过表达Sprouty2分子促进HEK293T细胞增殖与存活北大核心CSCD

目的构建表达人Sprouty 2(SPRY2)基因的重组表达载体pDC315/hSPRY2,转染人胚肾(HEK)293T细胞表达目的蛋白,初步探讨其对HEK293T细胞增殖与存活的影响。方法构建hSPRY2重组腺病毒表达载体,体外转染HEK293T细胞,以Western blot法检测目的蛋白的表达,以CCK-8法检测SPRY2对HEK293T细胞增殖或去血清条件下细胞存活的影响。结果成功构建重组表达载体pDC315/hSPRY2,在转染的HEK293T细胞中检测到目的蛋白hSPRY2的表达,转染pDC315/hSPRY2组HEK293T细胞的增殖率及存活率均明显高于对照组即转染pDC315/EGFP组(P<0.05)。结论成功构建了hSPRY2重组表达载体,过表达hSPRY2可促进HEK293T细胞的增殖与存活。     

提高树突状细胞腺病毒感染效率的融合蛋白的表达及活性鉴定北大核心CSCD

目的构建表达靶向树突状细胞融合蛋白CT40L的原核表达载体,在大肠杆菌中表达,并对CT40L融合蛋白进行纯化鉴定及功能验证。方法从GenBank上查找柯萨奇病毒和腺病毒受体(CAR)、T4噬菌体fibritin和小鼠CD40L的基因序列,并将其主要功能区域连接形成拼接序列;序列进行原核表达密码子优化后将其克隆至原核表达载体pET42a(+),构建重组表达载体pET42a-CT40L,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达CT40L/GST融合蛋白,并采用GST琼脂糖凝胶纯化重组蛋白。纯化后的重组蛋白经Western blot法、间接ELISA鉴定其免疫活性。结果重组表达载体经NcoⅠ和EcoRⅠ酶切鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)78 000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90%。Western blot法和ELISA检测证实纯化的CT40L分子能够与特异性抗体及相应受体发生反应,表明该融合蛋白具有良好的免疫学活性。结论成功构建了原核表达载体pET42a-CT40L,利用大肠杆菌表达系统实现了融合分子的可溶性表达,纯化后CT40L融合蛋白经检测具备较高的免疫学活性。     

稳定表达人G250基因小鼠renca细胞株的建立

目的建立能够稳定表达人G250基因的renca细胞株。方法采用PCR扩增出人G250基因编码区长度的互补序列,根据DNA重组技术定向插入到pIRES-neo真核表达载体中,得到重组表达质粒pIRES-neo-G250。用阳离子脂质体介导法将该质粒稳定转染到renca小鼠细胞中,通过调整G418的浓度筛选出阳性的克隆,蛋白免疫印迹和免疫荧光测试验证人G250基因转染小鼠renca细胞株后的表达情况。结果经过限制性内切酶鉴定和序列分析发现pIRES-neo-G250重组质粒构建正确,蛋白免疫印迹结果表明,可以从稳定转染pIRES-neo-G250的小鼠renca细胞中检测到G250的蛋白条带,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测结果表明,稳定转染pIRES-neo-G250的renca细胞用人的G250特异性抗体检测到有高效的荧光表达。结论成功建立了稳定、高效表达pIRES-neo-G250分子的人G250基因renca细胞株,为后续的肾癌疫苗研究奠定了基础。     

口腔癌患者术后1周的护理

口腔癌的手术创伤大,在术后应立即开始反复测量血压、呼吸、体温、意识状态等的生命体征。一般患者术后采取仰卧或半卧位,有呼吸道狭窄时,吸除分泌物或同时给予祛痰药;必要时施行气管插管和切开。在患者清醒前给氧,补充液体、测量尿量,尿量在30ml/h 以下时给予利尿剂,将尿量提高到50ml/h 以上。一般术后第三天停止输液。患者补充营养需经口或鼻饲。术后要观察创口的色泽变化,早期发现血肿、坏死和感染。在拆线之前每天要换药1次。通过术后持续引流的措施来达到血液和渗出液的吸除,以此来预防皮瓣密贴和死腔的形成,减少术后并发症及偶发症的出现。术后护理要点口腔癌患者的年龄一般比较大,易引起营养不良、并发症等,而影响术后的全身状态,因此要有一个严格的术前、术后护理。(1)有语言功能、咀嚼、吞咽障碍的患者,往往不能充     

