医学微生物学教学中学生能力培养的探讨

医学微生物学作为一门重要的医学基础课程,是以培养既具备系统理论知识、又有很强能力、并能适应社会发展需要的高素质人才为教学目的,就如何在微生物教学中培养学生能力进行了一些初步的探讨。     

抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体的构建及表达

目的:构建抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体,在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中获得稳定、高效表达,并对其生物学活性进行初步鉴定。方法:利用基因重组技术将本室前期构建的含有轻、重链嵌合基因的载体PMD18-T-VH和PMD18-T-VL双酶切获得重链、轻链基因后,克隆到前期改构的高效真核表达载体pCI-neo-M中,用脂质体法转染野生型CHO-K1细胞,在G418和氨甲喋呤(MTX)双筛选压力下筛选稳定高效表达细胞株,ELISA方法检测重组蛋白的表达,用Protein A HP Spin Trap纯化目的蛋白后进行SDS-PAGE和Western blot法检测,并通过体外中和实验检测其中和活性。结果:成功构建了抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体真核表达载体,转染CHO-K1细胞后经过3轮亚克隆筛选获得稳定表达抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体的细胞系,表达量约为1 mg/L,SDS-PAGE和Western blot法检测到目的蛋白的表达,微量细胞中和实验检测其中和活性,与亲本单克隆抗体(mAb)的中和活性相近。结论:抗汉坦病毒鼠/人嵌合抗体在CHO-K1细胞中成功表达,并具有良好的中和活性,为该抗体进一步的实验研究和临床应用奠定了基础。     

汉滩病毒76-118株G2S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及表达产物鉴定

目的：在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G2片段与S基因0．7kb片段嵌合基因的重组腺病毒．方法：构建含有汉滩病毒G2S0．7嵌合基因的转移载体pShuttle-G2S0．7，然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连，电转化E．coli JM109并用PCR方法进行筛选和鉴定，获得重组腺病毒Adeno-G2S0．7DNA，转染HEK293细胞得到重组腺病毒．进一步对重组腺病毒滴度和表达产物进行鉴定．结果：构建了含G2S0．7嵌合基因重组腺病毒，滴度可达10^13～10^15pfu／L；该重组腺病毒感染HEK293细胞后，表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G2的特异性单抗(mAb)所识别的融合蛋白．结论：利用腺病毒表达系统，成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G2生物学活性的融合蛋白G2S0．7，为进一步研究其免疫学特性奠定了基础．     

基于网络药理学探讨红曲-山楂治疗NASH的作用机制及关于NF-κB信号通路的机制验证

[目的] 基于网络药理学预测红曲-山楂治疗非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)的潜在分子机制,并采用蛋氨酸-胆碱缺乏NASH模型对核心信号通路之一的核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路进行实验验证。[方法] 通过中医药数据和分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)、PubChem、Swiss Target Prediction等数据库获取红曲、山楂的有效成分及靶点,运用基因组注释数据平台(Genome Annotation Database Platform,GeneCard)、在线人类孟德尔遗传(Online Mendelian Inheritance in Man,OMIM)等数据库获取NASH的疾病靶点,结合 Cytoscape软件构建药物-成分-靶点拓扑图;取交集靶点并筛选核心共靶基因,应用 STRING数据库构建蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)网络;应用Metascape进行基因本体(gene ontology,GO)和京都基因和基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)富集分析。建立大鼠NASH模型,通过一般情况、生化检验、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Masson染色、聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、免疫印迹等方式验证网络药理学分析结果。[结果] 通过网络药理学共筛选出18个活性成分,54个关键靶点,GO分析结果涉及炎症、代谢、自噬、肿瘤等,KEGG结果涉及NF-κB等经典信号通路。动物实验结果显示,红曲-山楂干预可显著改善NASH小鼠脂肪变性及炎症改变情况,降低组织中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)等炎症因子水平,降低核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)p65、NF-κB p50、NF-κB抑制蛋白-α(inhibitor of NF-κB-α,IκB-α)基因水平,下调NF-κB p65、NF-κB p50、磷酸化NF-κB-p65(phospho-NF-κB-p65,p-NF-κB p65)蛋白的表达。[结论] 红曲-山楂可能通过调控NF-κB信号通路,改善NASH模型小鼠的症状,本研究结果可为红曲-山楂的临床应用提供依据。     

钆塞酸二钠增强MRI功能性影像评分评估慢性肝病患者肝功能的临床价值

目的:基于钆塞酸二钠(Gd-EOB-DTPA)增强MRI肝胆期图像探讨功能性肝脏影像评分(FLIS)评估慢性肝脏疾病患者肝功能的临床价值。方法:回顾性分析58例接受Gd-EOB-DTPA增强MRI检查的慢性肝炎和肝硬化患者临床及影像资料,据白蛋白-胆红素(ALBI)分级系统将患者分为1级、2级和3级。基于Gd-EOB-DTPA增强MRI肝胆期图像分析FLIS与实验室相关生化指标和ALBI分级系统之间的相关性。此外,分析基于肝胆期信号强度测量的肝-脾信号强度比和肝-门静脉信号强度比等常用参数在不同ALBI分级之间的差异性。绘制受试者-工作特征(ROC)曲线评价FLIS与基于信号强度的常用参数鉴别ALBI 1级和ALBI 2～3级的诊断效能。结果:FLIS与白蛋白呈高度正相关,与总胆红素及球蛋白呈中度负相关(r=0.78、-0.52、-0.45,P<0.001)。FLIS及其3个征象(门静脉征象、肝实质增强及胆道对比剂排泄)与ALBI分级系统之间呈中度至强相关性(r=-0.770、-0.673、-0.659、-0.464,P<0.001)。基于信号强度的常用参数在不同ALBI分...     

