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抗人肿瘤坏死因子α嵌合抗体的研制 总被引:4,自引:1,他引:4
目的:研制抗人肿瘤坏死因子(rTNF—α)嵌合抗体。方法:以具有中和TNF—α活性的鼠源性单抗(Z12)的轻、重链可变区基因,构建人—鼠嵌合抗体基因的表达载体,并转染COS7细胞。用RT—PCR、ELISA、免疫印迹及体外中和rTNF—α活性实验,分别对瞬时表达的抗rTNF—α嵌合抗体(CZ12)的细胞培养上清进行检测:结果:①瞬时转染后,细胞系经RT—PCR检测有人—鼠嵌合抗体mRNA的转录:②ELISA和Western blot检测表明,CZ12与TNF—α产牛特异性反应,并识别相对分子质量(Mr)为17000的TNF—α。③竞争抑制实验中,CZ12能竞争抑制Z12与rTNF—α的特异惟结合,④体外中和实验汪实,CZ12能中和TNF—α对L929细胞的毒性。结论:成功地研制具有中和活性的人—鼠嵌合抗体CZ12。 相似文献
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[目的]研究肾癌细胞致敏小鼠淋巴结的体外刺激的意义.[方法]以BCG和高聚生作为佐剂,用60Co射线灭活的小鼠肾癌细胞Renca刺激Balblc小鼠腹股沟淋巴结,致敏后的淋巴结(tumor-draining lymph node,TDLN)T淋巴细胞在体外联合使用IL-2、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB小鼠单克隆抗体,使之激活并增殖.应用苔盼蓝染色法计算细胞的增殖程度(TDLN T淋巴细胞);应用肿瘤肺转移动物模型观察激活后的TDLN T细胞的抗肿瘤效应;应用流式细胞仪检测TDLN T细胞经激活后胞内表达细胞因子水平的变化.[结果]多种单抗联合刺激TDLN T细胞在肾癌肺转移动物模型体内具有较强免疫活性,并产生明显抑瘤效应,抑瘤率达(68.8±4.3)%(P<0.05).TDLN T细胞的数目也得到了增殖,其中含有IL-2、高聚生、抗CD3、抗CD28、抗4-1BB单抗的实验组被激活的T淋巴细胞的数量较不含4-1BB单抗的其它实验组增加快,增殖倍数达229±19(P<0.01).并且此组细胞内表达IFN-γ的水平也较其他实验组高,表达率达(48.23±5.1)%(P<0.01).[结论]抗4-1BB单抗对激活后的TDLN T细胞中IFN-γ的表达水平的提高起关键作用.该研究为肾癌的肿瘤疫苗研制和体内治疗奠定了实验基础. 相似文献