前列地尔对严重烧伤患者血栓前状态的影响

目的观察严重烧伤早期应用前列地尔(Lipo-PGE1)对患者血栓前状态的影响。方法 25例烧伤总面积≥50%总体表面积(TBSA)和(或)Ⅲ度烧伤面积≥20%TBSA的严重烧伤患者经随机双盲法入选Lipo-PGE1组(n=15)和对照组(n=10),两组患者入院后均给予常规治疗,Lipo-PGE1组加用Lipo-PGE110μg静脉推注(1次/d,连用7 d)。分别于烧伤后1、2、3、7、14 d采集血样,测定抗凝血酶抗原(AT:Ag)、抗凝血酶活性(AT:A)、蛋白C活性(PC:A)、蛋白S活性(PS:A)、血小板表面P选择素(P-sel)、可溶性纤维蛋白单体复合物(SFMC)、纤溶酶-抗纤溶酶复合物(PAP)。运用凝血分析仪描记血栓弹力图(TEG),对Lipo-PGE1组患者用药前后的TEG各项参数进行分析,评估凝血功能。结果两组患者烧伤后不同时间点的AT:Ag、AT:A、PC:A、PS:A、SFMC和PAP比较差异无统计学意义(P>0.05);烧伤后3、7 d,Lipo-PGE1组血小板表面P-sel表达显著低于对照组(P<0.05)。TEG参数分析结果显示:Lipo-PGE1组用药前后的凝血活酶生成时...     

糖尿病大鼠深二度烫伤创面血管化现象

目的建立糖尿病大鼠深二度烫伤模型,研究创面愈合过程中血管化现象及其与创面愈合的关系。方法60只清洁级SD大鼠,随即分为正常组(对照组,n=30)和以链脲霉素(STZ)诱导的速发型糖尿病组(糖尿病组,n=30)。制备占总体表面积(TBSA)20%的深二度烫伤模型,分别取伤后1、3、7、10、14、21 d创面皮肤组织样本,行组织学观察并计算创面愈合率;荧光显微镜下观察创面组织的血管化;免疫组化法检测创面组织中CD31抗原表达,以了解微血管内皮细胞的改变。结果伤后14 d,糖尿病组大鼠创面愈合较对照组显著延迟,为(31.5±1.0)%vs(59.4±4.2)%(P<0.01)。伤后1、3、7、14、21 d,糖尿病组新生血管化荧光密度值分别为1±0.1、7±0.8、12±1.4、15±2.1和17±1.8,对照组分别为8.5±0.5、35±1.5、60±3.0、72±3.4和72±3.4。各时间点糖尿病组创面血管化均较对照组显著降低(P<0.01)。各时间点两组创面组织中CD31抗原表达无显著差异(P>0.05),但糖尿病组大鼠仅少量血管内皮细胞周边有代表血管化的蓝色荧光微球。结论糖尿病深二度烫伤难愈创面存在血供不良特征,表现为血管内皮细胞增殖活跃与血管化低下的分离现象,其本质是新生血管形成障碍。     

重组人角质细胞生长因子-2对大鼠皮肤烫伤的治疗作用及其可能机制探讨

目的：研究重组人角质细胞生长因子-2（rhKGF-2）对大鼠皮肤烫伤愈合的影响及其可能的作用机制。方法：建立大鼠深Ⅱ度烫伤模型,每天局部给药1次,连续15d,每4d测量伤口面积并计算愈合率,d16观察新生上皮面积、厚度和上皮细胞迁移距离。体外培养HaCaT细胞,MTT法检测不同浓度的rhKGF-2对HaCaT细胞增殖率的影响;划痕实验检测rhKGF-2对HaCaT细胞移行的影响。结果：rhKGF-2对大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤的愈合有明显的促进作用,使新生上皮面积、平均厚度和上皮细胞移行距离等明显增加。rhKGF-2可刺激HaCaT细胞增殖,集落形成率增加（P〈0.05）,且细胞呈明显的增殖形态,形成的集落较大,集落内细胞多呈星状,胞内染色质丰富;rhKGF-2能显著促进创伤周围细胞向创面中央移行（P〈0.01）。结论：rhKGF-2能明显加快大鼠烫伤创面愈合,可能作用机理为通过促进表皮细胞增殖和移行,加速创面皮肤再上皮化。     