甲状旁腺瘤四例误诊因素分析

甲状旁腺瘤临床表现多样且不典型，临床医生认识不足，容易误诊，甚至导致不可逆的残废［１，２］。我科１９９３～１９９７年共收治了４例，现报告如下。一、病例介绍例１男，５６岁。全身关节痛、乏力、不能站立、脊柱畸形，变矮２年，先后收入骨科、内分泌科诊治，初步...     

听神经病谱系障碍患者DIAPH3基因临床遗传学特征研究

目的对中国听神经病谱系障碍患者进行DIAPH3基因的筛查,了解中国听神经病谱系障碍人群中是否存在DIAPH3基因的新突变及热点突变位点,并结合临床表型与基因型进行研究,探讨DIAPH3基因相关的听神经病谱系障碍患者的临床遗传学特征。方法选取2003—2013年我院确诊的并接受血样采集的125例听神经病谱系障碍患者,同时选取100例听力正常的健康志愿者作为对照。采集外周静脉血,提取基因组DNA,采用直接测序法进行DIAPH3基因突变的检测,选用DNAStar软件和Sequence Scanner软件进行序列比对分析。同时分析患者的临床特征,从临床表型与基因型两方面进行系统研究,探讨DIAPH3基因相关的听神经病谱系障碍患者的临床遗传学特征。结果在125例听神经病谱系障碍患者中,共发现DIAPH3基因外显子区域的22处变异,包括可能致病突变7处(c.1425G>A,c.1749T>C,c.2605A>C,c.-44C>G,c.-179G>A,c.-27C>T和c.*196A>T)。结论此7种突变均于中国听神经病谱系障碍人群中发现,在国内外尚未见报道,可能为听神经病谱系障碍相关的突变,有待于进一步的研究。     

听神经病患者时域间隔感知及言语识别能力

目的研究听神经病患者的言语识别能力及时间灵敏度。方法选取听神经病患者24耳,感音神经性聋组26耳,正常组30耳,分别进行间隔觉察阈测试和最大言语识别率测试,运用SPSS18.0进行统计学分析。结果听神经病组中,听神经病组间隔觉察阈值与最大言语识别率呈部分负相关(r=-0.603,P<0.05),正常对照组间隔觉察阈值与最大言语识别率无相关性(r=-0.026,P>0.05)。结论 1间隔觉察阈测试有助于临床上对听神经病的鉴别诊断。2间隔觉察阈值较高的个体言语识别相对较差。3间隔觉察阈测试可从时域上评估助听器佩戴效果及耳蜗植入后效果。4无法行言语测听时,间隔觉察阈测试可提供参考。     

联合应用抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒的构建及鉴定

目的构建含有抗原加工递呈分子基因HSP70C的HTNV嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒。方法通过PCR扩增获得HSP70C基因,分别克隆入本室已构建的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7及pShuttle-pCAGGcS0.7中,进而构建新的重组腺病毒转移载体pShuttle-pCAG-GnS0.7-HSP70C及pShuttle-pCAG-GcS0.7-HSP70C。进一步通过双酶切将转移载体中的目的嵌合基因再分别克隆入腺病毒载体,得到重组腺病毒载体rAd-pCAG-GnS0.7-HSP70C、rAd-pCAG-GcS0.7-HSP70C,使用Pac I线性化后转染HEK293细胞,包装后获得重组腺病毒,感染HEK293细胞后用免疫荧光法检测表达产物。结果经过酶切、PCR扩增和测序结果显示,各重组腺病毒转移载体及重组腺病毒载体构建正确。免疫荧光实验检测到各重组腺病毒中目的蛋白的表达。结论成功制备了含抗原递呈分子HSP70C基因的汉滩病毒嵌合基因GnS0.7、GcS0.7重组腺病毒,为进一步研究构建的汉滩病毒重组腺病毒的免疫学特性奠定了实验基础。     

胰腺假性囊肿形成并真菌感染1例

病人,男,37岁,于2011年7月1日无明显诱因出现上腹痛,呈阵发性,无发热、寒战,无胸闷、憋气,无恶心、呕吐。无腹泻、便秘,无脓血便,无皮肤巩膜黄染,来我院就诊,给予抗炎、补液治疗后好转。上腹部动态增强CT扫描检查胰尾部可见一不规则囊性包块影,呈多房状,其内可见分隔,约5．0cm×4．6cm×4．1cm大小,