01)。增殖期与分泌期比较,除内异症组VEGF水平前者高于后者外(P<0.05)对照组VEGF和两组ENS水平两期比较均无差异(P>0.05)。结论VEGF和ENS同时参与了内异症的血管生成调控而两者表达水平的失衡可能才是内异症发病的关键。     

胰岛素样生长因子-1与胰岛素样生长因子结合蛋白-1在妇产科临床应用的研究进展

1概述 胰岛素样生长因子系统(IGFs)包括IGF多肽(IGF-1、IGF-2)、两种IGF受体、6种胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP1～6)以及一组胰岛素样生长因子结合蛋白酶。IGF通过与其受体结合发挥其生物学效应，与IGFBP结合成无活性复合物存在，IGFBP具有延长循环水平的IGF、半衰期和稳定IGF血浓度的作用。IGFs中的IGF-1及IGFBP-1与妇产科的关系密切。     

Modulation of the Culture Supernatant of Decidual Cells with Exogenous Cytokines on Killing Activity of Natural Killer Cells in Early Pregnancy

Objective To investigate the important function of cytohines in early pregnancy and to provide basic and experimental evidence for understanding the mechanism of their action.Methods Add interferon-γ (IFN-γ) ,interleuhin-2(IL-2) , interleuhin-6(IL-6) andepidermal growth factor(EGF) to the confluent culturing decidual cells with three different concentrations and harvest the culture supernatant after 12, 24 and 48 h separately. Observe the effect of the supernatant on killing activity of NK cells with radioimmunological assay of ^51Cr immersion.Results The culture supernatant of decidual cells can promote the killing activity of NK cells in various degrees, and the effect is independent of the type, concentration and acting time of cytokines.Conclusion In normal pregnancy, decidual cytokine network is in a dynamic equilibri-um. Exogenous cytokines would be harm to normal pregnancy by interfering the equi-librium state, but the exact mechanism needs further study.     

克隆高鸟嘌呤与胞嘧啶含量大鼠bcl-2基因的编码序列*☆

背景：卵巢颗粒细胞的过度凋亡是诱发卵巢早衰的根本途径，bcl-2基因具有抗细胞凋亡的特性。但实验表明，大鼠bcl-2基因序列中鸟嘌呤与胞嘧啶含量高达60.6%，应用常规聚合酶链反应方法，无法扩增出此基因。 目的：拟克隆大鼠基因组中高鸟嘌呤与胞嘧啶含量的bcl-2基因编码序列。 设计、时间及地点：开放性实验，于2007-05/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成。 材料：Wistar大鼠购自中山大学实验动物中心生产供应部，大肠杆菌DH5α由中山大学分子医药生物学实验室保种，载体pMD18-T 购自TakaRa大连宝生物技术公司。 方法：采用改进的反转录-聚合酶链反应方法从大鼠脾脏组织中扩增出鸟嘌呤与胞嘧啶含量为60.6%的bcl-2 cDNA编码序列，将扩增产物克隆至pMD18-T载体中，用单菌活聚合酶链反应扩增快速鉴定DNA片段后进行序列分析。 主要观察指标：①大鼠bcl-2基因cDNA克隆与纯化。②bcl-2基因cDNA与pMD18-T载体的连接、转化、鉴定阳性克隆及测序结果。 结果：在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠bcl-2基因，DNA序列分析结果与Genebank中序列相比，同源性为99%。 结论：高鸟嘌呤与胞嘧啶含量基因的扩增属于困难聚合酶链反应，实验采用改进技术成功克隆了大鼠bcl-2基因，此技术也适用于其他富含鸟嘌呤与胞嘧啶的基因快速扩增。     

