大鼠CTLA4-FasL融合基因重组腺相关病毒载体的构建、制备及表达

目的检测大鼠CTLA4-FasL重组腺相关病毒载体感染大鼠关节炎性成纤维样滑膜细胞后目的基因的表达。方法构建大鼠CTLA4-FasL融合基因重组腺相关病毒载体,制备重组病毒,体外感染从佐剂诱导关节炎的大鼠关节中分离的炎性成纤维样滑膜细胞,利用Flag标签纯化目的蛋白,ELISA和Western blot等方法检测目的蛋白的表达。结果获得含有大鼠CTLA4-FasL融合基因的重组腺相关病毒,感染炎性成纤维样滑膜细胞后能够分泌性表达目的蛋白。结论构建并制备的CTLA4-FasL重组腺相关病毒能够有效感染炎性成纤维样滑膜细胞并促使期表达CTLA4-FasL融合蛋白,为今后关节炎治疗的体内实验研究奠定了基础。     

复制型DNA疫苗的研究进展

复制型DNA疫苗是基于常规DNA疫苗和RNA复制子疫苗的基础上发展起来的一种新型疫苗，既具有稳定性好、安全性高的优点，又实现了外源基因的高效表达。本文就复制型DNA疫苗的构建、作用机制、优点以及最新的研究进展作一简要综述。     

肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激研究

[目的]研究肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激的意义.[方法]以BCG和高聚生作为佐剂,用60Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激Balblc小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL-2、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB小鼠单克隆抗体,使之激活并增殖.应用苔盼蓝染色法计算细胞的增殖程度(TDLN T淋巴细胞);应用肿瘤肺转移动物模型观察激活后的TDLN T细胞的抗肿瘤效应;应用流式细胞仪检测TDLN T细胞经激活后胞内表达细胞因子水平的变化.[结果]多种单抗联合刺激TDLN T细胞在肾癌肺转移动物模型体内具有较强免疫活性,并产生明显抑瘤效应,抑瘤率达(68.8±4.3)%(P＜0.05).TDLN T细胞的数目也得到了增殖,其中含有IL-2、高聚生、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB单抗的实验组被激活的T淋巴细胞的数量较不含4-1BB单抗的其它实验组增加快,增殖倍数达229±19(P＜0.01).并且此组细胞内表达IFN-γ的水平也较其他实验组高,表达率达(48.23±5.1)%(P＜0.01).[结论]抗4-1BB单抗对激活后的TDLN T细胞中IFN-γ的表达水平的提高起关键作用.该研究为肾癌的肿瘤疫苗研制和体内治疗奠定了实验基础.