“区间指纹图谱”的构思与研究

目前指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效手段。近年来对中药指纹图谱进行了很多探索性研究,但是真正将指纹图谱作为质量标准的只有中药注射剂,而其他的中药指纹图谱研究多只停留在研究阶段。造成中药指纹图谱研究瓶颈的原因很多,如天然产物成分的复杂性,指纹图谱的分析结果中往往有大量的杂质峰群存在,而现有的分析手段很难使这些杂质峰群达到很好的分离,为此提出了构建“区间指纹图谱”。对“区间指纹图谱”构建程序、建立方法、构建模式、应用问题等进行了较全面地研究和分析,并以神安颗粒为例进行了分析。     

组织蛋白酶G在光老化皮肤成纤维细胞中的表达及意义

目的 探讨组织蛋白酶G（cathepsin G）在光老化皮肤中的表达变化及意义.方法 培养原代人皮肤成纤维细胞,8-甲氧补骨脂素＋长波紫外线（8-MOP＋UVA）法体外诱导培养细胞光老化.衰老相关-β半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色证明老化诱导成功.蛋白印迹技术及反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）对比检测光老化成纤维细胞及正常成纤维细胞组织蛋白酶G蛋白及基因表达.结果 Western印迹法结果 示光老化诱导组组织蛋白酶G表达上调为单UVA诱导组、单8-MOP孵育组及空白组的（1.70±0.028）倍.实时RT-PCR结果 示光老化细胞组织蛋白酶G mRNA表达上调为空白组的（1.42±0.09）倍（P〈0.01）.结论 组织蛋白酶G在光老化成纤维细胞中高表达,可能通过改变细胞外基质成分和激活基质金属蛋白酶参与皮肤光老化所致.     

双标记原位杂交法检测间期细胞BCR/ABL融合基因

目的 :应用双标记原位杂交方法检测 BCR/ ABL融合基因。方法 :BCR基因探针用地高辛标记 ,碱性磷酸酶显色 ;ABL基因用3 H- d ATP标记 ,核子乳胶放射自显影。结果 :检测 9例初治的慢性粒细胞白血病 ( CML)病人均为阳性 ,阳性细胞比例为 93% ;检测 CML来源的 K5 62细胞株阳性细胞占 98.8% ;正常人假阳性率为 0 .75 %。结论 :该方法简便、快速 ,适用于 CML微小残留病的检测     

鼻咽癌转移相关的分泌蛋白质的筛选

目的：筛选鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC）转移相关的分泌蛋白质,为阐明NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供实验依据。方法：应用二维凝胶电泳（two-dimensional electrophoresis,2-DE）技术分离一对来自同一亲本,具有不同转移潜能的NPC细胞系5-8F和6-10B细胞的分泌蛋白质,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)和电喷雾-四极杆-串联质谱(ESI-Q-TOF MS/MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。Western印迹法检测差异分泌蛋白质nm23-H1在两株细胞中的表达水平。结果：建立了5-8F和6-10B分泌蛋白质的2-DE图谱,质谱分析鉴定出14个非冗余的分泌蛋白质,其中Oncoprotein18等蛋白质在高转移潜能NPC细胞系5-8F中的表达水平高于无转移潜能的NPC细胞系,而nm23-H1等蛋白质在5-8F细胞系中的表达水平低于6-10B细胞系。Western印迹分析证实了nm23-H1在5-8F和6-10B细胞分泌蛋白质中的差异表达水平。结论：所鉴定的14个非冗余的差异分泌蛋白质为研究NPC转移机制以及筛选NPC转移分子标志物提供了实验依据。     

寰枢椎脱位外科治疗与疏通督脉瘀阻相关性研究

目的:探讨寰枢椎脱位外科治疗与疏通督脉的相关性。方法:2004年6月至2010年6月,对113例(男65例,女48例;年龄8～64岁,平均42.6岁)寰枢椎脱位患者按TOI分型分为T1、T2、O、I4组,并给予外科治疗,主要包括牵引、手术复位融合固定。分别对比各组治疗前后寰椎平面SAC(脊髓有效空间)、督脉经络瘀阻症候积分、JOA评分、NDI评分(颈椎功能障碍指数)。结果:T1、T2、O、I组患者寰椎平面SAC术前分别为(13.34±3.21)、(10.43±2.42)、(7.89±3.14)、(10.50±0.71)mm,末次随访分别为(16.02±1.42)、(15.34±1.87)、(14.49±1.58)、(12.50±0.71)mm;督脉经络瘀阻证候积分术前分别为(8.37±1.87)、(6.87±1.35)、(5.17±1.13)、(7.50±0.71),末次随访分别为(10.59±0.94)、(10.25±1.01)、(8.41±1.31)、(9.0±0);JOA、NDI评分较术前明显改善。结论:采用TOI外科分型治疗寰枢椎脱位,在明显改善神经功能的同时,也有效地缓解督脉经络瘀阻的症状,表明外科治疗与疏通督脉有密切相关性。     

小鼠肝细胞SMAC基因特异干扰载体的构建及慢病毒包装

目的构建并鉴定小鼠SMAC特异干扰载体,并进行慢病毒包装。方法针对小鼠SMAC基因设计并合成3对干扰序列siRNA1、siRNA2、siRNA3及一对阴性对照序列siRNAn,脂质体法转染小鼠肝细胞,Real time PCR法筛选出最佳干扰序列。依据该最佳干扰序列合成DNA oligo,连接GV115载体,获得重组干扰质粒,PCR鉴定阳性克隆并测序鉴定构建的正确性。将该重组干扰质粒与辅助质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞,进行慢病毒包装,收集细胞上清并浓缩,梯度稀释法测定病毒滴度。多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果 3条siRNA对肝细胞SMAC mRNA均有不同程度的抑制作用,其中siRNA1的抑制效应最强,抑制效率达到70.3%。依siRNA1片段合成DNA oligo,并与慢病毒载体连接,测序显示其构建正确,梯度稀释法测定慢病毒滴度为6×108TU/ml。结论成功构建了小鼠SMAC基因特异干扰性的慢病毒,为研究SMAC基因在肝衰竭中的作用奠定基础。     

