靶向siRNA抑制TLR9表达对放射抗拒肺癌A549细胞辐射敏感性的影响

目的 旨在研究抑制放射抗拒肺癌A549的TLR9表达对其辐射敏感性的影响。方法 以放射抗拒肺癌A549（R-A549）细胞为研究对象,利用脂质体转染技术将靶向siRNA转染至R-A549细胞,Western blot验证;给予0、2、4、6和8 Gy X射线照射后,进行细胞克隆集落计数并绘制细胞存活曲线,经过单击多靶模型拟合,得到A549细胞、R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞照射的D₀、D_q、N值;对4组细胞增殖能力进行测定。对R-A549细胞、阴性siRNA转染细胞和TLR9 siRNA转染细胞X射线10 Gy照射前后流式细胞周期分析,进一步说明抑制TLR9表达对R-A549细胞辐射敏感性的影响。结果 TLR9 siRNA成功抑制R-A549细胞TLR9表达,照射后其细胞克隆形成率降低,与R-A549细胞的放射增敏比（SER_D0）达到1.37,而A549细胞与R-A549 细胞的SER_D0为1.09;照射后TLR9 siRNA转染细胞较R-A549细胞G₂/M期分布增加（t=4.323,P<0.05）,而TLR9 siRNA转染细胞G₁/G₀期分布少于R-A549细胞,差异有统计学意义（t=7.616,P<0.05）。结论 siRNA可以抑制TLR9表达,降低照射后R-A549细胞的克隆形成,提高放射增敏比;照射后更多细胞发生G₂/M期阻滞,同时G₁/G₀期细胞减少也有效抑制了照射后细胞潜在致死性损伤的修复,因此,具有辐射增敏的作用。     

沉默乙酰肝素酶联合那屈肝素对肺癌细胞的抑制作用及其机制

目的:研究慢病毒转染沉默乙酰肝素酶(HPA)联合那屈肝素(nadroparin)的协同抗肿瘤作用,并探讨其潜在的分子机制。方法:以肺癌A549细胞系为研究对象,探讨利用慢病毒介导沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后对A549细胞的影响。抑制试验共设6组,分别为空白对照组(A549细胞)、阴性对照组(转染阴性对照shRNA序列)、沉默HPA组(转染HPA shRNA)、空白对照+那屈肝素组、阴性对照+那屈肝素组和shRNA+那屈肝素联合组。分别采用CCK-8检测各组细胞活力,酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养液中转化生长因子(TGF-β1)含量,体外侵袭实验(transwell)检测各组细胞迁移和侵袭能力的差异,Western blot检测各组细胞TGF-β信号通路中主要蛋白TGF-β1、磷酸化Smad2/3、锌指E盒结合同源框1(ZEB-1)、锌指转录因子SNAIL、TWIST相关蛋白、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达情况。结果:通过慢病毒转染shRNA,成功建立了HPA沉默的A549细胞株。与2个对照组相比,各组细胞经沉默HPA和/或联合那屈肝素处理后,CCK-8检测结果显示,单独抑制HPA或那屈肝素处理可轻微抑制细胞活力,而联合处理会显著抑制细胞活力(P<0.05);单独处理后TGF-β1的表达减少(P均<0.05),联合组TGF-β1表达减少更显著(P<0.05);单独HPA沉默或那屈肝素均能抑制细胞迁移和侵袭能力,两者联合时效果更显著(P<0.05)。Western blot同样证实了HPA沉默或那屈肝素均可不同程度诱导TGF-β1、p-Smad2/3、ZEB-1、TWIST、SNAIL、N-cadherin和MMP-2表达下调(P均<0.05),E-cadherin表达上调(P<0.05),且联合处理组效果更显著(P<0.05)。结论:沉默HPA联合那屈肝素可显著抑制肺癌细胞侵袭和迁移,并上调E-cadherin表达。此过程可能与TGF-β1介导上皮细胞转化过程中关键转录因子ZEB-1、TWIST和SNAIL的抑制有关。     

