BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后VEGF受体胎肝激酶1表达的影响

目的研究BMSCs移植对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）后VEGF受体胎肝激酶1（fetal liver kinase 1，Flk-1）基因和蛋白表达的影响，探讨BMSCs移植修复大鼠SCI的机制。方法取4周龄雄性Wistar大鼠5只，体重100～120g，进行BMSCs分离及培养。取81只Wistar雌性大鼠，体重220～250g，采用改良Allen’s打击装置制备SCI模型，随机分为3组：假手术组（A组，n=21），仅咬除T8～10棘突和椎板；DMEM组（B组，n=30），SCI区周围注射DMEM；BMSCs组（C组，n=30），SCI区周围注射BMSCs。于移植术后1、3、5d，采用RT-PCR方法检测各组大鼠SCI区Flk-1基因表达的变化；于移植术后3、7、14d，免疫组织化学方法观察脊髓内Flk-1蛋白的表达。结果原代培养的BMSCs细胞形态多样，随着传代次数的增加，细胞形态逐渐趋于均一，多为扁平形和长梭形。RT-PCR结果显示，在移植术后1、3、5d，C组Flk-1 mRNA表达水平与B组比较差异无统计学意义（P〉0．05）；但B、C组与A组比较，Flk-1 mRNA表达于术后1d明显增加并达峰值（P〈0．01），术后3d下降（P〈0．0.01），至术后5d表达仍高于A组（P〈0．05）。免疫组织化学结果显示，移植术后3、7d，B组Flk-1蛋白表达较A组显著增加，差异有统计学意义（P〈0．01）；术后14d，A、B组Flk．1蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）；移植术后3d，B、C组Flk-1表达相似，差异无统计学意义（P〉0．05），移植术后7、14d，C组Flk-1表达明显高于B组（P〈0．0.01）。结论SCI后BMSCs移植对Flk-1 mRNA的表达无调节作用，但上调Flk-1蛋白的表达，是修复SCI的机制之一。     

缺氧诱导因子1α对人羊膜间充质干细胞耐受缺氧能力影响的实验研究北大核心CSCD

目的通过瞬时转染缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因,观察缺氧处理后人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)成活及凋亡情况,探讨HIF-1α对hAMSCs耐受缺氧能力的影响。方法取健康剖宫产产妇自愿捐赠的羊膜组织分离、培养hAMSCs,通过倒置相差显微镜观察细胞形态及免疫荧光法检测干细胞标志物OCT-4、NANOG表达,对培养细胞进行鉴定。取第3代hAMSCs进行缺氧处理(200μmol/L CoCl_2)后,按以下分组瞬时转染对应质粒:A组为hAMSCs空白组,B组为pcDNA3.1阴性对照组,C组为shRNA阴性对照组,D组为shRNA-HIF-1α干扰组,E组为pcDNA3.1-HIF-1α过表达组。缺氧处理后12、24、48 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测各组细胞成活率;24 h采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,并采用Western blot检测HIF-1α、VEGF、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl-2)、Bax、活化型半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3,C-Caspase-3)蛋白表达。结果 CCK-8法检测示,缺氧处理后各时间点与A、C组比较,D组细胞成活率明显降低(P<0.05);与A、B组比较,E组细胞成活率明显升高,其中24 h组间比较差异有统计学意义(P<0.05);E组内24 h时细胞成活率明显高于12、48 h时(P<0.05)。流式细胞仪检测示,与A、C组比较,D组细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与A、B组比较,E组细胞凋亡率明显降低(P<0.05)。Western blot检测示,与A、C组比较,D组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax、CCaspase-3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);而E组结果相反,与A、B组比较,E组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax、C-Caspase-3蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α基因过表达能够明显改善hAMSCs耐受缺氧能力,其机制可能与上调VEGF和Bcl-2表达及下调Bax和C-Caspase-3表达作用相关。     

