全文获取类型
收费全文 | 206篇 |
免费 | 3篇 |
国内免费 | 6篇 |
专业分类
儿科学 | 4篇 |
基础医学 | 7篇 |
临床医学 | 98篇 |
内科学 | 11篇 |
神经病学 | 1篇 |
外科学 | 3篇 |
综合类 | 53篇 |
预防医学 | 6篇 |
眼科学 | 2篇 |
药学 | 15篇 |
中国医学 | 1篇 |
肿瘤学 | 14篇 |
出版年
2022年 | 1篇 |
2018年 | 2篇 |
2015年 | 1篇 |
2014年 | 2篇 |
2013年 | 6篇 |
2012年 | 11篇 |
2011年 | 17篇 |
2010年 | 24篇 |
2009年 | 24篇 |
2008年 | 20篇 |
2007年 | 17篇 |
2006年 | 26篇 |
2005年 | 9篇 |
2004年 | 15篇 |
2003年 | 6篇 |
2002年 | 5篇 |
2001年 | 4篇 |
2000年 | 9篇 |
1999年 | 7篇 |
1997年 | 1篇 |
1996年 | 1篇 |
1995年 | 2篇 |
1994年 | 2篇 |
1990年 | 1篇 |
1989年 | 1篇 |
1988年 | 1篇 |
排序方式: 共有215条查询结果,搜索用时 15 毫秒
101.
本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化。结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率。分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因。结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础。 相似文献
102.
103.
本研究探讨以尿苷二磷酸半乳糖(UDP-Gal)为添加剂的血小板冷藏保存方法。采集兔心脏血,按常规方法制备浓缩血小板悬液(PC),在悬液中添加UDP-Gal,放4℃冰箱储存10天。尔后观察血小板(Plt)数量?血小板平均体积(MPV)、血小板体积分布宽度(PDW)?血小板聚集功能(PagT)?血小板促凝活性实验(PF3aT和APCT)和血小板凋亡(apoptosis)的变化。将冷藏兔血小板用Cr51标记后,检测输入兔体内后的血小板生存时间。结果表明加入UDP-Gal冷藏保存10天后的PC的Plt、MPV、PDW、血小板促凝血活性与新鲜PC相比均无显著性变化(P(0.05);而冷藏对照PC的Plt明显减少,MPV、PDW显著增大,血小板促凝血活性减低,与新鲜PC相比差异有显著性(P>0.01);加入UDP-Gal的PC冷藏保存10天后的血小板凋亡率与新鲜PC相比有所增高(P(0.05),但明显低于冷藏对照组(P(0.01),其血小板聚集率(诱聚剂为阳离子没食子酸丙酯,C-PG)减低,但仍能保持在新鲜血小板的50%以上。添加UDP-Gal时冷藏保存10天的血小板与新鲜的血小板在体内的生存时间相近(P(0.05),输注兔体内72小时时的血小板存活率在新鲜对照组、UDP-Gal冷藏保存组和冷藏对照组分别为57.5%±7.2%、50.3%±6.3%和0.1%±0.5%。结论尿苷二磷酸半乳糖对冷藏保存的兔血小板有保护作用,并能延长冷藏兔血小板在体内的生存时间。 相似文献
104.
S-2-(3-氨丙基氨基)乙基硫代磷酸酯对白血病细胞系HL-60细胞增殖与凋亡的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究探讨S 2 (3 氨丙基氨基 )乙基硫代磷酸酯 (WR 2 72 1,Amifostine)对白血病细胞系HL 6 0细胞增殖与凋亡的影响。采用XTT法检测细胞增殖及药物敏感性 ,用annexin/PI双染色法检测细胞凋亡 ,用流式细胞术检测细胞周期。结果表明 :WR 2 72 1对HL 6 0细胞增殖呈浓度时间依赖性抑制作用 ,0 .5mmol/LWR 2 72 137℃处理 30分钟后的HL 6 0细胞对VP16的敏感性增强 ,IC50 由 5 2 .5 μg/ml下降为 4 0 .5 μg/ml。WR 2 72 15 .0mmol/L作用 72小时后 ,早期细胞凋亡由 (5 .5± 1.9) %增加至 (4 8.5± 8.4 ) % (P <0 .0 0 1) ,晚期细胞凋亡由 (1.2± 0 .5 ) %增加至 (39.0± 4 .0 ) % (P <0 .0 0 1) ,并出现G2 M期细胞阻滞。结论 :S 2 (3 氨丙基氨基 )乙基硫代磷酸酯能增强HL 6 0细胞对VP16的敏感性 ,并可通过G2 M期阻滞 ,诱导细胞凋亡 ,从而抑制HL 6 0细胞的增殖。 相似文献
105.
骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡和TNF-α关系的研究 总被引:7,自引:0,他引:7
目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)骨髓细胞调亡特征以及与肿瘤坏死因子α(TNF—α)的关系。方法:分别采用形态学和dUTP末端缺口标记(TUNEL)方法检测骨髓细胞调亡;采用ELISA方法检测骨髓单个核细胞培养后上清液中TNF—α的浓度,并与缺铁性贫血(IDA)患者进行比较。结果:形态学方法检测骨髓单个核细胞培养后细胞调亡指数,MDS明显高于IDA(P<o.01),MDS各分型(RA/RAS、RAEB/RAEB—t)之间细胞调亡指数差异无显著性意义(P>0.05)。同一个体TUNEL法测得的骨髓细胞调亡指数均高于形态学观测的结果。TUNEL检测MDS细胞调亡指数RA/RAS>RAEB/RAEB—t,但差异无显著性意义(P>0.05)。MDS骨髓单个核细胞上清中TNF-α浓度高于IDA组,差异有显著性意义(P<0.05);MDS各分型之间RA/RAS显著高于RAEB/RAEB—t(P<0.05)。结论:MDS骨髓细胞确实凋亡过度,早期MDS重于晚期MDS,并与TNF—α呈线性关系;采用TUNEL法检测凋亡细胞较形态学方法敏感。 相似文献
106.
非清髓异基因外周造血干细胞移植治疗难治性恶性血液病 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:观察非清髓异基因外周造血干细胞移植(NAST)对难治性恶性血液病的疗效。方法:采用NAST治疗 3例慢性粒细胞白血病加速期(CML -AP)、1例骨髓增生异常综合征(MDS-RAEB T)患者。非清髓预处理方案:氟达拉宾 (Flud)30mg·m-2·d-1×6d,白消安(Bu)4mg·kg-1·d-1×2d,环磷酰胺(CTX)600mg·d-1×2d,3例CML- AP患者在此基 础上加用阿糖胞苷(Ara c)。结果:4例患者造血均顺利恢复,ANC>0.5×109/L平均为12天,BPC>20×109/L平均为11天。 +30天时经短串联重复序列(STR)- PCR检测3例患者为完全嵌合体(CC),1例慢粒患者为混合嵌合体(MC),+90天时全部 患者均处于CC。分别随访4月~16月,均无病存活。结论:非清髓异基因外周造血干细胞移植是治疗CML- AP、MDS -RAEB T 等难治性恶性血液病的有效手段。 相似文献
107.
近来研究表明,长期的化疗会导致肿瘤细胞多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生,它与多药耐药基因(MDRl)表达产物,P-糖蛋白(P-glycoprotein,PgP,170 kD),的过度表达有关。淋巴因子激活的杀伤(Lymphokine activated killer,LAK)细胞对新鲜或无耐药细胞研究较多,其明显的杀伤作用已获肯定。已有人进行过LAK细胞对白血病耐药细胞株的体外杀伤研究[1],也有人进行过流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测MDR的研究[2]。但是,应用FCM检测异体LAK细胞对白血病耐药细胞的体外净化作用国内外仍无人报道,现报道如下。1 材料与方法1.1 主要试剂、细胞、标本及仪器 RPMI 1640细胞培养液、淋巴细胞分离液(Fi-coll)、白细胞介素-2(IL-2)、MDR-PE(P170单抗)、IgG2a-PE(P170单抗阴性对照)。正常人单采白细胞。白血病骨髓标本:取自复发的或长期化疗的白血病患者骨髓6例,4男2女,19岁~56岁之间,经血细胞形态学确诊。主要仪器:流式细胞仪。1.2 LAK细胞的制备 取正常人单采白细胞20 ml,以无菌生理盐水等体积混合稀释,分数管按2:1(体积比)缓慢加入含有Ficoll的离心管中,2 000 r/min离心25 min后吸取界面层细胞(即单个核细胞),用生理盐水离心清洗3次,调整细胞浓度为l×106,加入1 500 U/ml浓度的IL-2,置于37℃,5%CO2培养箱中孵育4 d即成。1.3 白血病原代细胞悬液的制备 无菌抽取复发的或长期化疗的白血病患者骨髓3ml,肝素抗凝(20/ml),以无菌生理盐水等体积混合稀释,将此骨髓稀释液缓慢加入含有3ml Ficoll的离心管中,2 000 r/min离心20 min后吸取界面层细胞,用生理盐水离心清洗3次,调整细胞浓度为1×105,置于37℃,5%CO2培养箱中培养备用。 相似文献
108.
