SEA基因修饰抑制小鼠恶性黑素瘤B16细胞肺转移

超抗原 (superantigen)是一组细菌或病毒编码的新型蛋白质分子,它以完整的蛋白质分子形式分别直接与抗原提呈细胞(APC)膜上MHCⅡ类分子抗原结合槽外侧及T细胞表面抗原识别受体TCRVβ区直接结合,不需要APC处理,即可激活比普通抗原多达数千乃至数万倍的T淋巴细胞,并促使活化的T细胞分泌多种足量的细胞因子如TNF-α、TNF-β、TNF-γ、IL-2、IL-6等,产生强烈的抗肿瘤免疫效应,直接或间接地杀伤肿瘤细胞[1～3].作为超抗原的一种,金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal-enterotoxin A,SEA)近年来受到国内外学者广泛关注,大量研究表明[2,4],SEA在肿瘤的导向免疫治疗中具有巨大的潜力和良好的应用前景.本研究通过用SEA对小鼠黑素瘤细胞B16进行修饰,实现了抗肿瘤效果作用,现将结果报告如下.     

抗人肿瘤坏死因子α嵌合抗体的研制

目的：研制抗人肿瘤坏死因子(rTNF—α)嵌合抗体。方法：以具有中和TNF—α活性的鼠源性单抗(Z12)的轻、重链可变区基因，构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体，并转染COS7细胞。用RT—PCR、ELISA、免疫印迹及体外中和rTNF—α活性实验，分别对瞬时表达的抗rTNF—α嵌合抗体(CZ12)的细胞培养上清进行检测：结果：①瞬时转染后，细胞系经RT—PCR检测有人—鼠嵌合抗体mRNA的转录：②ELISA和Western blot检测表明，CZ12与TNF—α产牛特异性反应，并识别相对分子质量(Mr)为17000的TNF—α。③竞争抑制实验中，CZ12能竞争抑制Z12与rTNF—α的特异惟结合，④体外中和实验汪实，CZ12能中和TNF—α对L929细胞的毒性。结论：成功地研制具有中和活性的人—鼠嵌合抗体CZ12。     

肿瘤化疗患者行PICC的健康教育

随着肿瘤发病率逐年增高，接受治疗的患者也不断增加，在接受治疗的过程中，化疗是肿瘤治疗的方法之一。为了更好地配合PICC置管的开展，提高置管成功率，笔者自2006年3月至今对在我科住院治疗的，需要进行PICC置管的患者进行了健康教育。术前、术中的健康教育，有利于导管置入操作顺利完成，术后及出院的健康教育可使患者在行PICC导管后，主动协助保护好导管，而且对延长置管的使用时间，最大限度地发挥其作用，减少并发症的发生具有重要意义。     

靶向肿瘤血管的抗体免疫治疗

肿瘤细胞引起多样性和易突变性很难直接用药物治疗, 并且肿瘤细胞的耐药性也已成为治疗的一个瓶颈.靶向肿瘤血管的抗体治疗通过靶向实体肿瘤内血管内皮细胞生长增殖的相关靶点, 切断肿瘤细胞的营养供应从而达到治疗肿瘤的目的.本文中总结了近年来世界各国已上市或处于临床阶段及实验室阶段的靶向肿瘤血管抗体药物, 并阐述了该治疗策略的特点及部分抗体药物的作用机制, 提出目前存在的问题和相关解决方法, 为靶向肿瘤血管的抗体治疗研究提供一定的参考.     

用于肿瘤基因治疗载体的肿瘤特异性配体研究进展

肿瘤靶向基因治疗的主要目的是用靶向性的载体将治疗基因靶向传递到肿瘤细胞。本文综述了3类用于肿瘤靶向基因治疗载体的肿瘤特异性配体：天然分子、单克隆抗体和靶向性多肽，以及由它们修饰的载体系统用于靶向性肿瘤基因治疗的研究进展。     

肌肉注射CTLA4-FasL重组腺相关病毒抑制大鼠关节炎的实验研究

目的观察CTLA4-FasL融合基因能否有效抑制大鼠关节炎。方法在动物造模免疫第2天,以肌肉注射方式导入CTLA4-FasL和EGFP(对照)重组腺相关病毒(rAAV),持续观察和测量2组动物的临床指标包括关节指数、踝关节厚度和体质量等,并对踝关节的组织学表现如滑膜增生和炎性细胞浸润等进行了检测。结果应用大鼠佐剂诱导关节炎动物模型,明确了重组AAV病毒可介导目的基因CTLA4-FasL于体内表达;与rAAV.EGFP对照组相比,rAAV.CTLA4-FasL处理组在临床学和组织学表现上均有效抑制了大鼠关节炎。结论 CTLA4-FasL融合分子很可能是具有潜在研究价值的类风湿性关节炎治疗分子。     