高脂血症的危害及防治

高脂血症是体内脂类代谢紊乱导致血脂水平增高的一种疾病,并由此引发一系列临床病理表现的病症。大量研究表明高脂血症可引发许多疾病,与中风心肌梗死、心脏猝死、糖尿病、高血压、脂肪肝等的发病有着密切关系．是形成冠心病的主要因素之一。近年来,随着人们生活习惯特别是饮食习惯的改变等多种因素的影响,高脂血症的发病率有明显增高的趋势,而且本病引起的心脑血管疾病等往往发病率高,危害大,病情进展凶险。高脂血症正成为吞噬人类健康的隐形杀手。要避免高脂血症的危害主要有三大防治原则：改变饮食习惯,提倡科学合理的饮食结构：建立良好的生活习惯,提倡健康的生活方式;及时应用药物进行系统治疗。     

神经干细胞移植促进脊髓损伤后脑源性神经营养因子的表达

目的：探讨神经干细胞（NSCs）移植对大鼠脊髓损伤后脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响及其意义。方法：NSCs提取自新生Wistar大鼠的海马区,经培养、鉴定。制作大鼠脊髓损伤（SCI）模型,于伤后第7天移植NSCs。实验分为3组：NSCs移植组（A组）,DMEM填充组（B组）,正常对照组（C组）。应用RT—PCR法和免疫组化法观察细胞移植后BDNF基因表达的变化。结果：RT—PCR结果分析,移植术后第1、3、5天,A组BDNF mRNA的表达量明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。组化结果分析,移植术后第7、14、28天BDNF的表达量A组明显高于B组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：NSCs在移植后可上调脑源性神经营养因子BDNF基因的表达,是其修复脊髓损伤的机制之一。     

镁测定影响因素及在妊娠期测定的临床意义

目的血清镁的检测在妊娠期和产科疾病治疗和监测中具有重要临床意义,我们针对镁测定不稳定的影响因素进行观察和探讨。方法根据本实验室的实际情况（Ca、Mg、Fe为一常规的组合项目）对镁测定的影响因素进行了实验观察。结果影响镁的测定因素并非三个组合项目检测顺序的安排上有问题。结论血清镁的检测在妊娠期和产科疾病治疗和监测中具有重要临床意义,为了提高检测结果的准确性,镁测定影响因素要尽量去避免和解除。     

探讨凝血检验危急值用于重症新生儿病情预测的价值

目的对重症新生儿使用凝血检验危急值的病情预测价值进行探讨分析,为临床诊断和检验提供参考。方法 2016年1月至2018年12月我院对200例重症新生儿开展了分析研究,将其作为观察组,对凝血检验结果进行分析,对危急值(Fg低值、PT高值、APTT高值)进行评估,对有危急值的患儿进行治疗,对死亡率进行统计,将其和2013年1月至2015年12月没有进行凝血检验危急值的200例重症新生儿进行对比,将其作为对照组,对两组死亡率比较。结果观察组共有12例患儿死亡,占总数的6%,对照组有28例患儿死亡,占总数的14%。两组的死亡率对比存在统计学差异性(χ2=7.111,P=0.008)。观察组患儿机械通气时间,ICU监护时间,住院时间比对照组短,两组的结果存在统计学差异性(P0.05)。结论重症新生儿接受凝血检验危急值,能够对患儿的病情进行预测,及时的追踪病情,为患儿提供治疗,让患儿的预后情况得到改善,降低患儿的死亡率,临床中能够进行推广使用。     