PICC置管引起机械性静脉炎的护理

目的:为肿瘤化疗患者建立良好的静脉通路,减少PICC置管引起的机械性静脉炎,提高癌症患者生活质量。方法:选择2004年3月~2007年3月,158例接受PICC置管术化疗的患者,对PICC置管术引起的机械性静脉炎进行观察。结果:14例发生机械性静脉炎,发生率8.86%(14/158)。结论:为避免肿瘤患者留置PICC导管引起的静脉炎,应早发现,及时进行护理干预和对症处理,最大限度地减少或减轻不良反应的发生,使患者顺利完成化疗,提高生活质量。     

SARS冠状病毒S蛋白表位合成肽抗原性的研究

目的　研究SARS病毒合成肽疫苗。方法　根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质 ,选择了SARS病毒编码的spike蛋白抗原表位蛋白质序列 ,运用计算机抗原表位预测技术 ,筛选抗原表位 ,以合成肽抗原表位。通过对SARS病人血清进行筛选确定与血清高交叉反应的 3个短肽 ,再合成多重抗原肽 (multipleantigenicpeptide ,MAP) ,与KLH偶联后免疫小鼠。结果　筛选的 3条与SARS病人血清反应强的肽 ,免疫小鼠均产生了高效价的抗体。结论　以合成肽为免疫原研究SARS病毒肽疫苗有着广阔前景。     

肾癌相关基因的研究进展

肾癌(renalcellcarcinoma, RCC)是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一, 其发病率约占全身恶性肿瘤的 3%。近年来全世界的发病率呈明显增高的趋势, 每年死于肾癌者近1×105 例 [1]。肾癌对放、化疗均不敏感, 临床上一般采用肾癌根治性切除术, 但是一旦出现淋巴结转移, 即使行根治性淋巴结清扫术, 患者生存期也极少超过 5年, 若出现肝、肺转移或邻近脏器浸润则预后更差, 因此转移性肾癌的临床治疗陷入困境。最近几年, 遗传学研究表明肾癌是多基因相关肿瘤, 发病机制复杂, 病程发生发展的分子生物学基础至今不明, 为此, 鉴定并克隆出肾癌…     

锁骨下静脉留置导管置换术的临床应用

锁骨下静脉置管已被临床广泛使用。如何延长导管留置时间,以最大限度地发挥其作用,减少病人的痛苦,保证治疗的正常进行是我们护理上一直探索的问题。自2006年11月至今,我科先后为15例病人进行了导管置换术。现报告如下。1临床资料与方法     

SARS病毒不同基因区抗原与SARS患者血清反应性的研究

目的研制非典型肺炎病毒(SARS病毒)不同基因区抗原,探讨SARS病毒感染机体不同基因区抗体免疫应答。方法根据目前已知SARS病毒的基因组序列及其编码的蛋白质,运用计算机抗原表位预测技术,筛选4种SARS病毒主要抗原表位。合成抗原表位基因,克隆到表达载体pBVILl,在E．coli中表达S蛋白和N-蛋白,E-蛋白和M-蛋白为合成肽。结果用SARS病毒编码的S(Spike)蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白分别与46份SARS患者恢复血清反应,检测血清中IgG抗体,结果S蛋白、N-蛋白、E-蛋白和M-蛋白检出率分别为71．7％(33／46),89．13％(41／46),30．43％(14／46),52．17％(24／46)。结论感染SARS病毒病人血清中S蛋白、M-蛋白、N-蛋白和E-蛋白的免疫应答有显著差异。     

人survivin蛋白的原核表达、纯化及抗原活性鉴定

目的 构建人肿瘤抗原survivin的原核表达载体,优化在大肠杆菌中的表达条件,并对survivin/His融合蛋白进行纯化和抗原活性鉴定.方法 设计针对survivin基因序列的特异引物,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增人survivin全长基因序列(538 bp)克隆至原核表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28 a-survivin,并将该载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达survivin/His融合蛋白,并采用Ni亲和层析凝胶纯化重组蛋白.纯化后的重组蛋白经Western blot法、ELISA鉴定其抗原活性.结果 重组表达载体经BamH Ⅰ和HindⅢ鉴定正确;IPTG诱导后经SDS-PAGE分析表明获得了相对分子质量(Mr)24000大小的重组蛋白;纯化后的蛋白纯度达到90％.Western blot法和ELISA检测证实纯化的survivin蛋白能够与特异性抗体发生反应,表明其具有良好的抗原活性.结论 成功构建了原核表达载体pET28 a-survivin,利用大肠杆菌表达系统实现了融合蛋白的可溶性表达并进行纯化,纯化后survivin蛋白经鉴定具备较高的抗原活性.