SARS病毒不同基因区抗原与SARS患者血清反应性的研究

目的研制非典型肺炎病毒(SARS病毒)不同基因区抗原,探讨SARS病毒感染机体不同基因区抗体免疫应答。方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,运用计算机抗原表位预测技术,筛选4种SARS病毒主要抗原表位。合成抗原表位基因,克隆到表达载体pBVILl,在E．coli中表达S蛋白和N-蛋白,E-蛋白和M-蛋白为合成肽。结果用SARS病毒编码的S(Spike)蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白分别与46份SARS患者恢复血清反应,检测血清中IgG抗体,结果S蛋白、N-蛋白、E-蛋白和M-蛋白检出率分别为71．7％(33／46),89．13％(41／46),30．43％(14／46),52．17％(24／46)。结论感染SARS病毒病人血清中S蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白的免疫应答有显著差异。     

人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

目的 构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28 a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性.结果 重组表达载体经BamH Ⅰ和HindⅢ鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)24000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90％.Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性.结论 成功构建了原核表达载体pET28 a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性.     

4-1BB体外刺激的T淋巴细胞抑制小鼠黑色素瘤的作用

目的 探讨4—1BB体外刺激下小鼠T淋巴细胞的增殖情况及对小鼠黑色素瘤的抑瘤效果．方法：在IL-2＋CD3＋CD28基础上,增加4—1BB为刺激条件,体外培养经诱导的小鼠腹股沟淋巴结T细胞,MTT法检测其体外增殖率,并建立小鼠黑色素瘤实验模型,观察所诱导T淋巴细胞的抑瘤效果．结果：增加4—1BB后,T淋巴细胞的增殖率明显增加[（1．15±0．08）％协（0．57±0．06）％,P〈0．01],将所诱导的T淋巴细胞注入小鼠模型,其肺转移灶数目明显减少[（93±6）vs（151±22）,P〈0．01],生存率提高,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．01）．结论：4—1BB在体外可促进T淋巴细胞的增殖,并具有较强的抗黑色素瘤作用．     

小鼠VEGFR2胞外1-4IgG样结构域的原核表达、纯化及活性鉴定

目的获得小鼠血管内皮生长因子Ⅱ型受体（mVEGFR2）胞外1-4IgG 样结构域融合蛋白并验证其免疫原性及生物活
性。方法利用RT-PCR法从孕龄14 d的Balb/c小鼠胚胎组织中扩增mVEGFR2D1-4基因,测序正确后将其克隆至原核表达载
体pET-42a,构建重组质粒pET-42a-mVEGFR2D1-4。将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析,
目的蛋白用Western blotting鉴定后,亲和层析法纯化融合蛋白,ELISA法检测纯化蛋白的抗原活性,并通过体外细胞培养检测
该融合蛋白对血管内皮生长因子（VEGF）促人脐静脉内皮细胞（HUVEC）增殖的阻断作用。结果测序结果证实成功扩增出目
的基因mVEGFR2D1-4;酶切和测序结果证实pET-42a-mVEGFR2D1-4 原核表达载体构建成功;转化后可以成功诱导并纯化
出大小与预期一致的蛋白;Western blotting 证实纯化的蛋白能与特异性抗体发生反应;ELISA 检测显示纯化后的
mVEGFR2D1-4融合蛋白具有免疫原性,并且体外细胞培养试验证实其能阻断VEGF对HUVEC的促增殖作用。结论成功获
得mVEGFR2D1-4/GST融合蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性及生物活性,为进一步研究以VEGFR2为靶点的抗肿瘤主动免
疫治疗奠定了基础。
     

电穿孔技术对DNA疫苗pVAX-tG250FcGB免疫效果的影响

目的探讨应用电穿孔技术对DNA 疫苗pVAX-tG250FcGB 免疫效果的影响。方法构建肾癌DNA 疫苗pVAXtG250FcGB,
通过体内电穿孔技术或普通肌肉注射途径,将DNA疫苗导入到BALB/c小鼠体内,探讨电穿孔免疫途径诱导抗原
特异性免疫应答的效果。结果电穿孔技术或普通肌肉注射均能在小鼠体内诱导出抗原特异性的体液免疫应答和细胞免疫应
答,电穿孔技术的免疫效果明显优于普通肌肉注射途径。结论电穿孔技术介导的DNA疫苗pVAX-tG250FcGB免疫具有较强
的诱导免疫应答的能力,是研究DNA疫苗pVAX-tG250FcGB免疫效果的一种有效途径。
     

