抗磺胺嘧啶单克隆抗体的制备及其ELISA检测试剂盒的建立

目的 :制备抗磺胺嘧啶 (SD)的单克隆抗体 (mAb) ,并研制SD快速检测试剂盒。方法 :以SD BSA的偶联物作为抗原免疫BALB/c小鼠 ,采用杂交瘤技术制备抗SD的mAb。并用抗SDmAb和SD HRP酶标抗原 ,建立一种可检测样品中的游离SD分子的竞争法ELISA。结果 :获得 5株可分泌抗SDmAb的杂交瘤细胞 1A1、1B8、1E4、2C1和 3D9。其中 1A1、1B8和 1E4为IgG1,2C1和 3D9为IgG2。试剂盒的半数抑制率 (I5 0 )为 9.3μg/L ,理论最低检出量达到 0 .6μg/L ,对于不同样品中SD的回收率均高于 60 %。除与SD反应以外 ,该试剂盒对其他磺胺类药物检测的交叉反应均小于 3 %。结论 :成功地制备了抗SD的mAb ,并建立了一种可快速检测各种样品中SD的竞争ELISA试剂盒     

CpG-ODN诱导白血病HL60细胞分化和凋亡的研究

目的:研究含CpG基序的寡核苷酸对白血病HL60细胞的作用。方法:设计合成含CpG基序的寡核苷酸(CpG-ODN)、不含CpG基序的寡核苷酸(nonCpG-ODN)和含甲基化CpG基序的寡核苷酸(ZpG-ODN)分别作用于白血病HL60细胞,MTT法测定HL60细胞抑制效应,硝基四氮唑蓝还原实验和细胞表面CD14分子表达状况分析HL60细胞诱导分化结果,流式细胞仪和透射电镜观察HL60细胞的凋亡现象,免疫组化检测HL60细胞后caspase3、Bcl-2和Bax的表达状况。结果:CpG-ODN对白血病HL60细胞有诱导分化和诱导凋亡作用,nonCpG-ODN和ZpG-ODN无此作用。结论:CpG-ODN可直接诱导白血病HL60细胞分化和凋亡,此为白血病免疫治疗提供了新的途径。     

眉部运动的显微外科解剖学研究及其临床意义

目的：为解决除皱术中眉毛上提效果欠佳,不够持久的问题。方法：对10例新鲜尸体进行了大体及显微解剖。结果：证实了额肌深面“滑动层”和“滑动间隙”的存在,观察了眉内侧2／3自皮肤向深面发出固定到眉嵴处的眉毛支持韧带,外侧上方的颞融合线和下方的眉限制韧带静态固定结构,上述结构决定了眉毛的形态;阐述了额肌、皱眉肌和降眉肌的眉毛动力机制,探讨了老年性外侧眉毛下垂主要由于外侧的滑动脂肪垫向下“疝出”所致。结论：通过破坏“滑动间隙”,切断颞融合线和眉限制韧带,切除外侧滑动脂肪垫,达到眉部上提的良好、持久效果。     

高压氧治疗激素诱导兔股骨头缺血性坏死的病理观察

目的探讨高压氧(hyperbaricoxygen,HBO)治疗激素诱导股骨头缺血性坏死(steroidinducedavascularnecrosisofthefemoralhead,SANFH)的病理改变。方法采用大剂量醋酸泼尼松龙诱发成年兔SANFH,然后用HBO治疗;应用光镜和电镜观察组织病理学及超微结构变化。结果多数骨小梁周围可见骨母细胞增生、偶见破骨细胞增生,髓腔内脂肪细胞逐渐减少,造血组织增生;电镜发现骨小梁内早期即出现幼稚骨细胞和胶原原纤维合成。结论SANFH经HBO治疗后增强破骨细胞和成骨细胞活性以及胶原纤维生成,有助于降低骨内压、改善微循环、促进骨组织修复。     