人G250真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

目的构建人G250真核表达载体,建立稳定表达人G250的小鼠黑色素瘤细胞系。方法采用PCR方法扩增出人G250基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo-sig中,并加入酶切位点和FLAG标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-sig-FLAG-G250。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。RT-PCR及免疫荧光检测人G250在B16细胞中的表达。结果经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-sig-FLAG-G250重组质粒构建正确,最终建立的表达人G250基因的B16细胞系阳性率接近100%。结论成功构建了真核表达载体pIRES-neo-sig-FLAG-G250,建立的稳定转染人G250小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达G250基因。该稳定转染细胞系的建立为G250在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。     

L1（ORF1）基因通过编码和非编码RNA表达对细胞增殖的影响

目的探索L1（ORF1）基因过量表达对细胞增殖的影响。方法 PCR方法制备L1（ORF1）全长以及5＇端不同截短的天然序列以及各种突变体,构建真核重组表达载体,利用脂质体方法瞬时转染HEK293细胞,Western印迹方法验证蛋白表达,利用活细胞计数试剂盒（CCK-8）进行细胞增殖能力分析。结果过表达天然全长蛋白[L1（ORF1）]的重组体能明显促进细胞增殖,终止密码位于第109个氨基酸位置的全长序列重组体[L1（ORF1）109]对细胞增殖同样具有非常明显的促进作用,但仅含有氨基端109个氨基酸的基因片段的重组体对细胞增殖没有促进作用。另外,终止密码位于其他位置的全长序列重组体[L1（ORF1）48,终止突变在第48个氨基酸位置]以及含有多处突变的全长序列重组体[L1（ORF1）m]对细胞的增殖也未见有显著影响。结论 L1（ORF1）全长序列编码蛋白具有显著地促进细胞增殖作用,同时在特殊位点含有终止突变的全长序列转录产物对细胞的增殖也具有显著促进作用,L1（ORF1）全长序列可能通过其编码的蛋白以及非编码RNA两种形式对细胞增殖进行调控,位于序列中的关键位点在此过程中起着重要的作用,为探索L1（ORF1）序列在细胞增殖中的调控机制奠定了基础。     

人hCGβ真核表达载体的构建及稳定转染B16细胞系的建立

目的:构建人hCGβ真核表达载体,稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,建立稳定表达人hCGβ的小鼠黑色素瘤细胞系。方法:采用PCR方法扩增出人hCGβ全长基因的cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pIRES-neo中,并加入酶切位点和6×His标签,得到重组表达质粒pIRES-neo-hCGβ-(His)6。利用阳离子脂质体介导法将其稳定转染入小鼠黑色素瘤B16细胞,经G418加压筛选出阳性克隆。RT-PCR、Westernblot及免疫荧光检测人hCGβ在B16细胞中的表达。结果:经限制性内切酶鉴定及序列分析,pIRES-neo-hCGβ-(His)6重组体构建正确,最终建立的表达人hCGβ基因的B16细胞系阳性率高于90%。结论:成功构建了真核表达载体pIRES-neo-hCGβ-(His)6,建立的稳定转染人hCGβ小鼠黑色素瘤细胞系能够高效表达hCGβ基因。该稳定转染细胞系的建立为进一步研究人hCGβ抗肿瘤基因疫苗的功能提供了良好的实验基础,为hCGβ在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了研究基础。     

草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3的构建表达及其免疫不育的研究

目的:构建草原兔尾鼠卵透明带3 DNA疫苗pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3进行小鼠的黏膜免疫,增强该疫苗的免疫不育效果.方法:将两种佐剂分子大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基和C3d基因通过酶切鉴定,构建重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3 d3,采用RT-PCR和Western blot技术,检测其在mRNA和蛋白水平的表达,并通过肌肉注射、滴鼻和灌服3种途径免疫雌性C57BL/6小鼠,通过ELISA检测抗体水平及分型.结果:酶切鉴定,RT-PCR和Western blot 结果表明重组质粒构建正确并可在mRNA和蛋白水平的表达,ELISA结果表明以重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3免疫诱导的特异性IgG、IgA的水平明显高于对照组(P＜0.01)o抗生育实验表明该疫苗免疫的小鼠平均生仔数与对照组相比差异极显著(P＜0.01).结论:构建的草原兔尾鼠卵透明带3DNA疫苗重组质粒pVAX1-sig-LTB-IZP3-C3d3可高效地激发小鼠特异性免疫应答,提高抗生育的效果.