应用RNA干扰技术抑制神经元E3B1基因表达及对轴突生长的影响

目的:探讨应用RNA干扰(RNAi)技术抑制神经元E3B1基因表达及其对轴突生长的影响.方法:选择针对E381(NCBI:NM-024397)RNAi的3个靶位点Abil1、Abil2、Abil3和1个不针对任何mRNA的RNAi靶位点(阴性对照)以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH,阳性对照),用带有neoR选择标志和GFP绿色荧光标志的真核表达载体pGenesil-1构建E381 RNAi质粒,分别转染培养的神经元,在荧光显微镜下观测转染率,经G418筛选得到单一的转染细胞,并用Western blot法检测各转染组神经元E3B1蛋白的表达情况,选出具有最佳抑制效应的siRNA转染神经元,加人轴突生长抑制物,观测轴突生长情况.结果:成功构建了RNAi质粒,各组细胞的转染率相近,均为34%左右.与阴性对照组相比,Abil1、Abil2和Abil3转染组细胞内E3B1 mRNA的表达都受到了不同程度的抑制,其中Abil3转染组细胞的E381 mRNA和蛋白的表达抑制最为显著,加入轴突抑制剂后Abil3转染组神经元轴突仍能继续生长.结论:应用RNA干扰技术能高效特异地抑制神经元E3B1基因的表达,E3B1基因的表达下调可促进神经元轴突的生长.     

MR显微成像检测活体阿尔茨海默病转基因小鼠老年斑沉积的效果

目的利用MR显微成像技术研究阿尔茨海默病转基因小鼠老年斑的沉积情况。方法2只17个月龄阿尔茨海默病转基因[V717I]小鼠和2只野生型小鼠，行活体T2WI，然后对照影像定位结果进行组织学切片及免疫组织化学染色。观察T2WI中老年斑的沉积情况以及其与免疫组织化学染色结果的对应关系。结果转基因小鼠T2WI上显示大脑皮层和海马区可见点状低信号，且部分低信号可以和组织学切片所显示的老年斑相对应；野生型小鼠T2WI未见明显的低信号，免疫组织化学染色也未见到染色阳性的斑块。结论MR显微成像技术检测老年斑的沉积是可行的，且可用来特异性地诊断阿尔茨海默病。     

骨髓基质细胞移植促进大鼠局灶性脑损伤血管生成的实验研究

目的研究骨髓基质细胞（BMSCs）移植对大鼠局灶性脑损伤血管生成的影响，探讨BMSCs移植修复大鼠脑损伤的机制。方法制备大鼠局灶性脑损伤动物模型，进行BMSCs移植，通过免疫组织化学、电镜等观察移植局部内皮细胞及微循环的变化。结果BMSCs移植后，局部凝血因子FⅧ染色阳性细胞数增加，染色加深，出现血管样结构；局部微血管内膜较光滑，内皮细胞间可见紧密连接，细胞核形态较规则，基底膜较完整，微血管管腔受压缓解。结论BMSCs移植促进损伤区周围内皮细胞增殖和新生血管形成。损伤区局部微循环得以改善进而修复脑损伤。     

经食管超声心动图在胸主动脉瘤介入治疗中的应用

血管内修复术创伤性小，可应用于治疗多种主动脉疾病，如动脉瘤和主动脉夹层。经食管超声心动图(TEE)对主动脉疾病很敏感。术前可通过TEE找到撕裂的内膜片、发现内膜破口、区分类型、区分真假腔及了解心脏状况。术中TEE用于引导导管插至正确位置、观察支架放置过程、监测心功能和室壁运动状况、评价手术疗效。术后随诊通过TEE观察支架内血流情况、检出并发症如内漏等。     

