表达IL-24基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞的抑制作用

目的 研究携带IL-24基因的溶瘤腺病毒对肝癌细胞抑制生长和转移的作用.方法 构建Ad.HS4.AFP.E1A/IL-24,病毒的复制由人甲胎蛋白启动子控制,携带IL-24基因.检测病毒在不同细胞系中的选择性复制,以及对高转移潜能人肝癌细胞系MHCC97-H的生长抑制、诱导凋亡和抑制转移能力(侵袭、运动、黏附)的作用.结果 Ad.HS4.AFP.E1A/IL-24在肝癌细胞SMMC-7721、Hep3B和MHCC97-H中选择性表达,而不影响正常肝细胞L02(P＜0.05).Ad.HS4.AFP.E1A/IL-24可明显抑制MHCC97-H细胞的增殖,诱导其凋亡,并抑制其体外运动、侵袭和黏附能力(P＜0.01).RT-PCR和明胶酶谱显示其抑制肝癌作用与抑制MMP-2的表达有关.结论 携带IL-24基因的溶瘤腺病毒能够选择性抑制肝癌细胞的增殖并抑制其转移.

Abstract：

Objective To investigate the selective oncolytic role and antitumor action of a novel recombinant adenovirus containing E1A and IL-24 on hepatocellular carcinoma cell(HCC). Methods The recombinant adenovirus expressing IL-24 (Ad. HS4. AFP. E1A/IL-24) was constructed by using modified human alpha-fetoprotein (HS4-AFP) promoter to drive adenovirus E1A gene and II-24 gene.Cell Counting Kit-8 were performed to test the selective cytotoxicity of the virus in hepatocellular carcinoma cell lines SMMC-7721, Hep3B, MHCC97-H and hepatocyte cell line L02 . The mRNA and protein expression of IL-24 gene were detected by RT-PCR and western blot. Cell growth curves and Annexin V/PI assay were used to study cell proliferation and apoptosis of MHCC97-H. The anti-metastatic effects of the recombinant adenovirus were evaluated in cell adhesion, migration, and cell motion. Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) expression was examined by RT-PCR and zymography.Results Selective replications of Ad. HS4. AFP. E1A/IL-24 adenovirus were observed in over expression AFP cell line MHCC97-H, a highly metastatic potential HCC cell line but not in hepatocyte cell line L02. The mRNA and protein of IL-24 were also over expressed in MHCC97-H. This recombinant adenovirus also showed the significant oncolytic action on MHCC97-H but not on L02 (P＜0. 05). Besides, the recombinant adenovirus significantly inhibited MHCC97-H metastatic potential such as cell adhesion, migration and invasion as well(P＜0.01). Conclusion The selective oncolytic adenovirus expressing E1A and II-24 has a selective antitumor effect and play an inhibitory role in metastasis of HCC.     

肝癌切除术后辅助化疗

本文综述复旦大学肝癌研究所及国外对肝癌术后辅助化疗的研究结果.术后辅助化疗利弊兼有.肝内存在微小癌者,术后辅助性肝动脉化疗栓塞可能有益.而对单个小肝癌、无肝内 播散证据,特别是合并严重肝硬化者,则不提倡术后辅助化疗.     

随机生存森林模型预测肝动脉化疗栓塞治疗肝细胞癌患者的预后

【摘要】【目的】应用随机生存森林算法研究影响肝动脉化疗栓塞（transcatheter arterial chemoembolization,TACE）治疗不能切除肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者的预后因素,并构建预后模型。【方法】回顾性地纳入2014年1月至2017年12月期间就诊于本中心的、且一线治疗为TACE的HCC患者,并按照7:3比例划分为训练集和验证集。根据患者的临床数据、实验室指标及随访生存数据,建立Cox比例风险模型和基于机器学习算法的随机生存森林模型,并评估两种模型的预测能力。本研究统计方法由R 4.1.2软件完成。【结果】共有636例符合入排标准的患者纳入本研究,训练集有445例患者,验证集有191例患者。肿瘤负荷（肿瘤数目（个）+肿瘤最大径（cm））、年龄、基线G-谷氨酰转肽酶水平、基线甲胎蛋白水平和白蛋白-胆红素分级是影响TACE治疗不能切除HCC患者的独立预后因素。Cox回归模型的训练集1年、3年、5年的受试者操作特征曲线下面积（area under the receiver operating characteristic curve,AUC）为0.782、0.796和0.791,验证集中为0.750、0.766和0.766。随机生存森林模型训练集1年、3年和5年AUC为0.896、0.894和0.875,验证集中为0.743、0.763和0.770。随机生存森林模型能将患者区分为预后好组和预后差组,二者生存期有显著差异。决策曲线示随机生存森林模型的净获益要优于Cox比例风险模型。【结论】随机生存森林模型是预测TACE治疗HCC患者预后的可靠工具。【关键词】随机生存森林,Cox比例风险回归,肝动脉化疗栓塞,肝细胞癌,预后模型     