磁性纳米四氧化三铁及纳米金协同柔红霉素作用于K562/A02细胞的初步研究 总被引:3,自引:1,他引:2
目的:研究磁性纳米四氧化三铁(Nano-Fe3O4)及纳米金(Nano-Au)是否具有逆转K562/A02细胞耐药的作用。方法:用MTT法测定盐酸柔红霉素(DNR)对K562/A02和K562细胞的毒性,并观察DNR与Nano-Fe3O4或Nano-Au的联合作用。结果:体积分数为25%的Nano-Fe3O4及Nano-Au能有效增强DNR的细胞毒作用,提高细胞的凋亡率,差异具有显著性。结论:Nano-Fe3O4及Nano-Au结合DNR后均能有效逆转K562/A02细胞的耐药性。 相似文献
109.
目的 研究汉防己甲素(Tet)和屈洛昔芬(DRL)单独及联合用药后对K562细胞及其耐药细胞株K562/A02的核因子κB(NF-κB)表达的影响,以进一步探讨其逆转多药耐药的作用机制.方法 采用免疫细胞化学及Western blotting法分别检测Tet(1μmol/L)、DRL(5 μmol/L)单独及联合作用于K562和K562/A02细胞后NF-κB核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平的变化.结果①K562/A02细胞NF-κB核转位水平[(65.0±4.2)%]及胞核NF-κB蛋白表达(3.545±0.219)明显高于K562细胞[(39.6±0.9)%和2.366±0.141](P<0.01);②Tet、DRL单独及联合作用6、12 h,对K562细胞NF-κB核转位水平及胞核NF-κB蛋白表达水平无明显影响(P>0.05);③两药单独及联合作用6、12 h,可明显降低K562/A02细胞NF-κB蛋白核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平(P<0.05和P<0.01),两药联合作用增强(P<0.05),作用12 h较作用6 h效果更显著(P<0.05).结论K562/A02细胞的胞核NF-κB蛋白表达水平明显高于K562细胞,NF-κB的活化可能参与了K562/A02细胞耐药的发生;抑制NF-κB活化可能参与了Tet和DRL逆转K562/A02细胞多药耐药过程. 相似文献
110.
本研究探讨磁性纳米Fe3O4颗粒[MNP(Fe3O4)]和5溴汉防己甲素(5-BrTet)联合治疗慢性髓系白血病的潜在可能性。采用流式细胞术、Wright染色和光学显微镜检测细胞凋亡情况;采用Western blot法检测细胞BCL-2和BAX表达水平。结果表明:MNP(Fe3O4)或5-BrTet与柔红霉素(DNR)联用对K562/A02细胞有细胞毒作用,而联合应用MNP(Fe3O4)和5-BrTet可协同促进DNR诱导K562/A02细胞凋亡,且细胞出现典型的凋亡形态改变,同时可见BCL-2表达下调,BAX表达上调。结论:MNP(Fe3O44)或5-Br/Tet联合DNR均能有效促进K562/A02细胞凋亡。两者联合应用作用增强,其机制可能与BCL-2表达下调及BAX表达上调有关。 相似文献