Astragaloside IV protects against ischemic brain injury in a murine model of transient focal ischemia

Astragalus membranaceus is a herbal medicine that has been used clinically in stroke patients in China for decades, but its potential neuroprotective effect against ischemic brain injury has not been experimentally tested. In this study, we investigated the effect of Astragaloside IV, a purified extract from Astragalus membranaceus, in a murine model of focal cerebral ischemia/reperfusion produced by transient (1.5 h) middle cerebral artery occlusion. As determined at 72 h after ischemia, post-ischemic treatment of Astragaloside IV (20 or 40 mg/kg) markedly and significantly (P < 0.03 vs. vehicle-treated animals) reduced infarct volume. Astragaloside IV treatment also decreased the levels of malondialdehyde, an indicator of lipid peroxidation, and increased the levels of the antioxidant enzymes glutathione peroxidase and superoxide dismutase in ischemic tissues. The results presented here provide the first evidence of a neuroprotective effect of Astragaloside IV in the model of ischemic brain injury. We suggest that the anti-infarction effect by Astragaloside IV may be derived at least in part from its antioxidant properties.     

转染抗mdr-1核酶基因逆转肿瘤细胞耐药性的研究

目的　研究转染抗mdr 1核酶基因能否实现对乳腺癌细胞多药耐药 (MDR)的持久逆转。方法　构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)为报告基因的核酶表达质粒并转染耐阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF 7/ADR和敏感株MCF 7,激光共聚焦显微镜观察EGFP的表达 ,流式细胞术检测细胞转染率和P 糖蛋白含量 ,逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)检测细胞的mdr1mRNA ,罗丹明 12 3(Rh12 3)外排实验检测细胞的P 糖蛋白转运功能。加入阿霉素 4 8h后 ,常规MTT法检测细胞存活率。结果　转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179后 ,两组实验细胞的mdr 1指数由 2 2 0分别降为 0 76和 1 4 0 ,P 糖蛋白表达率由 5 5 0 %降为 4 6 %和 18 2 % ,Rh12 3荧光强度由 2 2 0 %升为 4 6 2 %和 70 1% ,细胞存活率由 75 %降为 2 8%和 4 3%。并且核酶质粒可在细胞内稳定表达 ,转染RZ196、RZ179的实验细胞经G4 18筛选完成 2个月后 ,细胞质中仍可见明显的EGFP表达 ,细胞的mdr 1指数分别为 0 81、4 17,P 糖蛋白表达率分别为 5 2 %、19 5 % ,Rh12 3荧光强度分别为 5 1 4 %、71 6 % ,与刚完成筛选时的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论　转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179均可持久逆转肿瘤细胞MDR ,其中RZ196的逆转效果更好     

帕金森病大鼠模型额叶皮质的代谢及形态改变

目的：探讨帕金森病中大脑额叶皮质的形态及代谢改变。方法：大鼠实验组于6-OHDA毁损后用BIOSPEC47／30磁共振波谱仪(4．7T),采用点分辨波谱法对双侧额叶皮质行H-MRS检测,分析该区N-乙酰天门冬氨酸／肌酸(NAA／Cr)和胆碱／肌酸(Cho／Cr)比值的变化,并用电镜观察该区神经元及突触的形态变化。结果：实验组大鼠损毁侧额叶皮质．NA．A／Cr比值显著低于对侧,对照组两侧无显著差别;Cho／Cr比值在两组的两侧相比均无显著差别。电镜观察显示：损毁侧额叶皮质的突触数量较对侧减少,突触前、后膜和突触小泡结构异常,典型突触结构消失,树突棘出现大片低电子密度区,细胞器消失。结论：帕金森病大鼠模型损毁侧额叶皮质内存在神经元缺失或突触数量的减少,突触结构异常及功能异常。     