一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变分析

目的分析一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变，并探讨缝隙连接蛋白beta2(gap junction protein beta 2，GJB2)基因235delC突变是否会加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋症状。方法对一个母系遗传性非综合征型耳聋核心家系72个成员取外周血提取DNA，经聚合酶链反应扩增后，利用Alw26Ⅰ限制性内切酶酶切及直接测序验证，对其线粒体DNA突变进行研究；利用ApaⅠ限制性内切酶酶切及直接测序验证，筛查核心家系中GJB2基因235delC突变情况，并对GJB2基因235delC和线粒体A1555G突变的关系进行研究。结果在27名母系成员中均发现具有线粒体A1555G突变，呈母系遗传；具有耳聋表型的为21人(77．8％)，家族外显率高；所筛查的包括配偶在内的72名个体中，仅3例具有GJB2基因235delC杂合子突变，且均出现在母系成员中，但3例的耳聋表型却不同。结论线粒体A1555G突变是本家系耳聋遗传易感性的基础，在该家系中GJB2基因的235delC杂合子突变未加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋。     

γ型干扰素、CD4+CD25+调节性T细胞与自身免疫病

γ型干扰素在适应性免疫应答中起重要作用.在MHC-Ⅱ类分子限制性自身免疫病中,T细胞反应主要以1型辅助性T细胞(Th1)为主,并伴有IFN-γ水平增高,而剔除小鼠胸腺来源的CD4 CD25 调节性T细胞则导致自身免疫病的发生,有研究认为调节性T细胞在诱导免疫耐受产生的过程中起关键性作用.IFN-γ及其受体缺陷小鼠的CD4 CD25 调节性T细胞的免疫抑制能力明显受损,这表明IFN-γ及其受体在CD4 CD25 调节性T细胞免疫调节作用中以及在自身免疫病发生中可能发挥重要而复杂的免疫调节作用.本文仅就IFN-γ与调节性T细胞及自身免疫病发病三者之间关系的研究进展进行简要综述.     

北京地区人乳头瘤病毒16型感染及其E6/E7基因变异与宫颈病变的相关性研究

目的探讨HPV16感染及其E6/E7基因变异与宫颈病变的相关性。方法采用导流杂交技术进行HPV感染分型检测,PCR扩增出80份HPV16阳性宫颈病变的E6/E7基因、克隆入pMD18-T载体,双向测序分析基因变异与宫颈病变相关性。结果HPV16在宫颈病变患者中的检出率最高为33.3%(154/463),与病变程度相关(P<0.05)。E6/E7基因72份测序成功,DNA序列变异发生率为88.9%(64/72)。氨基酸序列E6-D32E(T96G)和E7-N29S(A86G)位点突变同时伴随存在,D32E/N29S的检出率为38.9%(28/72),与宫颈病变程度相关(P<0.05)。结论HPV16是北京地区来源的宫颈病变中最常见的致病型,其D32E/N29S变异与病变程度相关。     

人外周血T细胞活化状态对血卟啉单甲醚吸收的影响

目的：观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。 方法： 以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法常规分离人外周血淋巴细胞，分别以多克隆刺激剂PHA和PDB+Ion刺激T细胞活化，同时设立未加刺激剂的静止T细胞作对照。在评价孵育浓度对T细胞吸收HMME的影响时，将上述处理的淋巴细胞分别与0、5、10、20、30和40 mg/L的HMME孵育1 h，经CD3抗体染色后进行T细胞HMME吸收分析。在评价T细胞活化状态对HMME吸收量与孵育时间相关性的影响时，将培养的淋巴细胞与10 mg/L的HMME分别孵育0-160 min后进行检测。 结果： T细胞的活化使其HMME吸收量的孵育浓度相关曲线以及孵育时间相关曲线较静止T细胞右移和上移。在一定孵育浓度范围内(5-20 mg/L)，活化T细胞对HMME的吸收量明显大于静止T细胞，差别具有统计学意义。然而，随着孵育浓度的进一步增加，活化T细胞与静止T细胞对HMME吸收量的差异逐渐减小。在10 mg/L HMME孵育浓度的条件下，不论活化与否，随着孵育时间的延长，T细胞内HMME的吸收量在逐渐增强。在15-60 min之间，活化T细胞HMME吸收量明显高于静止T细胞。 结论： 活化T细胞与静止T细胞HMME吸收量的差别取决于其孵育浓度和孵育时间，在一定孵育浓度和孵育时间范围内，活化T细胞HMME的吸收量明显高于静止T细胞，提示这可能有助于形成选择性删除活化T细胞的剂量关联和时间关联的HMME-PDT治疗窗口。     