氧化应激对大鼠真皮成纤维细胞生物学行为的影响

目的:创面微环境中许多细胞都能不同程度的产生活性氧等自由基。观察氧化应激对大鼠真皮成纤维细胞生物学行为的影响,有利于认识创面愈合的机制。方法:实验于2005-09/2006-03在上海市烧伤研究所完成。①实验材料:体质量为200～220g的清洁级雄性SD大鼠,由中科院上海动物实验研究所提供。②实验方法:取SD大鼠背部皮肤组织,消化分离表皮真皮,剪成0.1cm×0.2cm真皮块,置于含体积分数为0.10 FBS的DMEM培养瓶中,在37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养,每周换液2次。约7～10d后,成纤维细胞逐渐从真皮块中迁移出来,并且大量增殖,待原代培养成纤维细胞生长融合成片,用0.05%胰酶-EDTA消化,用含体积分数为0.10FBS的DMEM终止消化,离心后,按1∶3分装传代。取对数生长期的成纤维细胞,培养24h后,分别以20,50,100,150μmol/LH2O2干预成纤维细胞,另设空白对照(不加H2O2)及调零组(只加Hank’s液不加细胞)。③实验评估:采用MTT法观察细胞活力,流式细胞仪观察细胞凋亡,荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测,脂质过氧化物测试盒测试细胞丙二醛含量。结果:①MTT法观察细胞活力:随着H2O2浓度增加,成纤维细胞活力明显降低,各H2O2干预组吸光度值均较空白对照组低(P<0.01)。②流式细胞仪测定细胞凋亡:与空白对照组相比,20μmol/LH2O2干预组细胞凋亡无明显变化,100μmol/LH2O2干预组细胞凋亡明显升高(F=47.78,P<0.01)。③细胞内活性氧的测定:与空白对照组相比,20,100μmol/LH2O2干预组细胞活性氧产生明显升高(F=166.557,P<0.01,P<0.01)。④细胞内脂质过氧化物测定:与空白对照组相比,20μmol/LH2O2干预组细胞脂质过氧化产物丙二醛含量无明显变化,100μmol/LH2O2干预组细胞脂质过氧化产物丙二醛含量明显升高(F=5.756,P<0.01)。结论:氧化应激能导致大鼠真皮成纤维细胞细胞活力下降,凋亡增加,抗氧化治疗可以作为难愈性创面的治疗策略。     

心包积液腺癌1例

1临床资料患者,女性,52岁,于2010年9月无明显诱因出现咳嗽、咳少量淡黄色黏痰,伴胸闷、气短,活动后加重,无发热、胸痛、盗汗、咯血、心慌、恶心、呕吐、腹痛、尿频、尿急,在院外按"心脏疾病"给予中物(具体用药不详)治疗效果不佳,症状持续存在。症状加重,并活动后胸闷、呼吸困难明显,查胸部CT示双肺见     

前列腺增生合并膀胱结石三种手术方法的临床疗效比较研究

目的：总结大力碎石钳碎石加经尿道前列腺电切（ TURP）、经膀胱镜钬激光碎石加TURP、小切口开放取石加TURP三种手术方法治疗前列腺增生合并膀胱结石的临床效果。方法对118例前列腺增生合并膀胱结石患者分别采用大力碎石钳碎石加TURP术37例（ A组）,经膀胱镜钬激光碎石加TURP术43例（ B组）,小切口开放取石加TURP术38例（ C组）。对比和评价三种手术方式的临床疗效。结果 A、B、C三组在膀胱黏膜损伤率、膀胱穿孔改开放手术率、住院时间上,B组明显好于A组及C组;碎石取石操作时间上,B组碎石取石操作时间长于A组及C组。结论经膀胱镜钬激光碎石结合TURP治疗前列腺增生合并膀胱结石具有损伤小、疗效好、恢复快等优点,虽然结石较大时碎石取石时间延长,但手术并发症少,值得临床推广。     