选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的研究

目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用抗TCRγδ单克隆抗体 (mAb)通过固相法加IL 2刺激选择性培养扩增γδT细胞 (简称“攻击洗淘法”) ;通过细胞生长曲线观察细胞增殖变化 ,采用免疫组化法和流式细胞仪检测鉴定γδT细胞纯度。结果 :PBMC和BALF中的γδT细胞在抗TCRγδmAb和IL 2存在下 ,无须再用抗原刺激 ,能维持较长时间增殖 ;经“攻击洗淘法”纯化后扩增的γδT细胞纯度达到 81%～99%。结论 :“攻击洗淘法”能高度纯化扩增外周血和BALF中的γδT细胞     

GM-CSF对MUC1基因疫苗抑制乳腺癌生长的增强作用

目的 :观察GM CSF有无增强MUC1基因疫苗对EMT6乳腺癌生长的特异性抑制作用。方法 :采用股四头肌肌肉注射法 ,将构建的MUC1基因疫苗pcDNA3.1 MUC1免疫雌性BALB/c小鼠 ,每 3wk 1次 ,共 3次。每次基因免疫后 1、3、5d ,皮下注射GM CSF 10 0 μL(1μg/ 10 0 μL)。最后 1次基因免疫后第 3周 ,接种表达MUC1的EMT6小鼠乳腺癌细胞。两周后观察、记录肿瘤的生长情况。于肿瘤细胞接种后第 4 3天 ,处死全部动物 ,称量肿瘤的质量。用 4h51Cr释放法检测小鼠脾特异性CTL的杀伤活性。结果 :接种肿瘤细胞后 4 3d ,MUC1基因疫苗加GM CSF组、MUC1基因疫苗组、pcDNA3.1加GM CSF组及pcDNA3.1组 ,EMT6肿瘤的大小依次为 (135± 33.8)mm3 、(2 5 0± 34.3)mm3 、(5 6 8± 4 3.6 )mm3 和 (5 96± 4 8.2 )mm3 ;平均瘤质量 (g)依次为 (0 .81± 0 .4 2 )g、(1.2 3± 0 .4 1)g、(2 .30± 0 .4 8)g及 (2 .2 8± 0 .5 8)g。与对照组相比较 ,MUC1基因疫苗组EMT6肿瘤的生长受到明显抑制 (P <0 .0 5 ) ;与单独MUC1基因疫苗组相比较 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组抗肿瘤生长的作用有显著差异 (P <0 .0 5 )。在效靶比为 10 0∶1、5 0∶1、2 5∶1和 12 .5∶1时 ,MUC1基因疫苗加GM CSF组特异性CTL对EMT6靶细胞的杀伤率 ,依次为 6 8.5 %、 5 3.4 %     

抗HPT单克隆抗体的制备与生物学特性鉴定

目的：制备抗潮霉素B磷酸转移酶(HPT)的单克隆抗体(McAb)，建立一种快速检测转基因作物中该选择标记基因HPT编码蛋白的方法。方法：用基因重组潮霉素B磷酸转移酶(HPT)抗原免疫BALB/C小鼠，采用杂交瘤技术制备McAb。选择不同的抗原决定簇与兔抗HPT多抗配对，建立双抗夹心ELISA检测HPT抗原。结果：筛选出四株稳定分泌抗HPT单抗的杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定均为IgG1，ELISA检测证实单抗可特异性识别细胞培养上清、重组子菌体裂解产物中及纯化出的HPT蛋白。结合位点测定实验表明4株单抗是针对不同的抗原决定簇，与多克隆抗体组成双抗夹心ELISA法，均可较好地检测到HPT抗原。检测的灵敏度为30ng／ml，且与别的无关抗原无交叉反应性。结论：4株杂交瘤细胞株特异性好，亲和力强，组成双抗夹心ELISA法可用于快速、灵敏检测HPT抗原。     