原发性肝癌临床分期建议(试行)及可行性分析

我国肝癌多伴有肝硬化 ,肝硬化的程度必然影响肝癌的治疗方法的选择和预后的判断 ,有必要制定适合我国国情的肝癌临床分期〔1〕。为此我们根据肿瘤大小、数目、分布、血管侵犯、区域淋巴结侵犯、远处转移、肝功能的Ｃｈｉｌｄ Ｐｕｇｈ分级 ,对原发性肝癌进行临床分期。现就分期的可行性初步研究报道如下。对象和方法上海医科大学肝癌研究所 1991年 1995年间剖腹探查和病理证实的原发性肝癌病人 ,共 10 82名。男女之比为 1∶7;中位年龄 4 9岁 (12 78岁 ) ,平均肿瘤直径为 (7.9± 4 .79)ｃｍ ;甲胎蛋白阳性 (血清甲胎蛋白高于 2 0 μｇ …     

原发性肝癌根治切除后介入治疗对复发防治的疗效评价

目的 探讨原发性肝癌根治切除术后肝动脉介入综合治疗对肝昨发的防治效果。方法 根治术后定期复查肝功能、甲胎蛋白（ＡＦＰ）、Ｂ超、胸片等,于术后２个月按Ｓｅｌｄｉｎｇｅｒ法行肝动脉造影或碘化油ＣＴ检查,根据有无残癌分为两组;无残癌者为预防组,有残癌者为治疗组。预防组术后２个月和５个月分别行预防量的肝动脉化疗栓塞治疗,以观察复发率和生存期,治疗组按常规量行肝动脉化疗栓塞治疗,每２个月得１次以观察生存期。     

血管生成抑制剂TNP-470对肝癌组织VEGF表达的影响

ＮＰ 470对肿瘤生长和转移的抑制作用已较为肯定 ,我们的实验也证实ＴＮＰ 470能抑制裸鼠人肝癌的生长和转移[1] 。研究表明 ,ＴＮＰ 470的抗血管生成作用是通过抑制血管内皮细胞的增殖来实现的[2 ] 。ＶＥＧＦ是由肿瘤细胞分泌的一种生长因子 ,能促进血管内皮细胞增殖 ,从而在肿瘤血管生成中起重要作用。迄今 ,未见ＴＮＰ 470对体内癌组织ＶＥＧＦ表达影响的报道。我们利用高转移人肝癌裸鼠模型 (ＬＣＩ Ｄ2 0 ) ,通过逆转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ) ,检测了ＴＮＰ 470对肝癌组织ＶＥＧＦ表达的影响 ,旨在进一步揭示ＴＮＰ 470的抗血管生成作用…     

骨桥蛋白下游信号分子在肝细胞癌中的表达

目的 通过肝癌组织芯片检测骨桥蛋白(OPN)下游的信号蛋白,以确定其在肝癌组织中的信号传导途径.方法构建肝细胞癌组织芯片,用免疫组织化学染色法检测并分析OPN及其相关分子、整合素αV、CD44v6、磷酸化黏着斑激酶(p-FAK)、p-Src、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平及其关系.计数资料用卡方检验(或Fisher's确切概率法),各指标之间的相关性采用Spearman相关分析.结果OPN及其受体整合素αV、CD44v6和相关信号分子p-FAK、p-Src、Src、p-ERK、p-AKT在肝癌组织的表达水平均明显高于癌周正常肝组织(P＜0.05).FAK在肝癌和癌周组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).OPN的表达与整合素oV(P＜0.01)、p-ERK(P＜0.01)、CD44v6(P＜0.05)密切相关,与p-FAK、p-Src、p-AKT无相关性(P＞0.05).但p-FAK(P＜0.05)、p-Src(P＜0.01)和p-AKT(P＜0.05)均与OPN受体整合素αV密切相关,p-FAK还与OPN的受体CD44v6密切相关(P＜0.01).结论 OPN通过其受体整合素αV、CD44v6激活下游的丝裂原活化蛋白激酶途径以促进肝癌转移.