附子提取物对肺癌A549细胞增殖抑制及放射增敏作用的研究

目的: 观察附子提取物对人肺癌A549细胞增殖及放射敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法: 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度附子提取物作用后细胞增殖情况,并选择IC₂₀(30μg/mL)作为后续实验浓度。集落形成实验检测A549细胞的存活分数,单机多靶模型拟合细胞存活曲线计算平均致死剂量(D₀)及放射增敏比(SER)。将细胞分为对照组、附子组、X射线照射组和附子处理后X射线照射组。对照组给予培养基,附子组给予30μg/mL附子提取物处理24 h,X射线照射组采用10 Gy的X射线照射,附子处理后X射线照射组先采用30μg/mL附子提取物处理24 h后,再给予10 Gy的X射线照射。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测细胞中Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果: CCK-8法检测结果显示,小于20μg/mL的附子提取物对A549细胞存活率有增强作用,但随着附子提取物浓度到达30μg/mL,开始对人肺癌A549细胞生长具有抑制作用,且与附子提取物浓度相关。集落形成实验结果提示附子处理后X射线照射组存活曲线起始处肩部稍窄,表明联用附子提取物后,引起细胞死亡所需的放疗剂量逐渐减小,X射线照射组和附子处理后X射线照射组D₀值分别为1.83和1.48 Gy,SER为1.24。流式细胞术检测结果提示附子处理后X射线照射组细胞凋亡率显著增加,高于附子组和X线照射组(P<0.05)。Western blot检测结果显示,附子组与X射线照射组较对照组细胞Bax蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平下降。附子处理后X射线照射组较对照组细胞Bax、Bcl-2蛋白含量变化更加显著(P<0.01)。结论: 30μg/mL的附子提取物对人肺癌A549细胞具有增殖抑制作用和放射增敏作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关。     

肺癌同期放化治疗中放射性肺损伤的相关因素分析

 目的 观察三维适形放疗联合同期化疗治疗局部晚期非小细胞肺癌中放射性肺损伤情况,对其相关因 素进行分析,寻找合理的预测性 指标。 方法 47例符合入组条件的非小细胞肺癌患者接受三维适形放疗及同期化疗。处方剂量为60Gy常规 放疗,同期化疗方案为NP方案,对三维适形治疗计划及临床资料进行单因素、多因素分析,评 价肺损伤情况。 结果 （1）完全缓解3例, 部分缓解42例,总有效率为95.74%,1年生存率75.78%。全组发生急性放 射性肺炎0级2例,1级20 例,2级17例,3级8例,无4级放射性肺炎发生。（2）与严重放射性肺炎发生呈正相关的剂量 学因素为MLD、肺NTCP,肺V5、 V15、V20。临床资料中仅发现肿瘤GTV与严重放射性肺炎发生相关;多因素分析显示全肺平均 剂量为放射性肺炎的独立影 响因素。 结论 剂量学因素（MLD、肺NTCP,肺V5、V15、V20）可以较好地预测严重放射性肺炎的发生,全肺 平均剂量是放射性肺炎发生的独立影响因素。     

CpG联合X射线照射对Lewis肺癌小鼠IL-10和TNF-α的影响

肺癌是常见的恶性肿瘤,放射治疗是重要的治疗手段,但治疗效果多不令人满意,肺癌患者免疫力低下是原因之一,而放射治疗又可使机体的免疫功能下降.     

CEA、CA125、CYFRA21-1水平在EGFR-TKIs治疗EGFR突变阳性的非小细胞肺腺癌疗效评估中的临床价值

目的 探讨表皮生长因子受体(EGFR)突变的肺腺癌患者血清癌胚抗原(CEA)、糖类抗原125(CA125)、细胞角蛋白19片段抗原21-1(CYFRA21-1)水平与表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗效果的关系.方法 选择我院收治的EGFR基因突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)腺癌患者186...     

生姜提取物对胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡影响机制探讨

目的生姜提取物活性成分如生姜醇提物与6-姜酚参与调控多种肿瘤细胞增殖、凋亡及侵袭过程。HGC-27细胞株为常见的人未分化胃腺癌细胞。本研究旨在探讨生姜醇提物与6-姜酚单体对胃腺癌HGC-27细胞增殖、周期和凋亡影响及其可能的信号通路。方法利用有机溶剂提取法和中压制备色谱技术,得到生姜醇提物以及6-姜酚单体,经HPLC分析6-姜酚纯度不低于98.0%。以不同浓度(2、3和4 mg/mL)的生姜醇提物与6-姜酚(100、200、300和400μmol/L)处理HGC-27细胞24h,CCK-8法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期及凋亡;实时荧光定量PCR检测细胞周期调控蛋白及凋亡相关蛋白mRNA表达的变化。结果CCK-8实验结果显示,生姜醇提物及6-姜酚均可浓度依赖性地抑制HGC-27细胞增殖,F值分别为2110和40.23,均P<0.01。流式细胞术检测结果显示,当2、3和4mg/mL生姜醇提物处理细胞24h后,G1期细胞比例增加至(50.86±1.64)%、(56.78±0.60)%和(55.74±0.43)%,高于空白对照组(46.14±2.60)%,差异有统计学意义,均P<0.01;而3和4mg/mL生姜醇提物处理组凋亡率则分别增至(20.96±0.39)%和(27.36±4.48)%,与空白对照组(14.92±1.38)%相比,差异均有统计学意义,均P<0.05。当300和400μmol/L 6-姜酚处理细胞24h后,G1期细胞比例增加至(53.85±0.62)%和(51.70±1.78)%,高于空白对照组(42.57±0.19)%,差异有统计学意义,P<0.01;而其凋亡率分别增至(9.47±1.56)%和(17.04±0.60)%,与空白对照组(4.81±1.56)%相比,差异有统计学意义,P<0.01。实时荧光定量PCR检测结果显示,生姜醇提物上调促凋亡蛋白Bax mRNA表达,同时下调凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA表达,而6-姜酚则增加Bax/Bcl-2比例,并下调细胞周期调控蛋白Cyclin E1 mRNA表达,上调细胞周期蛋白激酶抑制因子p21 mRNA表达。结论生姜醇提物及6-姜酚对胃癌HGC-27细胞增殖均有抑制作用,并使细胞周期发生G1期阻滞及诱导细胞凋亡,为成为治疗胃癌的天然药物提供新依据。     