早期大剂量维生素C对重症急性胰腺炎大鼠核因子-κB的影响

目的:观察早期大剂量应用抗坏血酸(维生素C)对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的核因子-!B(NF-!B)的影响,研究其作用机制。方法:将72只SAP模型SD大鼠随机分成3组,每组各24只。A组:由大鼠股静脉滴注生理盐水5 ml/kg。B组:大鼠股静脉滴注Vit C 15 mg/kg加生理盐水至5 ml/kg。C组:由大鼠股静脉滴注Vit C 150 mg/kg加生理盐水至5 ml/kg。另取8只SD大鼠作为正常对照组。各组分别于8 h和24 h处死8只大鼠,采血测淀粉酶、脂肪酶、维生素C(PV-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、TNF-αI、L-6。大鼠处死时分别取胰头组织3份,一份组织HE染色,行光镜检查,按Kusske的方法,对水肿、炎症、出血和坏死分别评分;一份制成超薄切片,行电镜检查;另一份SP法进行免疫组化染色,检测NF-!B的表达。每组另外8只大鼠观察3 d内存活情况,计算3 d成活率。结果:各组大鼠3 d内的生存率为正常对照组100%(8/8),A组0%(0/8),B组12.5%(1/8),C组50%(4/8),C组的3 d生存率显著高于其他两组(P<0.05)。各组的4项病理学评分均高于正常对照组(P<0.01),C组的4项病理学评分均低于A、B组(P<0.05)。透射电镜检查示C组中分泌颗粒较少,其包膜完整、内质网轻度肿胀、线粒体清晰,未见大片坏死。SAP大鼠体内淀粉酶、脂肪酶、细胞因子TNF-α和IL-6的水平明显增高,血清SOD和P-VC降低,胰腺组织中NF-!B活化阳性胰腺细胞数明显增多。C组的血清淀粉酶和脂肪酶低于A、B组(P<0.05),SOD和P-VC水平高于A、B组(P<0.05),血清TNF-αI、L-6水平低于A、B组(P<0.05),胰腺组织NF-!B活化水平低于A、B组(P<0.05)。结论:早期大剂量应用Vit C有助于及时提高SAP大鼠的P-VC、E-SOD水平,降低体内淀粉酶、脂肪酶、TNF-αI、L-6水平,其作用机制可能与大剂量Vit C抑制SAP大鼠体内NF-!B活化、在整体水平上抑制细胞因子基因表达、有助于机体免受自由基和过量细胞因子的损伤及减轻胰腺组织的病理性改变等因素有关。     

Effect of nuclear factor-κB p65 ASOND on I typ collagen expression and rat hepatic stellate cells proliferation

Objective Sstudy effect of nuclear factor-κB ASOND on I type collagen expression and rat hepatic stellate cells(HSC)proliferation.Methods Rat HSCs were separated by affusing and digestingof Ⅳ type collagenenzyme and density acentric method.Lipid-mediated NF-κB p65 ASOND(0.001,0.01,0.1,1μmol/L)Was transferred into rat HSCs.Toxicity of HSCs caused by NF-κB p65 ASOND and activity of LDH were determined by trypan blue staining.Proliferation affection of transferring NF-κB p65 ASOND into HSCs was determined by MTT.In different concentration NF-κB p65 ASOND.expression of Ⅰ type collagen stimulated by 1mg/L TNF-αwas determined by RT-PCR and ELISA.Results After transfection of NF-κB p65 ASODN,expression of NF-κB protein in HSCs was decreasing.Toxicity experiment indicated that NF-κB p65 ASOND of different concentration(0.001,0.01,0.1 and 1.0 μmol/L)had no effect on HSCs livability and LDH activity(P<0.05).Four different concentration NF-κ B p65 ASOND could restrain HSCs proliferation stimulated by 1 mg/L TNF-α.The expression of I type collagen and mRNA stimulated by 1mg/LTNF-αwas increased,and had a positive correlation with concentration(P>0.05).Conclusion NF-κB p65 ASOND may depress NF-κB activity to restrain HSCs proliferation and Ⅰ type collagen expression,and reduce extracellular matrix.     