Abstract：

Objective Osteopontin (OPN) has close relationship with metastasis in hepatocellular carcinoma but its downstream signal pathways have not been well defined in hepatocellular carcinoma. The object of this study is to identify the associated signal pathways in human HCC tissues. Methods The expressions of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT were assayed using TMA analysis. The relationship of OPN with P-ERK, P-Src and P-AKT were explored and the role in HCC metastasis was analysed. Results The expression levels of OPN, intergrin α V, CD44v6, P-FAK, P-Src, Src, P-ERK and P-AKT in HCC tissue were significantly higher than that in normal tissue (P ＜ 0.05). No significant difference was found between the expression levels of FAK in HCC tissue and normal tissue (P ＞0.05). OPN expression was significantly associated with Integrin α v (P ＜ 0.01 ), CD44V6 (P ＜ 0.01) and P-ERK (P ＜ 0.05) but not with P-Stc, P-FAK and P-AKT (P ＞ 0.05). The expressions of P-FAK (P ＜ 0.05), P-Src (P ＜ 0.01) and P-AKT (P ＜ 0.05) were significantly associated with Integrin α v and the P-FAK expression was also significantly associated with CD44V6 (P ＜ 0.01). Conclusion OPN promotes HCC metastasis though Integrin α v/CD44V6/MAPK pathway in human HCC.     

转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型的建立

目的 建立稳定有效的转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型.方法 采用56只BALB/C-nu/nu裸小鼠,建立转移性人肝癌裸小鼠原位种植模型;随机分为2组,移植瘤术后2周进行肝动脉结扎(HAL)组和仅开腹为假手术组.两组中各随机抽出6只裸鼠,在2次手术后2 d利用哌莫硝唑(PimoIlidazole)作为乏氧探针行肝脏移植瘤标本免疫组织化学显色和Western blot检测移植瘤组织中乏氧诱导因子(HIF)-1α蛋白的表达.结果 人肝癌裸小鼠原位种植成瘤率为100.0%(56/56);HAL手术成功率达93.3%(28/30);与假手术组比较,HAL组移植瘤内乏氧细胞(Pimonidazole阳性细胞)显著增加(P＜0.05),移植瘤组织HIF-1α蛋白表达升高(P＜0.05).结论 转移性人肝癌裸小鼠原位种植合并肝动脉结扎模型手术成功率高,能够导致肝脏移植瘤有效乏氧,是一种较理想的研究肝动脉断流对人肝癌生物学特性影响的实验模型.     

原发性肝癌临床分期之推荐意见

恶性肿瘤的分期对于选择治疗方案、估计预后及评价疗效至关重要。国际抗癌联盟(UICC)多年来一直定期发布各种恶性肿瘤的TNM分期方案,其中T代表肿瘤、N为荷瘤器官之区域淋巴结、M则代表远处转移。TNM分期方案的基础是病理组织学检查,所以需在手术后依病理组织学检查结果予以确定,原发性肝癌能作手术治疗的机会不多、故常难以判定TNM分期,从临床工作的需要来看,很有必要有一个临床分期方案供临床医师掌握应用。1977年全国肝癌防治协作会议上,曾有一个将肝癌分为Ⅰ～Ⅲ期的分期方案。Ⅰ期即早期或亚临床期,指无肝癌症状与体征的肝癌,Ⅲ期为晚期,指有黄疸、腹水、肝外转移或恶液质的肝癌,而合乎二者之间的为Ⅱ期。这一方案简单明了,甚易掌握,惜乎过于简略,尤其是Ⅱ期跨度太大,同期之中病情相差甚远,故实有修订之必要。 1998年及1999年我们在中国抗癌协会肝癌专业委员会召开的大连和成都会议上皆曾分别提出过肝癌临床分期的建议,现将在成都会议上提出的分期建议介绍如表1所示。     

关于肝癌诊断与分期标准的讨论

原发性肝癌（下称肝癌）是我国常见的恶性肿瘤。肝癌的诊断,尤其是早期诊断,多依赖各种辅助检查。为了规范诊断程序和便于非专科医师掌握,有必要制订一个诊断标准。肝癌是一个进行性发展的疾病,不同的病期所采取的治疗方案不同,预后亦不相同,所以亦应有一个关于分期的标准。１９７７年由笔者等提出的一个肝癌诊断及分型分期标准在全国肝癌防治研究协作会议上通过,被国内广大医务工作者采用。１９９０年编著《全国恶性肿瘤诊治规范》及１９９７年编著《新编恶性肿瘤诊治规范》时虽有少数文字上的改动,但基本内容延用至今已二十余年。…