NMM抗肿瘤治疗性DNA疫苗中卡那霉素残留量检测方法的建立与验证

建立并验证检测NMM抗肿瘤DNA疫苗中卡那霉素残留量的方法。采用间接竞争ELISA方法检测卡那霉素残留量,采用四参数Logstic曲线进行回归分析,并对本方法的专属性、检测限、定量限、线性与范围、精密度、准确度、耐用性等进行验证,验证方法有效后对多批次样品进行检测。使用该方法检测卡那霉素残留量时,样品无需稀释,辅料、质粒DNA对卡那霉素的检测无干扰;本方法检测限为0.15 ng/mL;定量限为0.5 ng/mL;在0.5～40.5 ng/mL范围内线性关系良好,且符合四参数方程式：y=D+(A-D)/[1+(x/C)^B],R²≥0.999;在检测线性范围内加入不同浓度的卡那霉素对照溶液,回收率均值在95%～115%之间(n=12,RSD=6.20%);本方法重复性试验中卡那霉素含量RSD值为4.22%(n=6),中间精密度试验中DNA疫苗中卡那霉素含量RSD值为10.95%。本方法检测实验条件发生微小变动时(不同人员、不同批次试剂盒、不同酶标仪),对测定结果的影响在可接受范围内。应用该方法对7批样品中卡那霉素残留量进行检测,结果表明,每个人用...     

复制型DNA疫苗的研究进展

复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗，既具有稳定性好、安全性高的优点，又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。     

结核疫苗研究进展

卡介苗(BCG)的免疫保护作用存在争议,多重耐药结核杆菌(MDR-TB)的出现,以及艾滋病(AIDS)的流行,导致结核病(TB)的发病率呈现回升趋势,给TB防治提出了新的挑战.因此,发展新的TB疫苗成为TB防治的迫切需要.本文综述结核疫苗研究的最新进展.     

噻托溴铵干粉剂吸入对急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者肺部感染BODE指数的影响

目的研究噻托溴铵干粉剂吸入对急性加重期慢性阻塞性肺疾病(AECOPD)患者肺部感染BODE指数的影响。方法纳入解放军总医院第四医学中心2016年3月至2019年3月80例AECOPD患者作为研究对象,采用随机数字表法将患者分为观察组和对照组,每组40例。两组均行常规治疗,观察组加用噻托溴铵干粉剂。比较两组总体治疗效果,记录两组治疗前后BODE指数。出院随访半年,记录肺部感染发生率,分析BODE指数判断肺部感染的价值。结果观察组总有效率为97.5%,对照组为90%,两组总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后两组FEV1%pred和6MWT较治疗前均显著升高,MMRC和BODE指数评分较治疗前均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后观察组FEV1%pred和6MWT均高于对照组,MMRC和BODE指数评分均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。两组治疗前后BMI比较,差异无统计学意义[治疗前:(21.85±2.02)kg/m 2 vs.(21.76±2.21)kg/m 2;治疗后:(22.07±1.85)kg/m 2 vs.(22.13±1.97)kg/m 2,P>0.05]。观察组肺部感染发生率低于对照组,差异有统计学意义(5.00%vs.22.50%,P<0.05)。ROC分析显示,BODE指数判断肺部感染的AUC为0.733(β=0.086,95%CI:0.563~0.902,P=0.014)。结论噻托溴铵干粉吸入剂用于AECOPD患者有助于降低BODE指数水平,监测BODE指数有助于预测肺部感染,指导临床。     

恩度联合化疗治疗多种晚期恶性肿瘤的护理

<正>我科于2008年7月～2009年12月采用恩度联合化疗治疗32例晚期恶性肿瘤患者,经过精心护理,取得满意效果。现将护理体会报告如下。