病毒性肝炎患者血清IL-6和T细胞亚群的关系

采用ＭＴＴ比色法和抗体致敏的红细胞花环试验（间接法）　检测了９１例病毒性肝炎患者血清ＩＬ－６和Ｔ细胞亚群。　结果显示，病毒性肝炎患者血清ＩＬ－６活性均明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１），以重型肝炎为最高；且与肝细胞损害程度呈正比（Ｐ＜０．０１）；ＣＤ４~＋细胞、ＣＤ４＋／ＣＤ８~＋均明显降低，与血清ＩＬ－６呈负相关；ＣＯ８~＋细胞明显增高，与血清ＩＬ－６呈正相关（Ｐ＜０．０１）。表明，血清ＩＬ－６与机体细胞免疫功能密切相关，二者互为因果，共同参与病毒性肝炎的免疫病理损害，可作为判断病情和预后及免疫调节治疗的监测指标。     

Brain Parenchymal and Microvascular Amyloid in Alzheimer's Disease

Brains of patients with Alzheimer disease/senile dementia of Alzheimer type (AD/SDAT) develop a progressive accumulation of amyloid, which deposits primarily in the form of characteristic parenchyma!'plaques' (senile or neuritic plaques/SP's) and as mural deposits in the walls of capillaries and arterioles (cerebral amyloid angiopa-thy/CAA). A major component of this amyloid is a small and unique peptide composed of 39–43 amino acids, beta/A4, which is cleaved from a much larger precursor protein (APP) that has several isoforms. Brain amyloid can be detected in autopsy or biopsy brain tissue by classical, immunohistochemical and ultrastructural (including immuno-electron microscopic) methods of varying sensitivity and specificity. Beta/A4 amyloid deposition is remarkably variable (e.g. predominantly parenchyma! or vascular, or a mixture of parenchymal and vascular) among patients with AD/SDAT. Despite its abundance in the brains of AD/SDAT patients, the precise role of beta/A4 in the pathogenesis of the neurological deficit, neocortical atrophy and progressive synapse loss associated with AD/SDAT has yet to be determined. However, mutations in the gene that encodes APP are clearly associated with familial AD syndromes in which there is significant brain amyloid deposition. CAA, in addition to its association with AD/SDAT, can result in hemorrhagic and (possibly) ischemic forms of stroke. Work with recently developed transgenic mice which express large amounts of beta/A4 in the central nervous system is likely to elucidate mechanisms by which the protein is selectively deposited in the brain in a parenchymal or microvascular form, and how it contributes to the pathogenesis of neurodegeneration.     

巨噬细胞肿瘤疫苗抗瘤作用的实验研究

目的：探究巨噬细胞肿瘤疫苗的细胞形态与表型特征,并观察其CTL反应的诱导效果。方法：分别采用透射与扫描电子显微镜、免疫荧光染色及流式细胞术等技术对巨噬细胞肿瘤疫苗的超微结构及CD14、CD68、CD80、CD86、MHCⅡ等分子进行测定。采用生长状态良好的H22肿瘤细胞移植于接种不同肿瘤疫苗的实验小鼠,分别采用直接测量法、MTT法及比色法测定瘤重量、瘤体积、肿瘤细胞杀伤率和培养上清液LDH活性。结果：巨噬细胞肿瘤疫苗细胞表面有许多的伪足皱褶、囊泡,胞浆内有大量大小不一、形态不规则的吞噬体；CD14、CD68、CD80、CD86及MHCⅡ的阳性细胞率分别为53.90%、98.60%、26.50%、90.20%和25.40%。小鼠体内实验结果显示,巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的肿瘤形成率、瘤体积与瘤重量明显低于对照组和石蜡诱生的巨噬细胞接种组（P均〈0.05）；巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的成瘤率与灭活肿瘤细胞接种组无明显差异（P〉0.05）,但瘤体积与瘤重量明显低于灭活肿瘤细胞接种组（P均〈0.05）。另外,巨噬细胞肿瘤疫苗接种组的淋巴细胞自体肿瘤细胞杀伤率和培养上清液LDH活性分别高于对照组、灭活肿瘤细胞接种组和石蜡诱生的巨噬细胞接种组。结论：巨噬细胞肿瘤疫苗具备巨噬细胞的典型特征,该种细胞接种后可诱导机体产生特异性抗肿瘤免疫反应。