一氧化氮、诱生型一氧化氮合酶和血管内皮生长因子C在鼻咽癌中的作用

目的检测鼻咽癌组织中诱生型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）及血管内皮生长因子C（vascular endothelial growth factor C,VEGF-C）表达的意义以及它们之间的关系,并检测一氧化氮（nitric oxide,NO）对鼻咽癌细胞株生长的影响及对VEGF-C表达的调节作用。方法用免疫组化法检测57例鼻咽癌标本以及20例非鼻咽癌鼻咽上皮组织标本中VEGF-C以及iNOS的表达,另以NO供体S-亚硝基-N-乙酰基-DL-青霉胺（S-nitroso-N-acetylpenicillamine,SNAP）对鼻咽癌细胞系TWO3进行处理,通过MTT法检测NO对TWO3生长的影响,并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测NO对TWO3的VEGF-C表达调控作用。结果VEGF-C和iNOS在鼻咽癌组中表达阳性率显著高于对照组（P〈0.05）,鼻咽癌组织中VEGF-C表达在不同T、N以及临床分期组差异有统计学意义（P〈0.05）,但是不同年龄性别组表达差异无统计学意义（P〉0.05）。鼻咽癌组织中iNOS的表达在不同T、N级,临床分期,年龄以及性别组中表达差异无统计学意义（P〉0.05）;鼻咽癌组织中iNOS与VEGF-C表达显著相关（P〈0.05）;高浓度NO能抑制TWO3生长,且NO能调节TWO3的VEGF-C的转录表达。结论VEGF-C及iNOS可能对鼻咽癌的发展起促进作用,且在鼻咽癌中NO可能调节VEGF以及VEGF-C表达调节。     

动态监测尿微量蛋白对危重患者预后的价值

目的 探讨尿微量蛋白作为危重患者预后指标的可行性。 方法 前瞻性动态监测ICU危重患者尿微量白蛋白(MA)、α1-微球蛋白(α1-MG)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、视黄醇结合蛋白(RBP)，并与目前临床常用的预后评估系统APACHEⅡ、SOFA进行比较。结果 相关分析结果显示尿MA、α1-MG、NAG、住ICU时间、机械通气时间、APACHEⅡ评分、SOFA与死亡呈正相关。尿MA、α1-MG、住ICU时间、机械通气时间、APACHEⅡ评分、SOFA升高与多器官功能不全综合征(MODS)发生呈正相关。尿MA(r=0.397)、α1-MG(r=0.448)和RBP(r=0.465)与APACHEⅡ评分显著相关。APACHEⅡ评分、SOFA评分、MA、α1-MG、RBP、NAG预测死亡的ROC曲线下面积分别是0.875﹙P < 0.05﹚、0.825﹙P < 0.05﹚、0.820﹙P < 0.05﹚、0.730、0.530、0.620。结论 动态监测尿MA、α1-MG、RBP可作为危重患者预后的临床指标。     

铅暴露对某铅蓄电池企业719名作业工人血清生化指标的影响

目的 探讨铅暴露对作业工人血清生化指标的影响。
方法 选取武汉市某铅蓄电池企业719名现场铅作业人员作为调查对象,按《职业健康监护技术规范》的要求对其进行在岗期间职业健康体检,采用石墨炉原子吸收光谱法和自动生化分析仪分别测定研究对象血铅及血清生化指标,包括丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）和门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）。以400 μg/L为界,将人群分为血铅水平≥ 400 μg/L的高血铅组和血铅水平 < 400 μg/L的低血铅组。采用多元线性回归模型分析719名铅作业人员的血铅与血清生化指标的相关性。
结果 低血铅组与高血铅组的血铅均值分别为（221.71 ±105.15）μg/L和（583.24 ±153.54）μg/L。血清ALT异常56名,异常率为7.79%;血清AST异常20名,异常率为2.78%。低血铅组ALT为（23.68 ±18.47）U/L,高血铅组ALT为（23.07 ±14.48）U/L;低血铅组AST为（21.88 ±10.18）U/L,高血铅组AST为（23.71 ±17.71）U/L;两组以上指标差异均无统计学意义（P>0.05）。多元线性回归结果显示:血铅每增加1 μg/L,工人血清AST升高0.004 U/L。
结论 血铅水平与血清AST值存在正相关关系,铅的蓄积可造成对肝脏组织的损害。
     

荧光示踪法与染料法探测兔甲状腺前哨淋巴结有效性研究

目的 比较荧光示踪法与染料法探测兔甲状腺前哨淋巴结的有效性,为临床开展甲状腺前哨淋巴结活检提供实验依据.方法 30只实验兔共计60侧甲状腺,每侧甲状腺分别注射600 μmol· L-1的吲哚菁绿(ICG)和5 g· L-1的亚甲蓝0.02 mL.切除所探测的组织进行病理检查,分别记录两种方法检测的淋巴结数量,比较两种方法的准确率和检出率.结果 荧光探测法和亚甲蓝染料法检出兔甲状腺前哨淋巴结的准确率分别为92.7%和70.8%,检出率分别为91.7%和75.0%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在探测兔甲状腺前哨淋巴结方面荧光示踪法优于亚甲蓝染料法,具有较高的检出率和准确率.