器官移植全国联网

随着免疫学和移植技术的进步,全世界用脑死亡者做器官移植已成为日常的医疗手段,但日本目前还是世界上不承认脑死亡的少数国家之一。美国的UNOS及欧洲的移植设施,已经实行移植医疗的各国都建立了完善的器官移植全国性的网络体系。这个体系所作的工作就是在适宜的条件下将供器官者的器官提供给接受移植者。事实证明因此体系的     

人源抗HBsAg dsFv抗体靶向干扰素重组质粒的构建与表达

目的构建抗体靶向干扰素的重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+,并在真核细胞中验证重组质粒的表达情况。方法通过重叠延伸PCR将dsFv抗体重链基因与带正电荷的DNA负载区基因融合,并在抗体轻链α干扰素融合基因3′端连入6×His标签。先在过渡载体pCI-GPI中实现轻、重链复合基因的连接,然后连入pEE14.1中,最终构建重组表达质粒pEE14.1-dsFvαpr+。将重组质粒LipofectamineTM2000瞬时转染到CHO-K1细胞,采用RT-PCR、ELISA和Western blotting方法验证目的基因的表达。结果重组质粒经酶切鉴定和测序验证与设计完全一致。RT-PCR结果显示只有重组质粒转染后的细胞能够扩增出1700bp的目的条带,ELISA检测瞬时转染细胞上清α干扰素的浓度约为1.1ng/ml,Western blotting检测显示重组质粒在转染细胞上清中获得表达。结论实现了抗体靶向干扰素在单一质粒中的高效表达,通过对表达蛋白的电性改造有利于后期治疗慢性乙肝的抗体靶向纳米粒药物的研制。     

锚定修饰的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI的构建及鉴定

目的为研究锚定修饰的rmCGβ-IgGFc-GPI的新功能和免疫治疗奠定基础。方法应用基因工程技术将pCI-IgGFc-GPI质粒经双酶切后,插入pcDNA3.1（＋）真核表达质粒,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-Ig-GFc-GPI,然后再插入经双酶切的恒河猴绒毛膜促性腺激素β亚基（rmCGβ亚基）,构建重组真核表达质粒pcD-NA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI,经限制内切酶酶切分析及测序鉴定正确后,用脂质体转染技术转染B16细胞,流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法检测B16细胞中表达的IgGFc段融合蛋白。结果酶切和测序证明正确构建了真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI,流式细胞仪技术和细胞免疫荧光法证实该质粒能在B16真核细胞中正确表达目的蛋白;建立了稳定的细胞株B16/pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI。结论锚定修饰的rmCGβ亚基的真核表达质粒pcDNA3.1（＋）-rmCGβ-IgGFc-GPI成功构建,且能在B16细胞内表达;为进一步研究锚定修饰的rmCGβ-IgGFc-GPI的新功能和免疫治疗奠定了基础。     

抗肝癌单链双功能抗体基因逆转录病毒表达载体的构建及包装

0　引言　人类基因治疗技术的迅速发展使越来越多针对先天性和获得性疾病的基因治疗方案进入临床试验 ,同时 ,逆转录病毒作为介导基因转染的载体也是目前基础和临床应用研究中最广泛使用的基因转移方法 [1 ] .迄今所掌握的研究资料表明 ,接受逆转录病毒介导基因治疗的患者中尚未发现因病毒感染导致的不良反应 .因此 ,我们选择改造的缺陷型逆转录病毒载体 p L XSN,将分泌型抗肝癌单链双功能抗体基因(s Fv- TNF-α)克隆至该载体 ,进行病毒包装并筛选具有高滴度感染性重组病毒产生细胞系的研究 .1　材料和方法1.1　材料　分泌型抗肝癌单链…     

抗肝癌单链双功能抗体融合绿色荧光蛋白表达载体的构建及表达

0　引言　肝癌恶性程度极高 ,在我国有着较高发病率和死亡率 ,迄今尚无理想的治疗手段 .随着现代分子生物学和免疫学的发展 ,基因工程抗体的诞生为肿瘤的诊断和治疗带来了希望 ,尤其是单链抗体的应用成为肿瘤免疫基因治疗的热点我们利用本室克隆的抗肝癌单链抗体 (s Fv)基因与人肿瘤坏死因子 (TNF- α)基因偶连 ,构建抗肝癌单链双功能抗体与绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)融合表达的真核表达载体 ,并在小鼠成纤维细胞 NIH3T3中表达了 s Fv-TNF- GFP融合蛋白 ,为肝癌免疫基因治疗的进一步研究奠定了基础 .1　材料和方…     

