基于荧光素酶报告基因的MCF7细胞雌激素样物质检测方法的建立

目的:建立基于报告基因的MCF7细胞体外雌激素样物质检测方法,并研究2,2-双(对氯苯基)-1,1,1-三氯乙烷(2,4-DDT)和甲氧氯(METH)的雌激素样作用.方法:合成人雌激素反应元件(ERE)核心片段并将其插入pGL3-promoter载体的多克隆位点,构建成雌激素反应元件ERE调控的报告质粒pERE-Luc,用脂质体转染法将pERE-Luc及内对照质粒phRL-SV40瞬时转染MCF7细胞,用17β-雌二醇(E2)及受体拮抗剂三苯氧胺(TAM)等处理后检测报告基因荧光素酶的表达,并用雌激素样物质2,4-DDT和METH对方法的有效性进行验证.结果:构建了ERE调控的报告质粒pERE-Luc,转染pERE-Luc的MCF7细胞报告基因的表达与E2呈明显的剂量反应关系,1×10-11mol/L E2可引起报告基因表达,至1×10-9mol/L可达到最大表达值,而未转染pERE-Luc时与E2无明显反应,TAM可以显著抑制E2引起的报告基因的表达.验证结果表明,2,4-DDT浓度>1×10-7mol/L及METH浓度>1×10-6mol/L时可产生雌激素样活性,2,4-DDT的雌激素样活性强于METH.结论:建立的基于荧光素酶报告基因的体外雌激素样物质检测方法有效可靠,以此方法检测2,4-DDT和METH显示有明显的雌激素样活性作用.     

苦参碱注射液联合TACE术治疗原发性肝癌的临床观察

目的：观察苦参碱注射液配合TACE术治疗晚期肝癌的疗效及实验室指标的变化。方法：80例肝癌患者随机分成：治疗组41例，苦参碱配合TACE术；对照组39例，甘利欣配合TACE术。结果：治疗组在改善TACE术后的发热、疼痛有效率分别为82．35％、73．3％；对照组分别为54．84％、54．71％。实验室指标：在防治TACE术后白细胞下降、总胆红素的升高、白球比例的下降等保肝、护肝方面有较好的作用，与对照组比较差异具有统计学意义，在防治转氨酶升高方面与对照组相仿。结论：苦参碱联合TACE术有改善生活质量、防治白细胞下降、保护肝功能的作用。     

新癀片治疗原发性肝癌TACE术后发热36例

经肝动脉灌注化疗栓塞(TACE)术已成为目前中晚期原发性肝癌最有效的治疗方法[1,2]之一.TACE术后的不良反应以发热、恶心、呕吐及腹痛最为多见[3,4].我科于1998年4月至2001年6月间对36例原发性肝癌行TACE术后出现发热的患者,采用了中药新癀片治疗,效果满意,现报道如下.     

新癀片治疗原发性肝癌TACE术后腹痛46例

目的 探寻原发性肝癌动脉灌注化疗栓塞（TACE），术后腹痛的治疗新药。方法 对符合入选标准的46例肝癌TACE术后腹痛患者，采用中成药新癀片治疗，并总结统计其疗效。结果 总有效率为89．1％，完全缓解和加明显缓解率为78．3％，有效率病例一般于0.5-1h显效。结论 新癀片对肝癌TACE术后腹痛，有较好疗效。     

化妆品安全性评价中小鼠局部淋巴结试验方法的改进

目的改进小鼠局部淋巴结实验(LLNA),建立既可检测化学物致敏性也可同时检测刺激性的LLNA替代方法。方法选取一种阴性物质:4-氨苯甲酸;三种致敏阳性物:2,4-二硝基氯苯(DNCB)、己基肉桂醛(HCA)和2-氨基酚(2-APC);以及两种刺激阳性物:氢氧化钾(KOH)、十二烷基硫酸钠(SLS)。按常规LLNA方法对雌性Balb/c小鼠进行染毒,测量小鼠耳缘厚度并称量耳廓重量,于第6天获取耳引流淋巴结进行称重,制备单细胞悬液计数并用CCK-8试剂盒检测淋巴细胞增殖活性。结果受试剂量氢氧化钾、十二烷基硫酸钠和2,4-二硝基氯苯在0.5%以上剂量,可引起耳缘厚度和耳廓重量增加,与对照组相比差异有显著性(P<0.05),可判定为对皮肤有刺激性,2-氨基酚和己基肉桂醛均无刺激性。三种致敏物在致敏试验中均呈阳性,但三指标的敏感性略有不同。己基肉桂醛,2,4-二硝基氯苯,2-氨基酚均可引起淋巴结重量增加和淋巴细胞计数增加(P<0.05);中剂量以上组己基肉桂醛和2,4-二硝基氯苯和高剂量2-氨基酚的CCK-8检测均见淋巴细胞增殖明显。结论以耳缘厚度和耳廓重量作为刺激性观察指标,以淋巴结重量和淋巴细胞增殖作为致敏性观察指标的改良小鼠淋巴结实验可有效地同时评价化学物的皮肤致敏性和刺激性。     

神昌滴丸的遗传毒性研究

目的:研究神昌滴丸的遗传毒性,为其应用提供安全性毒理学评价依据.方法:采用Ames试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验、小鼠微核试验,考察神昌滴丸对鼠伤寒沙门茵和细胞的遗传毒性.结果:经Ames试验、小鼠骨髓细胞染色体畸变试验和小鼠微核试验,神昌滴丸的结果均呈阴性.结论:神昌滴丸无遗传毒性.     