AdEasy1／Cbfa1诱导间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

目的：观察核心结合因子a1（Cbfa1）对兔骨髓间充质干细胞（MSCs）向成骨细胞分化的诱导作用。方法：体外分离培养兔骨髓MSCs，用AdEasy1／Cbfa1。转染MSCs，在转染后3d,1、2、3和4周时，组织化学和免疫组化等方法检测成骨标志碱性磷酸酶和骨钙素的表达。结果：AdEasy1／Cbfa1转染后的兔骨髓MSCs表现出与成骨细胞相似的形态，并且表达碱性磷酸酶和骨钙素。结论：Cbfa1可诱导兔骨髓MSCs向成骨细胞分化。     

老年腹膜透析患者血压昼夜变化的观察

目的 观察老年腹膜透析患者杓型血压的检出率及影响因素.方法 50例60岁以上稳定的维持性腹透患者,夜间收缩压较白天收缩压降低超过10%为杓型血压;检测血清白蛋白及血、透析液和尿液中的尿素氮和肌酐水平,计算透析充分性;生物阻抗分析体液分布的状况;ECOG和Karnofsky活动指数评价患者的活动能力.结果 45例患者符合欧洲高血压学会指南的动态血压记录标准,即白天血压测量次数大于14次,夜间血压测量大于7次的.透析时间(27.6±24.8)个月,男女比为22/23,11例(24.4%)患者存在杓型血压(杓型血压组),两组患者年龄、透析时间、平均体质指数、体表面积、降压药的剂量、ECOG和Karnofsky 活动指数差异无统计学意义;杓型血压组女性患者、无糖尿病和血清白蛋白含量明显多于或高于无杓型血压组[分别为9例(81.8%)和14例(41.2%)、11例(100%)和20例(58.8%)、(38.2±3.04)和(35.9±2.89)g/L],差异均有统计学意义(P＜0.05);细胞外液、细胞内液、实际体质标准化的细胞外液、细胞外液和细胞内液与总体水的比值无杓型血压组明显高于杓型血压组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 老年腹膜透析患者杓型血压以女性、无糖尿病患者居多,杓型血压的形成可能与容量负荷、营养、炎症和动脉硬化有关.     

光敏剂ATX-S10.Na(Ⅱ)在大鼠脑胶质瘤模型不同组织中分布的实验研究

目的探讨新型光敏剂ATX-S10.Na(Ⅱ)在大鼠脑胶质瘤模型不同组织中的分布和代谢。方法在已经建立的SD大鼠C6胶质瘤模型中,经尾静脉注射ATX-S10.Na(Ⅱ)(20mg/kg)。分别于1h、2h、4h、8h、12h和24h后处死并取出大鼠的血液、皮肤、肿瘤组织、瘤周组织以及对侧正常脑组织,应用荧光分光光度计连续测定ATX-S10.Na(Ⅱ)在大鼠C6胶质瘤模型各种组织中的分布和代谢。结果ATX-S10.Na(Ⅱ)的药物浓度于静脉注射2h后在肿瘤组织中达到峰值,以后8h维持在一个持续较高的水平,显著高于对侧正常脑组织及瘤周组织。而正常皮肤和脑组织中也吸收少量的药物,但是它们峰值很低,并且几乎均在4h内完全代谢消失。结论新型光敏剂ATX-S10.Na(Ⅱ)具有优良的胶质瘤组织与正常脑组织的对比度,并且能快速从体内清除。     

延迟一期修复外周神经损伤38例报告

目的 探讨应用显微外科技术延迟一期修复四肢外周神经损伤的治疗体会。方法 应用显微外科技术延迟一期修复各种原因所致的四肢外周神经损伤38例41条，手术方法包括神经瘢痕松解、神经直接缝合术等。结果 术后随访6个月～7年，平均33个月，优良率为81．6％。结论 对失去一期修复手术治疗机会的周围神经损伤患者应尽早行延迟一期手术，可取得较好疗效。