肝癌单克隆抗体HAb18及其F（ab′）_2、Fab片段在小鼠体内的药代动力学研究

作者对１３１Ｉ标记的抗人肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及Ｆ（ａｂ′）２、Ｆａｂ片段在小鼠体内的药代动力学进行研究。结果表明：（１）３种标记物的药代动力学模式有很大差异，完整抗体ＨＡｂ１８的清除过程符合开放一空模型，清除速率与注射剂量有关。按照剂量从高至低，其Ｔ１／２（整体排泄）分别为４８．０８ｈ、４２．６５ｈ、４０．５４ｈ；Ｔ１／２（血液清除）依次为６１．４２ｈ、４８．０７ｈ、４１．０３ｈ。（２）抗体片段的清除速率明显快于完整抗体，清除过程呈双相下降，符合二室模型。Ｆ（ａｂ′）。整体排泄的Ｔ１／２ａ为５．２９ｈ，Ｔ１／２β为３９．３７ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为４．２０ｈ，Ｔ１／２β为３４．６１ｈ。Ｆａｂ片段整体排泄的Ｔ１／２ａ为３．５１ｈ，Ｔ１／２β为２０．２２ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为１．３９ｈ，Ｔ１／２β为２４．３９ｈ。提示：完整抗体适用于肿瘤导向治疗，显像诊断则以抗体片段为佳。     

植骨空芯钉内固定粗隆间外展截骨治疗陈旧性股骨颈骨折

陈旧性股骨颈骨折是一种十分难治的骨折,尚无理想的方法能完全克服股骨颈骨折的特殊剪力。年龄较大者可行人工关节置换,但对于年龄较小者仍需进行保留自身股骨头的手术。自1990年9月～1997年10月,本文作者采用骨折端植骨,2枚空芯钉内固定,粗隆间外展截骨治疗陈旧性股骨颈骨折24例,效果良好,报道如下。 1 临床资料 1．1 一般资料 本组24例,男22例,女2例,年龄29～44岁,平均35．5岁;骨不连时间5～28个月,平均10个月。曾接受一次手术者18例。入院时病人X片均有不同程度的骨折端吸收、股骨颈短缩及髋内翻。 1．2 手术方法 采用Watson-Jones切口,在切口上部显露股骨颈骨折处,如果骨折对位不佳,则将骨折间隙处纤维组织除尽,尽可能将骨折解剖复位。如果骨折对位尚好,则不必显露骨折处。于股骨大粗隆向股骨颈穿入2枚φ6．5 mm空芯加压螺钉,使其分别位于股骨颈上1／3和下1／3处将骨折端固定。再于股骨粗隆间截骨,截除一底在外侧,尖端在小粗隆上方,角度约30度的楔形骨块,骨折端用钢板固定。植骨方法：①在骨折处直接开槽植骨(4例);②于截骨处的截骨面近端向股骨颈方向钻孔(或利用原固定物孔道)将骨植人孔道中(20例)。植入保留两侧皮质的髂骨并修成直径约1．0 cm长约6 cm骨条共18例,植入腓骨者有6例。     

HBsAb靶向干扰素和IL-12双表达质粒pVAX-HBVE的构建与应用

目的构建能同时表达HBsAb靶向干扰素(dsFvα)和人白细胞介素12(hIL-12)的新型基因治疗质粒pVAX-HBVE。方法将pEE14.1-dsFvα质粒双酶切获得dsFvα片段,克隆入经同样双酶切后的载体pVAX-IRES-hIL-12 IRES序列的上游,构建重组表达质粒命名为pVAX-HBVE。将重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,ELISA检测目的基因表达;提取重组质粒pVAXHBVE,注射到乙肝转基因小鼠腿部肌肉并采用电穿孔递送,定量PCR检测注射前后转入1.3拷贝HBV全基因组的BALB/c小鼠体内HBV基因拷贝数的变化。结果 pVAX-HBVE经酶切和测序分析与预期设计完全一致,显示重组质粒构建成功;ELISA检测显示dsFvα和IL-12基因在细胞上清中获得表达;注射重组质粒pVAX-HBVE 30μg仅1次即可使转基因小鼠体内的HBV基因拷贝数降低2个数量级。结论成功构建能够含有靶向干扰素(dsFvα)和hIL-12的双表达质粒,为慢性乙肝基因治疗提供新的策略。