化疗同步应用丙氨瑞林对化疗所致卵巢功能损伤的影响

目的研究注射环磷酰胺(CTX)大鼠同时应用促性腺激素释放激素激动剂(GnRHa)对注射CTX大鼠的卵巢功能的影响。方法40只大鼠分为4组:正常对照组(10只),GnRHa组(10只),CTX组(10只),CTX GnRHa组(10只)分别接受生理盐水、CTX、GnRHa和CTX GnRHa注射。采用放射免疫分析法测定各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)浓度的变化。在停药时及停药后两周,每组各处死5只大鼠。观察卵巢重量、卵泡数量及卵泡直径的变化。结果停药后两周,联合治疗组大鼠的血清雌二醇和FSH浓度分别为(43.39±4.40)pg/ml与(3.48±0.16)mIU/ml;与正常对照组比较,差异无显著性(P>0.05);而CTX组大鼠血清雌二醇和FSH浓度分别为(26.97±5.58)pg/ml与(3.92±0.35)mIU/ml,与其余3组分别比较,差异均有显著性(P<0.05)。在停药时和停药后两周处死大鼠的卵巢中,CTX组卵泡总数最少,各组间比较,差异均有显著性(P<0.05)。结论注射CTX同时应用GnRHa能够减少CTX对大鼠的卵巢功能的损伤。     

青春期内异症难治病例1例

青春期子宫内膜异位症(内异症)发病率呈逐年上升趋势,保守性手术结合药物治疗可缓解症状,延缓复发和提高生育率[1]。我院收治的1例青春期内异症患者,经手术结合药物治疗,病情仍持续进展,现报道病例并分析诊治中的教训与经验。1病例报道患者,17岁,因痛经进行性加重2年,下腹剧痛5小时于1999年12月首次入院。患者1997年10月始出现经期腹痛,进行性加重,伴恶心、呕吐、低热,1998年7月在外院曾因“盆腔内异症Ⅳ期,双侧卵巢子宫内膜异位囊肿”而行“左附件切除加右侧卵巢囊肿剥除术”,术中吸出巧克力样液体约2500 ml。术后间断口服孕三烯酮9月。查…     

携带人bcl-2基因的慢病毒表达载体的构建及其在人原代卵巢颗粒细胞中的表达

目的 构建及鉴定bcl-2基因慢病毒表达载体,并观察在体外人卵巢原代颗粒细胞中的表达.方法 采用PCR技术从含有人bcl-2基因的质粒克隆模板pCMV-SPORT6钓取bcl-2基因,并将基因克隆到慢病毒载体表达质粒pGC-FU(含EGFP基因)中,构建慢病毒载体表达质粒pGC-FU-bcl-2,通过酶切、测序验证bcl-2基因后,将pGC-FU-bcl-2质粒和包装质粒pHelper1.0、pHelp-er2.0共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞.获得携带bcl-2基因和EGFP基因的重组慢病毒GC-FU-bcl-2,并转染靶细胞人卵巢原代颗粒细胞.通过检测标志蛋白增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和目的 蛋白bcl-2进一步验证pGC-FU-bcl-2在靶细胞中的表达.结果 (1)pGC-FU-bcl-2中携有正确的bcl-2基因,并能在人类细胞中表达;pGC-FU-bcl-2共转染包装细胞293T能产生重组病毒GC-FU-bcl-2;(2)目的 基因bcl-2能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞人卵巢原代颗粒细胞,并达到稳定的表达,荧光显微镜下能直接观察到GFP,Western blotting能检测到bcl-2蛋白在靶细胞中的表达.结论 成功构建了携带bcl-2基因的重组慢病毒载体,转染人卵巢原代颗粒细胞后能够稳定表达bcl-2基因,为进一步研究bcl-2的功能和细胞凋亡相关疾病的治疗奠定基础.     

BrdU,CFSE和GFP标记大鼠间充质干细胞的比较

目的:研究BrdU, CFSE和GFP作为大鼠间充质干细胞标记物的可行性. 方法: 分别用上述三种标记物标记大鼠间充质干细胞,检测即时、15和30 d的标记率,通过检测细胞周期、凋亡率和描绘生长曲线,来明确标记物对体外培养大鼠间充质干细胞生长特性的影响;通过流式细胞仪检测标记物对细胞表面标志(CD29, CD34, CD44, CD45)表达的影响. 结果: BrdU, CFSE, GFP的即时标记率为77.0%, 99.4%, 89.7%,1 mo后分别下降至51.9%, 77.5%, 82.9%. 三者对体外培养的大鼠间充质干细胞的生长特性和表面标志的表达均无明显影响. 结论: GFP, BrdU和CFSE均可以作为大鼠间充质干细胞的标记物.