PCR-核酸飞行时间质谱系统检测新型冠状病毒方法的建立及应用研究

背景　新型冠状病毒肺炎（COVID-19）在全球暴发,实验室检测结果是疾病诊断的重要依据,检测方法的灵敏度和特异度是影响实验结果的关键因素,现实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）核酸检测方法是COVID-19确诊的通用方法,但其检测灵敏度有方法局限性,依赖标本病毒含量。通过对PCR-核酸飞行时间质谱检测方法的优化,从而提高对低新型冠状病毒（SARS-CoV-2）含量病例检测的灵敏度,可为现有方法做有效补充。目的　应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）原理,在Clin-ToF Ⅱ飞行时间质谱系统上,建立PCR-核酸飞行时间质谱（PCR-TOF MS）系统检测SARS-CoV-2的方法,并评估其实际应用价值。方法　2020年2-3月于上海市临床检验中心室间质评阳性样本40份、阴性样本7份,国家卫生健康委员会室间质评阳性样本41份、阴性样本33份,本实验室购买阳性质粒及稀释样本32份,健康人样本28份,空白对照超纯水5份,共186份样本作为建立PCR-TOF MS系统数据。于2020年1-2月收集安徽省内临床送检到安徽省疾病预防控制中心的疑似COVID-19患者上呼吸道样本80份（咽拭子样本55份、痰液样本25份）及健康人群样本20份（均为咽拭子样本）作为评估PCR-TOF MS系统效果的数据。建立PCR-TOF MS系统试验体系步骤,包括PCR扩增、虾碱性磷酸酶（SAP）消化、单碱基延伸和质谱检测;并基于阳性质粒优化模版量,根据186份样本检测质谱峰的信噪比（SNP）确定该方法在SARS-CoV-2检测时的判读标准。对80份疑似SARS-CoV-2样本和20份健康人群样本进行检测分析,并与实时荧光定量PCR法进行对比。结果　通过对PCR-TOF MS 模板条件的优化,模版量6 μl时,扩增产物可获得典型的质谱峰图。建立的PCR-TOF MS反应体系可以对SARS-CoV-2核酸的开放读码框1ab（ORF1ab）基因和核壳蛋白（N）基因进行有效扩增检测。本研究PCR-TOF MS方法对临床疑似病例样本的检出率为90.00%,高于实时荧光定量PCR法的75.00%,同时,结果显示,实时荧光定量PCR法检出中含有25.00%的可疑结果,而PCR-TOF MS则无可疑结果。对于痰液和咽拭子两种样本的检出率,PCR-TOF MS法分别为100.00%和85.45%,高于荧光定量PCR法的64.00%和43.64%。阴性样本两种方法均未检出。结论　通过PCR技术与飞行时间质谱技术的结合,使得检测SARS-CoV-2目标片段指数级扩大,从而提高样本的检测灵敏度。MALDI-TOF MS技术通过对离子分子量的检测分析,具有较高的准确性和特异性,同时证实了痰液样本优于咽拭子样本。该方法可作为实时荧光定量PCR法的补充和协同,在一定程度上有利于弥补假阴性的问题,从而降低临床漏诊率,提高检测效率,为疫情的研判缩短时间。     