报告基因方法检测壬基酚、双酚A抗雄激素样活性的体外研究

[目的]利用基于报告基因的中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)体外抗雄激素检测方法对壬基酚、双酚A的抗雄激素样活性进行研究,为进一步验证该法在检测抗雄激素样物质的可行性和揭示内分泌干扰作用的机制提供依据。[方法]采用本室建立的瞬时转染人雄激素受体表达质粒pSVAR0、雄激素反应元件调控的报告质粒pMMTV-Luc及内对照质粒phRL-SV40的CHO细胞,在给予1×10-7mol/L二氢睾酮(DHT)后给予不同浓度的壬基酚(NP)及双酚A(BPA),检测报告基因表达活性。[结果]浓度均>1×10-6mol/L的NP、BPA可抑制1×10-7mol/LDHT产生的雄激素样作用,两者具有抗雄激素活性,但较雄激素拮抗剂氟他安(FLU)弱,BPA的抑制作用强于NP。[结论]NP、BPA有一定的抗雄激素活性,BPA的抑制作用强于NP。     

复脑苏对孕鼠致畸性的研究

背量与目的:评价复脑苏在妊娠期的毒性. 材料与方法:用82只SD大鼠孕鼠,分为3个不同剂量的复脑苏(7.5 ms/kg、15.0 mg/kg、30.0 mg/kg)实验组,同时设阴性对照组(0.85%NS),每组19～21只孕鼠,实验组和对照组给药容量为10 ml/kg体重.实验组和阴性对照组均采用尾静脉给药,给药时间为妊娠期第6 d～15 d.于妊娠第20 d处死孕鼠,检查妊娠母体与胎鼠畸形情况.结果:复脑苏在各剂量组的活胎率、死胎率和吸收胎率及致畸率与对照组相比较差异无统计学意义(P＞0.05);各实验组胎鼠体重、身长、尾长与对照组比较差异也无统计学意义(P＞0.05);实验组的平均胎盘重与对照组相比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),但无明显的剂量-效应关系.各实验组除尾椎数和远端趾骨数与对照组相比差异具有统计学意义外(P＜0.05),其它骨骼发育与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).各实验组均未观察到母鼠和胎鼠明显的外观、脏器以及骨骼的畸形.结论:复脑苏在本实验剂量(≤30.0 mg/kg)下无明显的母鼠毒性和致畸作用,也无明显的胚胎毒性和胎鼠毒性.     

Hsp60基因在小鼠腭和肢正常与异常发生过程中的表达

背景与目的:研究热休克蛋白60基因(heat shock protein 60 gene,Hsp60)在小鼠胚胎腭、前肢正常和异常发育过程中的表达情况.材料与方法:将受孕后ICR小鼠随机分为实验组和对照组2组,每组各64只,于孕10 d(gestational day 10,GD10),分别经口一次给予实验组孕鼠80 mg/kg的全反式视黄酸,对照组孕鼠给予等体积的大豆油,并分别于GD11～GD18取2组胎鼠的前肢,于GD15～GD17取2组胎鼠的腭,利用实时荧光定量PCR检测Hsp60的表达丰度.结果:Hsp60在正常、异常肢和腭中均有表达.对照肢的表达丰度在GD14和出生前呈高表达,而实验肢的表达在各胚龄无明显差异(P＞0.05);实验肢Hsp60在GD11～GD18的表达水平高于同一胚龄的对照肢(P＜0.05).在正常腭中,Hsp60恒定表达,在异常腭中,Hsp60的表达随胚龄增大而降低;在GD15～GD17的表达丰度为实验腭低于同胚龄的对照腭(P＜0.05).结论:全反式视黄酸所致的短肢中,脚60的表达呈应激性升高;而在异常腭中,Hsp60的表达受到抑制.     

纳米级二氧化钛对体外大鼠腔前卵泡生长发育成熟的影响

目的:采用大鼠腔前卵泡体外培养方法研究纳米级二氧化钛(TiO2)对大鼠卵泡发育及卵母细胞成熟的影响,揭示纳米TiO2有无雌性生殖毒性,为其安全性评价提供依据。方法:机械性分离大鼠腔前卵泡,单个卵泡在96孔板中连续培养。将卵泡随机分为5组:3个25 nm TiO2(12.5、25和50 μg/ml)组、阴性对照组、微米级TiO2对照组。培养第10天诱导排卵,观察卵泡发育和卵母细胞成熟情况。结果: 随着纳米级TiO2剂量增加,卵泡存活率、有腔形成率及卵丘-卵母细胞复合体(COCs)排出率呈下降趋势(P<0.05);与阴性对照组相比,微米级TiO2组对卵泡发育与卵母细胞成熟无明显影响;25 μg/ml以上剂量纳米级TiO2组卵泡形态学明显异常,卵泡存活率及有腔形成率明显下降;50 μg/ml纳米级TiO2可使处于成熟阶段的卵母细胞数减少。结论:25 μg/ml剂量以上25 nm TiO2可以抑制体外大鼠腔前卵泡的生长发育与卵母细胞成熟,而微米级TiO2在相同剂量下对卵泡的生长发育和卵母细胞的成熟无明显影响。提示纳米级TiO2有不同于微米级TiO2的毒作用性质,可能有雌性生殖毒性,应引起关注。