碘化钠对人甲状腺上皮细胞TNF-α、IL-1β分泌的影响

为研究碘化钠 (NaI)对人甲状腺上皮细胞 (TEC )分泌细胞因子TNF α和IL 1β的影响 ,以探讨碘在GD病 (GD )发病中的可能机制 ,取手术切除的GD病患者甲状腺组织和甲状腺腺瘤患者瘤旁正常甲状腺组织 ,进行细胞培养。以不同浓度的NaI (10 8～ 10 3 mol/L )刺激单层培养的甲状腺细胞 ,采用放射免疫测定技术测定刺激前后甲状腺细胞培养上清液中细胞因子TNF α和IL 1β的含量。同时以透射电镜观察NaI刺激后甲状腺细胞的形态学改变。结果 :(1)正常甲状腺细胞能分泌少量的TNF α和IL 1β。GD的甲状腺细胞TNF α和IL 1β的分泌量与正常TEC相比显著增加 (P <0 0 1) ;(2 )当NaI浓度为 10 8～10 3 mol/L时 ,正常人甲状腺细胞TNF α、IL 1β的分泌量与 0mol/L组相比无显著性差异 (P >0 0 5 ) ;透射电镜示正常甲状腺细胞无损伤型改变 ;(3)当NaI浓度为 10 6～ 10 3 mol/L时 ,GD甲状腺细胞TNF α的分泌量显著增加 (P <0 0 5 ) ;当NaI浓度为 10 8～ 10 3 mol/L时 ,GD甲状腺细胞IL 1β的分泌量显著增加 (P <0 0 5 )。NaI浓度超过 10 6mol/L时 ,透射电镜示GD甲状腺细胞出现损伤型改变。表明高浓度的碘不仅造成GD甲状腺细胞的直接损伤 ,而且可以增加甲状腺细胞细胞因子TNF α和IL 1β的分泌 ,特别是在GD甲状腺细     

从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制

目的:从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制。方法:复制急性失血性休克大鼠模型, 分为假手术对照组;单纯休克模型组;休克+生理盐水复苏组;休克+四逆注射液复苏组。四逆注射液(浓度1000g生药/L), 剂量0.1mL/200g大鼠。用生理盐水或四逆注射液治疗3h后处死动物并取组织。测定各组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平, 一氧化氮(NO)水平。采用免疫组化染色法, 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝细胞中的变化特点。RT-PCR观测肝细胞iNOS和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化。结果:模型组在休克1h后SOD活性明显低于对照组(P＜0.01)、MDA水平明显高于对照组(P＜0.01)。四逆汤组复苏3h后肝组织SOD明显高于生理盐水组(P＜0.01)、MDA低于生理盐水组(P＜0.01)、NO水平明显高于生理盐水组(P＜0.01)。生理盐水组iNOS在肝细胞中染色阳性单位明显高于四逆汤组(P＜0.05)。生理盐水组促进iNOSmRNA的表达。四逆汤组eNOSmRNA的表达增强。结论:四逆汤通过清除氧自由基, 升高NO, 改善肝组织微循环, 减少诱导型iNOS表达的各种因素, 理论上减轻了NO与氧自由基生成的ONOO的细胞毒作用和血管的低反应性, 并对肝脏起到保护作用。