雷替曲塞联合X线照射对人喉癌细胞Hep-2的协同作用

目的:探讨雷替曲塞与X射线对人喉癌细胞Hep-2的协同作用及其潜在机制。方法:CCK-8法检测不同浓度雷替曲塞对Hep-2细胞活力的影响。将Hep-2细胞随机分为对照组、雷替曲塞组、照射组、雷替曲塞+照射组。单击多靶模型绘制细胞存活曲线,检测4组细胞存活情况及放射增敏比(sensitization enhancement ratio,SER);流式细胞仪检测4组Hep-2细胞凋亡情况和周期改变。结果:雷替曲塞能抑制Hep-2细胞活力,且呈剂量依赖性(P0.05)。单击多靶模型显示,雷替曲塞平均致死剂量下SER为1.272。雷替曲塞能显著增加细胞凋亡和G_2/M期阻滞(P0.05)。结论:雷替曲塞能协同X线对人喉癌细胞Hep-2的抑制作用,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡和增加细胞G_2/M期阻滞有关。     

卡铂与足叶乙甙联合放射同步治疗局限期小细胞肺癌的临床疗效观察

目的　观察卡铂、足叶乙甙 (CE方案 )联合放射同步治疗局限期小细胞肺癌的临床疗效。方法　局限期小细胞肺癌患者 90例 ,采用信封抽签随机分组进入同步治疗组 (A组 )和序贯治疗组 (B组 )。两组患者均接受CE方案治疗 6个周期和放射治疗 (简称放疗 ) 6周 (剂量为 6 0Gy)。A组患者化学治疗 (化疗 )与放疗同时进行 ;B组先给予 4个周期化疗 ,再进行放疗 ,然后再化疗 2个周期。结果　A组患者中位生存时间 2 6个月 ,5年生存率 2 7% ;B组患者中位生存时间 19个月 ,5年生存率 16 % ,两组差异有显著性 ( χ2 =4 10 4 ,P <0 0 5 )。两组患者主要毒副反应为骨髓抑制 ,Ⅲ、Ⅳ度白细胞下降发生率A组为 93 3% ( 4 2 / 4 5 ) ,B组为 75 5 % ( 34/ 4 5 ) ,差异有显著性 ( χ2 =5 4 13,P <0 0 5 )。结论　CE方案联合放射同步治疗 ,能有效提高局限期小细胞肺癌患者的生存时间和生存率     

PKM2基因沉默对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响

目的 探讨通过siRNA干扰技术沉默丙酮酸激酶同工酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)基因表达对人肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法 以人肺癌A549细胞为研究对象,根据PKM2 mRNA编码序列设计并合成干扰siRNA序列,瞬时转染A549细胞。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测PKM2基因的表达。设PKM2 siRNA干扰组,阴性对照组、空白对照组。各组细胞分别接受不同剂量6 MV X射线照射,通过集落形成实验检测细胞放射敏感性,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡率。每组实验重复3次。结果 RT-PCR和Western blot显示,PKM2 siRNA干扰组较空白对照组的PKM2 mRNA和蛋白表达都明显下降(t=20.91、47.00,P<0.01),抑制率分别为(70.27±1.38)%和(70.42±1.18)%;集落形成实验显示,PKM2 siRNA干扰+IR组A549细胞 D₀、D_q、N和SF₂值均低于空白对照+IR组(t=43.82、28.44、15.60、29.63,P<0.01),放射增敏比(SER)为1.27。流式细胞仪分析显示,PKM2 siRNA干扰组G₂/M期细胞的百分率明显高于空白对照组(t=8.35,P<0.01),经10 Gy X射线照射,G₂/M期细胞比例也明显升高(t=27.87,P<0.01)。两者联合使用后G₂/M期阻滞更加明显。siRNA干扰组细胞凋亡率较空白对照组无显著升高,空白对照+IR组较空白对照组凋亡率明显升高(t=23.99,P<0.01);PKM2 SiRNA干扰+IR组较空白对照+IR组和PKM2 siRNA干扰组差异均有统计学意义(t=9.42、65.21,P<0.01)。结论 特异性沉默PKM2基因表达能够增加A549细胞的放射敏感性,推测其机制可能与改变细胞周期分布及使射线诱导细胞凋亡的作用增强有关。