缺氧诱导因子1α对人羊膜间充质干细胞耐受缺氧能力影响的实验研究

目的通过瞬时转染缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)基因,观察缺氧处理后人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)成活及凋亡情况,探讨HIF-1α对hAMSCs耐受缺氧能力的影响。方法取健康剖宫产产妇自愿捐赠的羊膜组织分离、培养hAMSCs,通过倒置相差显微镜观察细胞形态及免疫荧光法检测干细胞标志物OCT-4、NANOG表达,对培养细胞进行鉴定。取第3代hAMSCs进行缺氧处理(200μmol/L CoCl_2)后,按以下分组瞬时转染对应质粒:A组为hAMSCs空白组,B组为pcDNA3.1阴性对照组,C组为shRNA阴性对照组,D组为shRNA-HIF-1α干扰组,E组为pcDNA3.1-HIF-1α过表达组。缺氧处理后12、24、48 h采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测各组细胞成活率;24 h采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,并采用Western blot检测HIF-1α、VEGF、B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma2,Bcl-2)、Bax、活化型半胱天冬酶-3(cleaved Caspase-3,C-Caspase-3)蛋白表达。结果 CCK-8法检测示,缺氧处理后各时间点与A、C组比较,D组细胞成活率明显降低(P0.05);与A、B组比较,E组细胞成活率明显升高,其中24 h组间比较差异有统计学意义(P0.05);E组内24 h时细胞成活率明显高于12、48 h时(P0.05)。流式细胞仪检测示,与A、C组比较,D组细胞凋亡率明显升高(P0.05);与A、B组比较,E组细胞凋亡率明显降低(P0.05)。Western blot检测示,与A、C组比较,D组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显减少,Bax、CCaspase-3蛋白表达明显增加,差异有统计学意义(P0.05);而E组结果相反,与A、B组比较,E组细胞中HIF-1α、VEGF、Bcl-2蛋白表达明显增加,Bax、C-Caspase-3蛋白表达明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。结论 HIF-1α基因过表达能够明显改善hAMSCs耐受缺氧能力,其机制可能与上调VEGF和Bcl-2表达及下调Bax和C-Caspase-3表达作用相关。     

大鼠脊髓损伤后室管膜细胞增殖迁移及可塑性研究

[目的]研究大鼠脊髓损伤后室管膜细胞的原位增殖、迁移及其可塑性。[方法]Wistar大鼠60只，制作大鼠脊髓全横断损伤模型，根据伤后不同时间点分组，应用免疫组织化学方法动态检测脊髓内5-溴脱氧尿嘧啶（Brdu）、多唾液酸神经细胞黏附分子（PSA—NCAM）的表达。[结果]与对照组相比，Brdu阳性细胞在脊髓损伤后1d开始增加（P〈0．05），7d达到高峰，14d后开始下降，但仍高于对照组（P〈0．05）；PSA—NCAM阳性细胞在脊髓损伤后3d开始增加（P〈0．05），7d达到高峰，14d后开始下降，但仍高于对照组（P〈0．05）；两者在时间上均呈一过性增高表达，空间上自中心向周围迁移。[结论]脊髓损伤可激活自体室管膜细胞的原位增殖及迁移．后者具有一定的可甥性．参与伤后脊髓的结构修复。     

VEGF转染对骨髓基质细胞成骨功能的影响

[目的]将血管内皮生长因子121(vascular endothelial growth factor 121,VEGF121)基因转染兔骨髓基质细胞(rabbit bone marrow stroma cells,rMSCs)后,研究转染后细胞的成骨功能变化,为进一步利用经基因转染的rMSCs构建组织工程骨血管化打下基础.[方法]体外培养、扩增rMSCs,将其分为转染组和未转染组,脂质体介导下PCDI- VEGF121真核表达质粒转染rMSCs后,G- 418筛选阳性细胞克隆.通过RT - PCR法检测VEGF mRNA水平,通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Ⅰ型胶原检测来评价两组细胞的成骨能力.将阳性克隆细胞和未转染的细胞植入裸鼠股部肌袋内.分别于植入后4、8周处死动物,观察异位成骨情况.[结果]转染组和未转染组的ALP表达随着时间逐渐增强,转染组细胞内ALP水平显著增高,Ⅰ型胶原在转染组细胞内高表达,转染组的rMSCs植入肌袋后,随着植入时间的延长,出现骨髓腔样结构及大量骨小梁,表现出较好的异位成骨能力.[结论]应用VEGF121基因转染rMSCs后,有利于发挥VEGF121的血管化作用,促进rMSCs的成骨能力,将会成为组织工程骨血管化探索的方向.     

基于网络的PBL教学法在肿瘤科留学生见习教学中的应用研究

目的研究基于网络的以问题为基础的教学法(WPBL)在肿瘤科留学生见习教学中的应用价值。方法将2012级参加肿瘤科见习的学生100名作为研究对象,将其随机平均分成观察组和对照组。对照组应用传统教学法,观察组应用WPBL教学法,课后进行专业知识及学习能力考核和调查问卷,了解学生知识掌握、学习能力及对新教学方法的认可度。结果观察组在专业知识掌握、学习能力提高方面优于对照组,更加认可新的教学方法,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 WPBL教学法在留学生肿瘤科见习教学中效果较好。