烧伤后24 h内削痂防治深Ⅱ度创面进行性加深的组织学观察

目的　探讨烧伤后 2 4h内行削痂手术 ,对深Ⅱ度烧伤创面进行性加深的防治作用。方法　选择 12例深Ⅱ度烧伤患者 ,在伤后 2 4h内进行创面削痂手术。分别从手术前、手术后 (伤后 5～7d)和未手术创面 (伤后 5～ 7d)获取标本。采用HE染色、Masson′s染色和免疫组化技术标记Vi mentin抗原阳性细胞的方法 ,对创面组织标本进行组织学观察。　结果　随病程演进 ,未手术创面炎性反应程度明显加重 ,组织坏死范围扩大 ,原来残存的皮肤附件因炎症加重而消失 ;Masson′s染色棕红色范围扩大 ,亮绿色范围缩小 ;Vimentin抗原阳性细胞数量明显减少。伤后 2 4h内削痂创面局部炎症反应较未削痂创面明显减轻 ,可见新鲜肉芽形成和部分上皮修复 ,组织坏死范围未见进一步扩大 ,与未手术区比较差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ;Masson′s染色亮绿色范围无明显缩小 ;Vimentin抗原阳性细胞数量明显多于未手术区 (P <0 .0 5 )。　结论　烧伤后 2 4h内削痂 ,能适时去除创面坏死组织、阻断组织变质性损害的加剧 ,从而有效改善深Ⅱ度创面的进行性加深现象 ,对创面愈合具有促进作用。     

伤后24h内削痂对深二度烧伤创面生长因子释放的影响

目的探讨伤后24 h内削痂手术对深二度烧伤创面局部表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血小板衍生生长因子(PDGF)释放的影响.方法12例深二度烧伤患者,伤后24 h内实施削痂手术.削痂术前先切取手术前实验区组织标本.术中部分创面保留不予手术,作为未手术实验区.伤后5～7 d行再次手术,分别切取经削痂处理和未手术区的创面组织,作为手术后和未手术实验区标本.分别检测创面组织释放生长因子EGF、FGF-2和PDGF-AB的含量,并进行组织学观察和新生肉芽形成半定量分析.结果削痂手术创面组织局部释放EGF、FGF-2和PDGF-AB的水平较手术前和未手术创面有显著升高(P＜0.05);组织形态学观察显示,削痂手术后创面新鲜肉芽组织形成较手术前和未手术创面显著(P＜0.05).结论伤后24 h内削痂手术可以促进局部创面组织释放EGF、FGF-2和PDGF-AB,促进新生肉芽形成,有利于深二度烧伤创面愈合.     

烧伤创面与糖尿病溃疡创面的比较

目的比较烧伤创面与糖尿病溃疡创面的差异，初步分析糖尿病患者溃疡创面难愈的机制。方法分别切取非糖尿病烧伤患者的足部创面（对照组）和糖尿病患者的足部溃疡创面（试验组）组织，行组织块培养。用酶联免疫吸附测定（ELISA）法、反转录-PCR法分别检测创面组织释放的成纤维细胞生长因子2（FGF2）、血管内皮生长因子（VEGF）蛋白质及其mRNA水平；免疫组织化学法检测创面微血管密度（MVD）的变化。人脐静脉内皮细胞分别在含5mmol／L葡萄糖的培养液（正常培养液组）、含30mmol／L葡萄糖的培养液（高糖组）、含30mmol／L甘露醇的培养液（甘露醇组）中培养7d，以ELISA法测定VEGF蛋白质水平。结果对照组患者FGF2、VEGF蛋白质水平分别为（59±3）ng／ml、（56±7）pg／ml，试验组2种蛋白质水平分别为（89±6）ng／ml、（108±5）pg／ml，组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），mRNA比较结果与蛋白质相似；2组的MVD水平，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。体外细胞培养时当培养液含FGF2，高糖组与正常培养液组的VEGF蛋白质水平相近（P〉0．05）；移去FGF2后2、5d，正常培养液组该指标明显高于高糖组（P〈0．05或P〈0．01）。结论糖尿病患者溃疡创面难愈与血管化受到抑制以及调控血管生长的因子低表达密切相关。